5'端 DNA/RNA 腺苷酰化酶

货号: D743509
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级别和纯度: 无动物源 ? 无动物源(Animal Free)—— 不含动物源成分生产,降低污染风险。适用于避免动物源材料的生物制造和培养。 无载体 ? 无载体(Carrier Free)—— 不含添加的载体蛋白/稳定剂。当载体(如 BSA)会干扰偶联或敏感检测时使用。 生物活性 ? 生物活性级(Bioactive)—— 经验证在功能检测中保持生物活性。当分子须具有功能活性而不仅是纯度时使用。 无DNA酶和RNA酶 ? 无 DNase 和 RNase 活性,保持 DNA 和 RNA 完整。适用于存在降解风险的核酸提取、PCR 和储存。 ActiBioPure™ ? ActiBioPure™ —— 阿拉丁面向生物活性和重组产品的优质系列。当同时需要高纯度和保持生物活性时使用。 EnzymoPure™ ? EnzymoPure™ —— 阿拉丁的高质量酶解决方案系列。当酶纯度和明确活性决定检测或工艺性能时使用。 无菌 ? 无菌级 —— 经处理并验证无活微生物。可直接用于无菌操作和细胞培养,无需再灭菌。 75 U/µL
Accession #
8UCH_A,A0A075LQ94
表达系统
E. coli
生物活性
One unit is the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1pmol of AMP to pDNA substrate in a total reaction volume of 20μl in 15 minutes at 65℃.
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规格
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3KU
D743509-3KU
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¥1,199.90
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D743509-5×3KU
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为什么选择此级别

ActiBioPure™,EnzymoPure™,无DNA酶和RNA酶,无动物源,无菌,无载体,生物活性 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

  本公司生产的 5'端 DNA/RNA 腺苷酰化酶,即 5'端 DNA/RNA 腺苷酰化酶,也称 Single-Strand Nucleic Acid 5' Adenylase 或单链核酸 5'端腺苷 酰化酶,可以催化 5'端磷酸化的单链 DNA 或单链 RNA (pDNA or pRNA)转换生成 5'端腺苷酰化 DNA (AppDNA)或 5'端腺苷酰化 RNA (AppRNA)。 无论作为底物的 DNA 或 RNA 的 3'端是否进行了氨基化等封闭,使用本产品都可以高效催化产生 5'端腺苷酰化产物。在反应体系中不存在 ATP 的 条件下,本产品还可以催化 5'端磷酸化的单链 DNA (pDNA)生成环状 DNA (circular DNA)。5' DNA/RNA Adenylase 进行 5'端腺苷酰化修饰反应 时,需要 ATP 和待腺苷酰化修饰的 5'端磷酸化的单链 DNA 或单链 RNA。5' DNA/RNA Adenylase 催化单链核酸 5'端腺苷酰化反应的原理如下: 以 5'端磷酸化的单链 DNA 或单链 RNA 为底物,本产品首先将 ATP 分解成 AMP 和 PPi,接着 AMP 转移到单链 DNA 或单链 RNA 的 5'磷酸基团上, 之后形成腺苷酰化单链 DNA 或单链 RNA,从而生成腺苷酰化产物。 

纯度(Purity):不含 DNA 内切酶和外切酶,不含核糖核酸酶。

组分和说明

D743509Component3KU5*3KUStorage
D743509A5' DNA/RNA Adenylase (75U/µl) 40µl5*40µl-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
D743509B10X Adenylase Reaction Buffer 100µl5*100µl-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.

产品应用 

制备 5'端腺苷酰化的单链 DNA 接头,最终用于 miRNA 等 3'端为羟基的 RNA 或 3'端为羟基的单链 DNA 在克隆、高通量测序建库或 PCR 检测等时, 在 3'端添加的接头。 

产品优势 

本产品可以高效催化产生 5'端腺苷酰化产物。在反应体系中不存在 ATP 的条件下,本产品还可以催化 5'端磷酸化的单链 DNA (pDNA)生成环状 DNA (circular DNA)。

使用说明 

1.解冻 5'端腺苷酰化修饰反应所需的各种试剂,将 5' DNA/RNA adenylase 置于冰上或冰盒内。 

2.参考下表在冰浴中配制如下反应体系:  

Reagent Volume Final Concentration
Water (DNase/RNase free) 14µl  -
ssDNA or ssRNA (100µM) 1µl 5µM
10X Adenylase Reaction Buffer2µl 1X
ATP (1mM) 2µl 0.1mM
5' DNA/RNA adenylase (75U/µl) 1µl 3.75U/µl
Total Volume 20µl  -

注 1:如果同时进行多个腺苷酰化反应,可以把上表中除 ssDNA 或 ssRNA 之外的所有溶液和酶提前预混合,然后再分装到各反应管内。 

注 2:如果涉及 RNA 操作,需要严格按照 RNA 操作的规范进行,避免 RNase 污染,相关试剂和耗材需要经过 DEPC 处理去除 RNase 或者确保是 RNase free 的。如果涉及单链 RNA,推荐适量添加 RNase Inhibitor。 

3.腺苷酰化反应:65℃孵育 1h。为了使连接反应更加充分,可以适当延长反应时间。 

4.终止反应:85℃孵育 5min 以终止反应。 

5.腺苷酰化产物的电泳鉴定:电泳上样前 95℃孵育 5min 随后置于冰浴,以充分变性。尿素(7M)变性聚丙烯酰胺凝胶(15%)进行凝胶电 泳分析。腺苷酰化修饰后分子量会变大一点。 

6.浓缩及后续用途:可以采用常规的乙醇沉淀方法进行浓缩,后续可以使用 T4 RNA Ligase2, truncated (200U/µl)等用于和小 RNA 等 的 3'羟基的连接反应。 

保存条件: -20℃保存,≤0℃运输

 注意事项: 

(1)底物单链 DNA 或单链 RNA 的 5'端磷酸化是必须的,3'端可以进行氨基化等封闭,也可以不封闭;不进行 3'端氨基化等封闭时,建议将 ATP 的浓度增加至 0.5mM,可以避免底物发生环化或串联反应。 

(2)5' DNA/RNA adenylase 不能连接双链 DNA (dsDNA)之间的缺刻。5' DNA/RNA adenylase 的最佳反应温度为 65℃,并且在 25℃时会出现 去腺苷酰化现象,因此反应完成后推荐在 85℃孵育 5min 以失活 5' DNA/RNA adenylase。如果没有充分失活 5' DNA/RNA adenylase,后续经 历室温温度条件时,会导致腺苷酰化比例下降。 

(3)5' DNA/RNA adenylase 使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。 

(4)本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。 

(5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


规格

产品名称
5'端 DNA/RNA 腺苷酰化酶
别名
5' DNA / RNA腺苷酸酶 | 单链核酸 5'端腺苷酰化酶
英文别名
Single-Strand Nucleic Acid 5' Adenylase
规格或纯度
无动物源, 无载体, ActiBioPure™, 生物活性, EnzymoPure™, 无菌, 无DNA酶和RNA酶, 75 U/µL
生物活性
One unit is the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1pmol of AMP to pDNA substrate in a total reaction volume of 20μl in 15 minutes at 65℃.
表达系统
E. coli
种属
嗜热菌腺苷水解酶基因(Adenosylase gene of thermophilic bacteria)
无载体
Yes
无动物源
Yes
来源
重组表达
分子类型
酶
产品线
生物产品
储存与运输
物理形态
液体
储存缓冲液
10 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5
浓度
75 U/µL
储存条件
-20°C储存,避免反复冻融
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
长期储存-20℃(24个月);避免反复冻融。
单位定义
One unit is the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1pmol of AMP to pDNA substrate in a total reaction volume of 20μl in 15 minutes at 65℃.

技术文档

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质检证书(CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
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