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生物素亲和层析介质
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为什么选择此级别
BioReagent,通过内毒素测试 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
2-8°C储存,禁止冷冻。低温运输,禁止冷冻 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
储存缓冲液：20% (v/v) Ethanol
本产品是一种将D-生物素键合在琼脂糖基球上形成的亲和层析分离介质。D-生物素与链霉亲和素之间的亲和力非常高，其解离常数在10−14 mol/L数量级，是自然界最强的非共价相互作用之一。本产品特异性结合链霉亲和素后非常稳定，只有在苛刻的条件下，例如2%SDS的变性条件才能将链霉亲和素解离。因此该产品适用于亲和素、链霉亲和素及其偶联物的固定化，固定化后的产品可应用于诊断检测、蛋白纯化等。另外一方面，一些链霉亲和素的突变体与D-生物素之间的亲和力大幅减弱，使得突变体与D-生物素的特异性结合是可逆的，因而可以用该产品来纯化链霉亲和素突变体。
阿拉丁生物素亲和层析介质储存在20%乙醇中，凝胶和保护液的体积比为1:1，我司产品规格为实际凝胶的体积。
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注：
① 90%体积以上的微球在此粒径范围；
② DBC10%测试条件为：10%流穿，6 min停留时间；
③ 10cm柱高下的最大测试流速。
使用说明
1、色谱柱装填
以下阐述与层析系统连接时，填料的色谱柱装填方法。
（1）所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
（2）填料用量计算：通过沉降定量填料体积，需要的沉降填料体积=柱体积×压缩比（也称压缩因子）。沉降体积是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完全读取的稳定体积。生物素亲和层析介质的压缩比为1.15。为使达到装柱比，可通过柱头下压的方法，也可以通过高流速压柱。
（3）填料清洗：将填料悬液充分摇匀后量取相应体积，抽滤除去液体，并用约3倍填料体积的纯化水洗涤，重复3次，以除去保存液。
（4）装柱填料悬液准备：将填料转移到适当的容器中，加入适量的装柱液，制成 50~75 v%的装柱填料悬液，使用前搅匀。
（5）装填前准备：在清洗干净的层析柱下端加入装柱液，以除去下垫片及层析柱下端的空气，在柱内保留少量的蒸馏水，拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。
（6）装填：将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内（必要时使用装柱器），为避免引入气泡，应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后，用装柱液将装柱器加满，拧紧装柱器上盖，将柱子与层析系统连接。
（7）压柱：使柱内填料自然沉降（或50~150 cm/h的低流速下沉降），待填料沉降完全后（填料与液体的界面清晰），去除装柱器，装上上柱头，并将柱头下降至界面处； 通过高流速（推荐流速见下表，注意柱压不超过0.3 MPa），继续压柱至界面清晰稳定，标记界面稳定时的柱高。停泵，打开柱头上的阀门/堵头，关闭柱底的阀门/堵头，下压柱头至标记位置下方与压缩比对应的位置，旋紧柱头，装柱完成。装柱完成后，需用高流速平衡柱内的填料。
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2、柱效测定和评价
完成装柱后、使用前可通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量。柱效通常用理论塔板高度（HETP）和非对称因子（As）来评价。
柱效测定可以采用丙酮或者NaCl作为样品进行，按照下表配制样品溶液和流动相。
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根据UV或者电导率曲线计算理论塔板高度（HETP）、理论塔板数（N）和非对称因子（As），公式如下：
HETP = L / N
N = 5.54 × (Vʀ / Wₕ)²
As = a / b
其中：L为柱高； Vʀ为保留体积；Wₕ为半高峰宽；a为在10%峰高处的第一个半峰宽；b为在10%峰高处的第二个半峰宽。
一般来说，HETP的数值应小于填料平均粒径的三倍（即HETP/D50<3，D50为填料的平均粒径），As应在0.8~1.5之间。
3、推荐缓冲液
推荐用以下缓冲液结合链霉亲和素或者纯化链霉亲和素突变体。
结合缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，pH 8.0
洗脱缓冲液：结合缓冲液 + 10~50 mM D-生物素
再生缓冲液：0.1 M NaOH
4、样品纯化
（1）平衡：再用结合缓冲液平衡5个柱体积，建议流速为100~150 cm/h。
（2）上样：将准备好的样品上柱，建议流速为20~100 cm/h，可根据实际结合情况选择流速，能获得较好的效果。上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可用透析、超滤、稀释等方法处理样品。并且上柱前应过0.45μm滤膜或高速离心去除不溶物。
（3）再平衡：上样后用结合缓冲液平衡5~10个柱体积，或平衡至基线，洗去杂质，推荐流速为100~150 cm/h。
（4）洗脱：用洗脱缓冲液洗6~10个柱体积，建议流速为100~150 cm/h，根据需要置换缓冲液。
（5）NaOH再生：洗脱目的蛋白后的柱子用纯水清洗3-5个柱体积，并用0.1 M NaOH再生3-5个柱体积，再用纯水清洗至中性，用20%乙醇保存柱子，或用结合缓冲液平衡后进行下一次纯化，建议流速为100~150 cm/h。
5、填料保存
填料的初始保存液为20%乙醇，使用过后可继续用20%乙醇保存。保存温度在2~8 ℃为宜，不可冻存。
This product is an affinity chromatography separation medium formed by coupling D-biotin to agarose base beads. The affinity between D-biotin and streptavidin is extremely high, with a dissociation constant on the order of 10⁻¹⁴ mol/L, making it one of the strongest non-covalent interactions in nature. The binding between this product and streptavidin is highly stable and specific, requiring harsh conditions (e.g., 2% SDS denaturing buffer) for dissociation. Therefore, it is suitable for the immobilization of avidin, streptavidin, and their conjugates, with applications in diagnostic assays and protein purification. Additionally, some streptavidin mutants exhibit significantly reduced affinity for D-biotin, enabling reversible binding. This product can also be used to purify such streptavidin mutants.
Aladdin Biotin Agarose Resin is stored in 20% ethanol, with a settled gel to storage solution ratio of 1:1. The product specification refers to the actual volume of the settled gel.
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Notes:
① Over 90% of the beads fall within this size range.
② DBC₁₀% measured under: 10% breakthrough, 6 min residence time.
③ Maximum tested flow rate at 10 cm column height.
Protocol
1. Column Packing
The following procedure describes column packing when connected to a chromatography system:
(1) Equilibrate all materials to the operating temperature. Degas liquids if possible.
(2) Resin Quantity Calculation:
Settled resin volume = Column volume × Compression factor (1.15 for this resin).
(3) Resin Preparation: Resuspend the resin slurry thoroughly. Measure the required volume, remove storage solution by filtration, and wash 3 times with ~3 resin volumes of purified water.
(4) Packing Slurry Preparation: Transfer resin to a suitable container and add packing solution to achieve a 50–75% (v/v) slurry. Mix well before use.
(5) Pre-packing Setup: Fill the bottom of the clean column with packing solution to remove air from the bottom frit and outlet. Retain a small amount of liquid, tighten the bottom end fitting, and ensure the column is vertical.
(6) Packing: Pour the well-mixed slurry into the column in one slow, continuous motion (use a packing reservoir if needed). After adding all resin, fill the reservoir with packing solution, attach the top lid, and connect the column to the system.
(7) Compression: Allow the resin to settle naturally (or use a low flow rate of 50–150 cm/h). Apply a high flow rate (600 cm/h; ensure pressure ≤0.3 MPa) until the interface is stable. Mark the stable height, stop the pump, and lower the adapter to the position corresponding to the compression factor (1.15). Tighten the adapter and equilibrate the column at a high flow rate.
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2. Column Efficiency Testing
After packing, assess column efficiency using HETP (Height Equivalent to a Theoretical Plate) and As (Asymmetry Factor) with acetone or NaCl as tracers:
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Calculate HETP, N, and As using:
HETP = L / N
N = 5.54 × (Vʀ / Wₕ)²
As = a / b
HETP should be <3× the average particle diameter (HETP/D₅₀ < 3), and As should be 0.8–1.5.
3. Recommended Buffers
Binding Buffer: 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
Elution Buffer: Binding Buffer + 10–50 mM D-biotin
Regeneration Buffer: 0.1 M NaOH
4. Sample Purification
(1) Equilibration: Equilibrate with 5 CV Binding Buffer at 100–150 cm/h.
(2) Loading: Load sample at 20–100 cm/h. Pre-treat sample (dialysis, ultrafiltration, or dilution) to match Binding Buffer. Filter through 0.45 μm or centrifuge to remove particulates.
(3) Wash: Wash with 5–10 CV Binding Buffer at 100–150 cm/h until baseline is stable.
(4) Elution: Elute with 6–10 CV Elution Buffer at 100–150 cm/h.
(5) Regeneration: Wash with 3–5 CV water, regenerate with 3–5 CV 0.1 M NaOH, rinse to neutral pH, and store in 20% ethanol or re-equilibrate with Binding Buffer.
5. Storage
Store in 20% ethanol at 2–8°C. Do not freeze.
规格
别名
生物素亲和层析树脂 | 生物素琼脂糖纯化树脂 | 生物素填料
英文别名
D-Biotin Resin | Biotin Agarose Beads | Biotin Resin | Biotin Agarose Resin
规格或纯度
BioReagent, 通过内毒素测试, 50% v/v
稳定性与储存
Store at 2-8℃ long term (36 months). Do not freeze.
英文名称
Biotin Agarose Resin
储存条件
2-8°C储存,禁止冷冻
运输条件
低温运输,禁止冷冻
产品线
生物产品
名称和识别符
分子类型
生物试剂/缓冲液
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ26F0131314 |
分析证书 | B1492534 |
| ZJ26F0131315 |
分析证书 | B1492534 |
| ZJ26F0131316 |
分析证书 | B1492534 |
技术文档和文章
溶液计算器
常见问题
什么是「通过内毒素测试」？
「通过内毒素测试」表示该物料经过加工和检测，适用于特种工业加工。规格侧重于影响该应用性能的杂质——例如，电子应用的金属含量、电池应用的粒度、光学应用的折射率，或对水分敏感工艺的水分含量。
什么是「BioReagent」？
「BioReagent」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。
本产品应如何储存？
请于2–8 °C条件下保存。请勿冷冻。冷冻可能对本品造成不可逆的损坏。
本产品如何运输？
本产品采用湿冰冷藏运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA？
每个订单都会随附分析证书（COA），您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA，请联系您的客户代表，或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。
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