DNA寡核苷酸退火缓冲液 (5×)

货号: D1518364
有货
级别和纯度: BioReagent ? 生物试剂级(BioReagent)—— 经测试适用于生命科学和分子生物学。适用于需要生物相容性的细胞培养、检测和生化工作。 分子生物学级 ? 适用于分子生物学 —— 不含降解 DNA/RNA 的核酸酶和污染物。适用于克隆、PCR 和需要洁净试剂的核酸工作。 无菌 ? 无菌级 —— 经处理并验证无活微生物。可直接用于无菌操作和细胞培养,无需再灭菌。 5×
别名
DNA退火缓冲液(5×)
储存条件
室温,-20°C储存
运输条件
超低温运输
应用
PCR
★
规格
库存
价格
数量
1ml
D1518364-1ml
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为什么选择此级别

BioReagent,分子生物学级,无菌 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

室温,-20°C储存。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

  DNA 寡核苷酸退火缓冲液(Annealing Buffer for DNA Oligos,简称 DNA 退火缓冲液),适用于常规 DNA oligo 退火,尤其适合RNAi/siRNA 质粒构建中较难退火的 DNA oligo。此类 DNA oligo 因常含约 20 bp 互补序列,易自身形成发夹结构,影响两条链正确配对退火。

  DNA 寡核苷酸退火缓冲液(5×)可有效抑制 DNA oligo 自身发夹结构形成,退火产物可直接用于酶切后质粒的连接与转化,能显著提高阳性克隆得率。本试剂操作简便,只需将 oligo 与退火缓冲液按比例混合,经 PCR 仪程序降温约 90 min 即可完成退火。 

  本产品仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

D1518364
Component
1 mLStorage
D1518364A
DNA寡核苷酸退火缓冲液 (5×)
1 mL
-20℃.
D1518364B
无核酸酶水
5 mL
RT.

操作步骤(仅供参考)

1. 试剂准备

将待退火的 DNA oligo 用无菌超纯水或无核酸酶水配制成 50 μM 工作液;将 Annealing Buffer for DNA Oligos (5×) 溶解并充分混匀备用。

2. 按如下退火反应体系操作(总体积 100 μL)

Nuclease-Free Water
40 μL
Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)
20 μL
DNA oligo A (50 μM)
20 μL
DNA oligo B (50 μM)
20 μL

按上述顺序依次加样并混匀;若 PCR 仪无热盖,可滴加Mineral Oil防止蒸发。

3. PCR 仪退火程序

步骤

温度

时间

作用

1

95℃

2 min

Oligo充分变性

2

每90 s下降1℃,降至25℃

约90 min

程序退火

3

4℃

长期保存

暂时存放

4. 后续使用

退火产物可直接用于连接反应,或 -20℃ 冻存备用。若需进行酶切等后续酶反应,建议先纯化退火产物,或保证退火产物在体系中体积占比<5%,避免缓冲液干扰酶活。

注意事项

1. 试剂避免反复冻融,以防退火效率下降。

2. 本产品仅适用于 DNA oligo 退火,不可用于 RNA oligo。

3. 操作时请穿戴实验服与一次性手套,保证实验安全。

4. 试剂开封后建议尽快使用,以免影响实验效果。

  Annealing Buffer for DNA Oligos is suitable for routine DNA oligo annealing, and is particularly effective for difficult-to-anneal DNA oligos used in RNAi/siRNA plasmid construction. Such DNA oligos often contain approximately 20 bp complementary sequences, making them prone to forming hairpin structures that can interfere with correct pairing and annealing of the two strands.

  Annealing Buffer for DNA Oligos (5×) effectively inhibits the formation of DNA oligo hairpin structures. The annealed products can be used directly in subsequent steps such as restriction enzyme digestion followed by plasmid ligation and transformation, significantly improving the positive clone yield. This reagent is easy to use; simply mix the oligos with the annealing buffer in the appropriate proportions and complete the annealing process via a PCR instrument programmed for controlled cooling over approximately 90 minutes.

  This product is for research use only. Not for use in diagnostic procedures or other purposes.

D1518364
Component
1 mLStorage
D1518364A
Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)
1 mL
-20℃.
D1518364B
Nuclease-Free Water
5 mL
RT.

Procedure (For Reference Only)

1. Reagent Preparation

  • Prepare the DNA oligos to be annealed as a 50 μM working solution using sterile ultrapure water or Nuclease-Free Water.

  • Thaw and thoroughly mix the Annealing Buffer for DNA Oligos (5×).

2. Annealing Reaction Setup (Total Volume 100 μL)

Prepare the reaction mixture according to the table below, adding components in the order listed and mixing well. If the PCR instrument does not have a heated lid, overlay with Mineral Oil to prevent evaporation.

ComponentVolume
Nuclease-Free Water40 μL
Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)20 μL
DNA oligo A (50 μM)20 μL
DNA oligo B (50 μM)20 μL

3. PCR Instrument Annealing Program

StepTemperatureTimePurpose
195℃2 minComplete denaturation of oligos
2Decrease 1℃ every 90 s to 25℃~90 minProgrammed annealing
34℃HoldTemporary storage

4. Subsequent Use

  • The annealed product can be used directly in ligation reactions or stored at -20℃ for later use.

  • If subsequent enzymatic reactions (e.g., restriction enzyme digestion) are required, it is recommended to purify the annealed product first, or ensure that the volume of the annealed product constitutes less than 5% of the final reaction system to avoid buffer interference with enzyme activity.

Notes

  1. Avoid repeated freezing and thawing of the reagent to prevent decreased annealing efficiency.

  2. This product is specifically designed for DNA oligo annealing and should not be used for RNA oligos.

  3. Please wear laboratory appropriate attire and disposable gloves during operation to ensure safety.

  4. Use the reagent as soon as possible after opening to ensure optimal performance.

规格

别名
DNA退火缓冲液(5×)
规格或纯度
BioReagent,分子生物学级,无菌,5×
稳定性与储存
各组分在相应的储存条件下保质期1年。
英文名称
Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)
储存条件
室温,-20°C储存
运输条件
超低温运输
产品线
生物产品
名称和识别符
分子类型
生物试剂/缓冲液

技术文档

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批号(Lot Number) 证书类型 货号
ZJ26F0535487 分析证书 D1518364
技术文档和文章
溶液计算器

常见问题

什么是「分子生物学级」?
「分子生物学级」表示该产品经过加工和检测,适用于分子生物学和蛋白质组学。典型规格包括:低或不可检测的核酸酶/蛋白酶活性、低内毒素、受控的微生物限度,以及高批间重现性。
什么是「BioReagent」?
「BioReagent」表示该产品经过加工和检测,适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性,以及在相关情况下的生物活性验证。
本产品应如何储存?
请于?20 °C条件下保存。需冷冻保存以维持规定的有效期。
本产品如何运输?
本产品采用保温箱配冰袋运输。收货后请立即拆包,并按上述储存条件保存。
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