大肠杆菌聚合酶 I 大片段

无动物源

无载体

5 U/μL

功能和特点

表达系统: E. coli
Accession #: 2KFZ_A,P00582
生物活性: One unit is the amount of enzyme required to catalyze the incorporation of 10nmol of deoxyribonucleotides (dNTPs) into a polynucleotide within 30 minutes at 37℃.

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货号 (SKU)	包装规格	是否现货
rp221816-200U	200U	现货
rp221816-1KU	1KU	现货
rp221816-5×1KU	5×1KU	期货

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Accession#: 2KFZ_A (2) Accession#: P00582 (2) Gene ID: 93778073 (2) Gene ID: 948356 (2) Klenow Fragment (1) polA (4)

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基本描述

产品名称

大肠杆菌聚合酶 I 大片段

别名

克列诺片段 | DNA聚合酶I片段 | DNA 聚合酶 I，大片段

英文别名

DNA polymerase I Fragment | E.coli. DNA polymerase I | DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment

规格或纯度

无载体, 无动物源, EnzymoPure™, 无菌, ActiBioPure™, 生物活性, 5 U/μL

产品介绍

本公司生产的大肠杆菌聚合酶 I 大片段即 Klenow Fragment，又称 Klenow 片段，Klenow Fragment 保留了 DNA 聚合酶 I 的 5'→3'聚合酶活性和 3'→5'外切酶活性，但缺少完整的 Klenow 酶的 5'→3'外切酶活性。Klenow Fragment 的 3'→5'外切酶活性保证了其合成 DNA 时的准确性 (proofreading)。

组分和说明

rp221816	Component	200U	1KU	5*1KU	Storage
rp221816A	Klenow Fragment (5U/µl)	40μl	200μl	5*200μl	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
rp221816B	Reaction Buffer(10X)	200μl	1ml	5*1ml	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.

产品应用

双链 DNA 5'突出(5' overhang)末端的补平(fill-in)；双链 DNA 3'突出(3' overhang)末端的打平(也称削平)；5'突出末端的标记；随机引物法进行 DNA 标记；Sanger 双脱氧法进行 DNA 测序；cDNA 第二链的合成或定点突变反应第二链的合成。

产品优势

对于 5'突出或 3'突出的粘末端都可以催化产生平末端，用于后续的平端连接。

使用说明

1.双链 DNA 5'突出末端的补平：

a.对于双链 DNA 5'突出末端的补平，参考下表在冰浴中配制如下反应体系。

Reagent	Volume	Final Concentration
Nuclease-Free Water	(16.6-x)µl	-
dsDNA with 5’ Overhang	xµl	~0.5µM or 5-200ng/µl
Reaction Buffer (10X)	2µl	1X
dNTP Mix (2.5mM each)	0.4µl	50µM
Klenow Fragment (5U/µl)	1µl	0.25U/µl
Total Volume	20µl	-

注 1：按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体；如果同时进行多个反应，可以把上表中除 dsDNA with 5’ overhang 之外的所有溶液和酶提前混合，分装到各反应管，最后再加入 dsDNA with 5’ overhang。

注2：dsDNA with 5’ Overhang如果是寡核苷酸，最终浓度可以约为0.5µM，如果是消化后的DNA质粒等最终浓度可以约为 5-200ng/µl。

b.反应条件：37℃孵育 10 分钟。

c.终止反应：75℃孵育 10 分钟以终止反应。

2.双链 DNA 3'突出末端的打平：

a.具有 3'突出末端的杂交双链 DNA 的退火。将单链 DNA 1 和 DNA 2 等摩尔数混合，推荐的终浓度为 10µM，95℃孵育 2min，然后通过梯度降温至 25℃退火形成具有 3'突出末端的杂交双链 DNA。并按照该产品使用说明进行退火反应(退火后的双链 DNA 推荐在-20℃保存)。

b.对于双链 DNA 3'突出末端的打平，参考下表在冰浴中配制如下反应体系。

Reagent	Volume	Final Concentration
Nuclease-Free Water	(17-x)µl	-
dsDNA with 3’ Overhang	xµl	~0.5µM or 5-200ng/µl
Reaction Buffer (10X)	2µl	1X
Klenow Fragment (5U/µl)	1µl	0.25U/µl
Total Volume	20µl	-

注 1：按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体；如果同时进行多个反应，可以把上表中除 dsDNA with 3’ overhang 之外的所有溶液和酶提前混合，分装到各反应管，最后再加入 dsDNA with 5’ overhang。

注2：dsDNA with 3’ Overhang如果是寡核苷酸，最终浓度可以约为0.5µM，如果是消化后的DNA质粒等最终浓度可以约为 5-200ng/µl。

c.37℃孵育 10 分钟。

d.75℃孵育 10 分钟以终止反应。

3.双链 DNA 5'突出(5'overhang)末端的标记：

a.参考如下表格设置反应体系：

Reagent	Volume
dsDNA with 5’ Overhang	10~15µl (0.1~4µg)
Reaction Buffer (10X)	2µl
[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol)	0.74 MBq (20µCi)
或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)	2.96 MBq (80µCi)
3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled dNTP)	2µl
Klenow Fragment	0.2µl (1U)
补充无核酸酶的去离子水	至 20µl

b.按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。

c.30℃孵育 15 分钟。 d.75℃孵育 10 分钟终止反应。

保存条件： -20℃保存，≤0℃运输

注意事项：

（1）酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

（2）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

（3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

生物活性

One unit is the amount of enzyme required to catalyze the incorporation of 10nmol of deoxyribonucleotides (dNTPs) into a polynucleotide within 30 minutes at 37℃.

表达系统

E. coli

种属

大肠杆菌(E.coli)

无载体

Yes

无动物源

Yes

Accession #

2KFZ_A,P00582

来源

重组表达

预测分子量

68 kDa (monomer)

SDS-PAGE

68 kDa (monomer)

产品规格参数

物理形态	液体
储存缓冲液	25mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) Glycerol, pH 7.5
浓度	5 U/μL
储存温度	-20°C储存,避免反复冻融
运输条件	超低温冰袋运输
稳定性与储存	长期储存-20℃（24个月）；避免反复冻融。
分子类型	酶

安全和危险性（GHS）

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):

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批号(Lot Number)	证书类型	日期	货号
ZJ25F0826186	分析证书	25-08-27	rp221816
ZJ25F0826185	分析证书	25-08-27	rp221816

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体积（添加到小瓶中）

质量（小瓶）

所需的复溶浓度

大肠杆菌聚合酶 I 大片段

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基本描述

产品规格参数

安全和危险性（GHS）

技术规格说明书

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

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