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AlkB (RNA/DNA 去甲基化酶, Nuclease-free)

货号: A743741
COA
有货
级别和纯度: 无动物源 ? 无动物源（Animal Free）—— 不含动物源成分生产，降低污染风险。适用于避免动物源材料的生物制造和培养。 无载体 ? 无载体（Carrier Free）—— 不含添加的载体蛋白/稳定剂。当载体（如 BSA）会干扰偶联或敏感检测时使用。 生物活性 ? 生物活性级（Bioactive）—— 经验证在功能检测中保持生物活性。当分子须具有功能活性而不仅是纯度时使用。 ActiBioPure™ ? ActiBioPure™ —— 阿拉丁面向生物活性和重组产品的优质系列。当同时需要高纯度和保持生物活性时使用。 EnzymoPure™ ? EnzymoPure™ —— 阿拉丁的高质量酶解决方案系列。当酶纯度和明确活性决定检测或工艺性能时使用。 无RNA酶 ? 无 RNase —— 经验证无 RNase 活性，保护易损 RNA。适用于 RNA 提取、RT-PCR 及任何对 RNA 敏感的流程。 无菌 ? 无菌级 —— 经处理并验证无活微生物。可直接用于无菌操作和细胞培养，无需再灭菌。 20 U/µL
Accession #
P05050.1
表达系统
E. coli
生物活性
One unit (U) is the amount of AlkB that removes 90-100% of the m6A modifications in total RNA of HEK 293T cells in 20 ul of reaction mixture at 37℃ after 100minutes of incubation. Under the regular conditions, the enzymatic activity of 1 μg of AlkB is approximately 1 unit.
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200U
A743741-200U
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5×200U
A743741-5×200U
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A743741-25×200U
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AlkB (RNA/DNA 去甲基化酶, Nuclease-free)
概述 规格 储存与运输 技术文档 高级数据 质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱) 技术文档和文章 溶液计算器
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为什么选择此级别

ActiBioPure™,EnzymoPure™,无RNA酶,无动物源,无菌,无载体,生物活性 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

🌡

储存与运输

-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

📋

质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

📚

文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

本公司生产的 AlkB (RNA/DNA 去甲基化酶, Nuclease-free) 即 AlkB (RNA/DNA demethylase, Nuclease-free)是由本公司自主研发的技术平台 通过大肠杆菌表达、纯化获得的不含 DNase 和 RNase 的高品质重组酶。AlkB 是一种α-酮戊二酸(α-Ketoglutarate, α-KG)和 Fe(II)依赖的双加氧 酶(Dioxygenase)，可以有效地修复单链或双链 DNA 和 RNA 中的各种烷基化损伤(Alkylation damage)，常被用于去除 RNA 中的 m6A 等甲基化 修饰，去除 DNA 中的 m1A、m3C、m6A 等修饰，并进一步用于后续的 qPCR 或高通量测序分析。N6-Methyladenosine (m6A)是真核生物中一 种最普遍和丰富的 RNA 转录后修饰，存在于各类真核或病毒 RNA，包括 mRNA、rRNA、tRNA、snRNA、microRNA (miRNA)和长链非编码 RNA (Long non-coding RNA, lncRNA)中，这种修饰被认为占据了超过 80%的 RNA 甲基化修饰。mRNA 转录物中 m6A 的丰度会影响 RNA 的多种代谢 过程，例如剪接(Splicing)、出核(Nuclear export)、翻译的能力及稳定性以及 RNA 转录。AlkB 可以在体外以α-酮戊二酸和 Fe(II)依赖的方式催化 RNA 的 m6A 去甲基化，通过生成 6-羟甲基衍生物(HO-m6A)并进一步转化为腺嘌呤(Adenine)。AlkB 是细菌暴露于甲基化试剂环境时产生的一种 适应性应激反应蛋白，不仅可以修复 RNA 的甲基化损伤，还可以修复 DNA 的甲基化损伤。AlkB 催化 DNA 中 1-甲基腺嘌呤(m1A)和 3-甲基胞嘧 啶(m3C)的去甲基化需要 O2、Fe2+和α-酮戊二酸的参与；AlkB 在催化 DNA 去甲基化修饰的同时，将α-酮戊二酸转化为琥珀酸和 CO2，并生成不 稳定的羟甲基，被羟基化的甲基再以甲醛的形式释放。单链 DNA (ssDNA)比双链 DNA (dsDNA)中的腺嘌呤的 N1 和胞嘧啶的 N3 更容易受到甲基 化影响，因此，相比 dsDNA，AlkB 对 ssDNA 中的损伤修复更为高效。 

纯度（Purity） 不含 DNA 内切酶和外切酶，不含 RNA 酶，不含磷酸酯酶。 

组分和说明 

A743741Component200U5*200U25*200UStorage
A743741AAlkB (RNA/DNA demethylase, Nuclease-free)(20U/µl)
10µl5*10µl25*10µl-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
A743741BAlkB Buffer Ⅰ (10X) 100µl5*100µl25*100µl-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
A743741CAlkB Buffer Ⅱ (10X) 100µl5*100µl25*100µl-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.

产品应用

RNA 的 m6A、m1A、m3C 或 m1G 去甲基化；ARM-seq、PANDORA-seq 等；DNA 的 m1A、m3C 和 m6A 的去甲基化。 

产品优势 

AlkB 不含 RNase，可以更好地用于去甲基化修饰及后续的建库和高通量测序 

使用说明

1.AlkB 对 total RNA 的 N6-methyladenosine (m6A)修饰的去甲基化反应： 

a.AlkB 的去甲基化反应。 

参考下表在冰浴中配制如下反应体系。 

Reagent Volume Final Concentration
Nuclease-Free Water (14-x-y)µl  -
Total RNA (0.05-4µg/µl) xµl 0.01-1µg/µl
AlkB Buffer Ⅰ (10X) 2µl 1X
AlkB Buffer Ⅱ (10X)2µl 1X
RNase Inhibitor (40U/µl) 2µl 4U/µl
AlkB (20U/µl) yµl 0.01-1U/µl
Total Volume 20µl  -

注 1：按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后低速离心沉淀液体。RNA 和 AlkB 用量的微克数保持相同即可。AlkB 用量很少时，可以取适量先使用 Reaction Buffer (1X)进行稀释。如果希望去甲基化程度更加充 分，AlkB 的用量可以适当加大一些。 

注 2：由于涉及 RNA 操作，需要严格按照 RNA 操作的规范进行，避免 RNase 污染，相关试剂和耗材需要经过 DEPC 处理去除 RNase 或者确保是 RNase free 的。

 b.反应条件：37℃孵育 100min。

说明：为避免环境中 RNase 污染导致的样品 RNA 降解，可以考虑适当加大 AlkB 的用量并适当缩短孵 育时间。 

c.终止反应：加入与反应体系等体积的含 11mM EDTA 和 200mM 乙酸铵的缓冲液可终止反应，或进行酚氯仿抽提。 

保存条件： -20℃保存，≤0℃运输 

注意事项： 

（1）使用时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。 

（2）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 

（3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。



规格

产品名称
AlkB (RNA/DNA 去甲基化酶, Nuclease-free)
英文别名
alkB | aidD | ECK2204
规格或纯度
EnzymoPure™, ActiBioPure™, 生物活性, 无动物源, 无载体, 无菌, 无RNA酶, 20 U/µL
生物活性
One unit (U) is the amount of AlkB that removes 90-100% of the m6A modifications in total RNA of HEK 293T cells in 20 ul of reaction mixture at 37℃ after 100minutes of incubation. Under the regular conditions, the enzymatic activity of 1 μg of AlkB is approximately 1 unit.
表达系统
E. coli
种属
大肠杆菌K12株(Escherichia coli (strain K12))
无载体
Yes
无动物源
Yes
来源
重组表达
分子类型
酶
产品线
biological_products
储存与运输
物理形态
液体
储存缓冲液
200mM NaCl, 2mM DTT, 50% (v/v) Glycerol, 20mM Tris-HCl, pH8.0
浓度
20 U/µL
储存条件
-20°C储存,避免反复冻融
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
长期储存-20℃（24个月）；避免反复冻融。
单位定义
在本产品的20μl反应体系中，可以把1μg HEK 293T细胞总RNA的m6A修饰去除约90-100%的AlkB的酶量定义为1个活性单位。在AlkB酶活性保持较好的情况下，1μg AlkB的酶活性大约为1U。

技术文档

📋 安全数据表 (SDS)

全面的危险、操作、储存及法规合规文件。

下载 SDS →

✅ 分析证书 (COA)

批次质量数据。输入批号以获取对应 COA。

查询 COA →

📊 产品数据表

产品规格和应用的快速参考摘要。

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🔬 规格说明书

该级别的完整质量属性和验收标准。

查看规格说明 →

高级数据

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
输入批号以搜索分析图谱:

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批号(Lot Number) 证书类型 货号
ZJ25F1028974 分析证书 A743741
ZJ25F1028973 分析证书 A743741
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