计算溶液所需的质量、体积或浓度。
BioReagent,用于化学发光 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
避光,-80℃储存。特低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)是一种分子量约为61 kDa的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,能够催化荧光素(luciferin)氧化成oxyluciferin,在氧化的过程中会发出波长为560nm左右的生物荧光。
检测原理如图所示
阿拉丁的Bright One-Step 荧光素酶报告基因检测试剂盒( Bright One-Step Luciferase Assay Kit)的特点是操作非常简便,高灵敏度,高信号强度。适合于对灵敏度有较高要求求的实验。实验前无需对细胞进行清洗或收集,而且可以直接使用,对细胞的裂解和检测一步完成,省去了混合试剂的步骤,节省了实验时间。
使用说明:
一、实验准备
1、主要实验耗材与设备:200 μL移液器或者排枪;不透光白色酶标板或黑色酶标板;多功能酶标仪或者其他能够检测生物发光的仪器。
2、反应温度:酶促反应对温度较为敏感,请将细胞培养板,检测试剂,酶标仪(可在机器设定温度)平衡至室温(最好20-25℃)时再使用;检测试剂复温环境不能超过25℃。
注:培养箱中取出培养板,室温放置20min以平衡至室温。检测试剂解冻后要完全恢复到室温再使用。
3、检测仪器设置:以Molecular Devices Spectra Max L 机器为例。 PMT Setting(检测器参数设置):AutoRange;Target Calibration Wavelength(校准波长):570nm(Firefly Luciferase)。选择 shake before Read。
4、检测板:为防止孔间干扰,推荐使用不透光白色酶标板或者黑色酶标板;如测量光度值较高,为避免互相干扰,也可隔孔上样。
5、实验中请穿实验服并戴一次性手套。
二、操作步骤(以96孔板为例)
1、裂解细胞
(1) 贴壁细胞:推荐汇合度在90%以上。不用吸除细胞培养基,通常加入与培养基同体积的混合试剂即可。
(2) 悬浮细胞:只要细胞生长良好,一般无密度要求。其他同贴壁细胞。
推荐使用量
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直接加入试剂后用枪头吹打5次,使细胞裂解更充分。等待5min,使细胞充分裂解。枪头吹打时尽量不要有泡沫和气泡出现。
2、上样
每孔吸取100 µL混合液(检测试剂+细胞培养基)到检测板。
3、荧光检测
设置酶标仪参数(参考实验准备3)。将检测板放入酶标仪。震动几秒。检测即可。
注意事项:
1、温度影响:温度直接影响荧光素酶的反应速率。而发光强度和半衰期取决于荧光素酶的反应速率。所以在加样前,应将需要将本试剂盒细胞培养板均平衡至室温,以保证检测结果的一致性。如将多孔板堆叠放置,将需要更长时间恢复到室温。如未充分平衡,可导致中心孔和四周孔之间的梯度效应。
2、经相关实验表明-70℃反复冻融5次对发光值影响极其微小,且稳定性基本无变化。但为了获得相对较好的实验数据,不推荐多次冻融。
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | B1411115 |