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AO/EB双荧光染色试剂盒
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为什么选择此级别
BioReagent,生物染色剂,用于显微镜,适用于荧光分析 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
2-8°C储存,避光。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
细胞凋亡 (Apoptosis) 的检测方法有形态学、生物化学、DNA片段化检测方法以及TUNEL等标记片段化DNA方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的；细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞，测定细胞代谢活性和形态学观察，这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的，因而不一定反映实际情况。
吖啶橙 (AcridineOrange，AO) 属于三环杂芳香染料，能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，与双链DNA结合后发出绿色荧光，荧光发射峰为530nm；溴化乙锭 (EthidiumBromide，EB) 仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA发出橘红色荧光，荧光发射峰为610nm。染色后，凋亡细胞呈染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构；非凋亡细胞核呈荧光深浅不一的结构样特征；二者很容易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞 (VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞 (VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；晚期凋亡细胞 (NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞 (NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构。本产品仅用于科研，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组分及储存条件：
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自备材料：
1. 荧光显微镜、低速离心机、细胞计数板、载玻片、盖玻片
2. PBS
操作步骤 (仅供参考)：
1. 收集细胞，用PBS清洗细胞1次，加入适量的PBS重悬细胞，计数并调节细胞浓度至 (0.2~5)×10⁶/ml。
2. 配制AO/EB工作液：取适量的试剂 (A)、试剂 (B)、试剂 (C)，按照试剂 (A)：试剂 (B)：试剂 (C)=1：1：8的比例稀配制成AO/EB工作液。
3. 每25~50μl细胞悬液中加入AO/EB工作液2μl，混合均匀，室温孵育5~15min。
4. 取洁净载玻片，滴加上5~10μl细胞悬液，轻轻盖上盖玻片。
5. 在荧光显微镜下进行观察。
染色结果：
活细胞--绿色荧光
死细胞--橙色荧光
注意事项：
1. 用能通过活细胞膜与DNA结合后发蓝色荧光的 Hoechst33342 和只能通过死细胞与DNA结合后发红色荧光的 Propidium Iodide 对细胞进行双染的方法也比较常用。
2. 如有低温离心机进行离心效果更佳。
3. 操作过程中应注意减少试剂 (A)、试剂 (B)暴露于强光下的时间。
4. EB Solution有一定毒性，请小心操作。
5. 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Multiple methods are available for the detection of apoptosis, including morphological observation, biochemical assays, DNA fragmentation assays, and TUNEL staining for fragmented DNA. From the perspective of the discovery history and detection accuracy of apoptosis, morphological observation under a microscope remains an important approach. Cell death can be assessed via fluorescent dye staining to distinguish live and dead cells, measurement of cellular metabolic activity, and morphological analysis. However, these assays indirectly evaluate apoptotic status and may not accurately reflect the true biological condition of cells.
Acridine Orange (AO) is a tricyclic heteroaromatic dye that penetrates intact cell membranes and intercalates into nuclear double-stranded DNA, emitting green fluorescence with an emission peak at 530 nm. Ethidium Bromide (EB) can only cross damaged cell membranes; after intercalation into nuclear DNA, it produces orange-red fluorescence with an emission peak at 610 nm. After staining, apoptotic cells exhibit intensified, bright, uniform circular, condensed or clumped fluorescent signals. Non-apoptotic cell nuclei display uneven, patchy fluorescence patterns, enabling clear differentiation between the two cell populations. Four distinct cell morphologies can be distinguished under a fluorescence microscope:
Viable normal cells (VN): Nuclei with green-stained chromatin exhibiting normal morphology.
Viable early apoptotic cells (VA): Green-stained condensed or bead-like chromatin.
Non-viable late apoptotic cells (NVA): Orange-red condensed or bead-like chromatin.
Non-viable necrotic cells (NVN): Orange-red chromatin with normal nuclear structure.
This product is for research use only and is not intended for clinical diagnosis or other applications.
Product Components and Storage Conditions:
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Materials to Be Prepared by User:
1. Fluorescence microscope, low-speed centrifuge, hemocytometer, glass slides, coverslips
2. PBS
Operating Procedures (For Reference Only):
1. Harvest cells, wash once with PBS, resuspend cells in an appropriate volume of PBS. Count cells and adjust cell concentration to (0.2–5) × 10⁶ cells/mL.
2. Prepare AO/EB working solution: Mix Reagent A, Reagent B and Reagent C at a volume ratio of 1:1:8 to obtain AO/EB working solution.
3. Add 2 μL AO/EB working solution into every 25–50 μL cell suspension, mix thoroughly and incubate at room temperature for 5–15 min.
4. Pipette 5–10 μL stained cell suspension onto a clean glass slide and gently place a coverslip over it.
5. Observe under a fluorescence microscope.
Staining Results:
Viable cells – Green fluorescence
Dead cells – Orange fluorescence
Precautions:
1. Dual staining with Hoechst 33342 and Propidium Iodide (PI) is another widely used alternative. Hoechst 33342 can penetrate intact live cell membranes and bind DNA to emit blue fluorescence, while PI only permeabilizes dead cells and binds DNA to produce red fluorescence.
2. A refrigerated centrifuge will provide better centrifugation performance if available.
3. Minimize the exposure time of Reagent A and Reagent B to strong light during operation.
4. EB Solution is toxic; handle with caution.
5. Use the reagents promptly after opening to avoid compromised experimental results.
6. Wear a lab coat and disposable gloves throughout the experiment for personal safety and health.
规格
别名
AO/EB 双染试剂盒 | 吖啶橙/溴化乙锭双染试剂盒 | AO/EB 细胞凋亡双染试剂盒 | 活死细胞染色试剂盒 (AO/EB 双染) | AO/EB 染色试剂盒
英文别名
Acridine Orange/Ethidium Bromide Double Staining Kit | AO/EB Double Stain Kit | AO/EB Staining Kit
规格或纯度
BioReagent, 生物染色剂, 用于显微镜, 适用于荧光分析
英文名称
AO/EB Dual Fluorescent Staining Kit
应用
Cell Staining, 细胞分析
样品类型
细胞
检测方法
荧光法
检测仪器
荧光显微镜
检测波长
AO: Ex:488nm,Em:530nm EB: Ex:518nm,Em:610nm
敏感性
Light-sensitive
Emission(nm)
530nm, 610nm
Excitation(nm)
Blue Laser(488nm), Green Laser(518nm)
Ex/Em(nm)
Ex:488nm;Em:530nm,Ex:518nm;Em:610nm
储存与运输
储存条件
2-8°C储存,避光
运输条件
低温运输
稳定性与储存
Store at 2-8℃ long term (12 months). Store in the dark.
组分与储存
| 项目号 | 物理外观 | 组件 | 100T | 储存 |
| A1526024A | 液体 | AO 染色液 | 200μL | 2-8℃. Store in the dark. |
| A1526024B | 液体 | EB 染色液 | 200μL | 2-8℃. Store in the dark. |
| A1526024C | 液体 | AO/EB 稀释缓冲液 | 50 mL | 2-8℃ |
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ26F0939302 |
分析证书 | A1526024 |
技术文档和文章
溶液计算器
常见问题
什么是「生物染色剂」？
「生物染色剂」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。
什么是「生物染色剂」？
「生物染色剂」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。
什么是「BioReagent」？
「BioReagent」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。
本产品应如何储存？
请于2–8 °C、避光条件下保存。本品对光敏感，请保存在原始的避光或棕色容器中。
本产品如何运输？
本产品采用湿冰冷藏运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA？
每个订单都会随附分析证书（COA），您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA，请联系您的客户代表，或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。
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