计算溶液所需的质量、体积或浓度。
ActiBioPure™,EnzymoPure™,无DNA酶和RNA酶,无动物源,无菌,无载体,生物活性 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
本公司生产的 5'端 DNA/RNA 腺苷酰化酶,即 5'端 DNA/RNA 腺苷酰化酶,也称 Single-Strand Nucleic Acid 5' Adenylase 或单链核酸 5'端腺苷 酰化酶,可以催化 5'端磷酸化的单链 DNA 或单链 RNA (pDNA or pRNA)转换生成 5'端腺苷酰化 DNA (AppDNA)或 5'端腺苷酰化 RNA (AppRNA)。 无论作为底物的 DNA 或 RNA 的 3'端是否进行了氨基化等封闭,使用本产品都可以高效催化产生 5'端腺苷酰化产物。在反应体系中不存在 ATP 的 条件下,本产品还可以催化 5'端磷酸化的单链 DNA (pDNA)生成环状 DNA (circular DNA)。5' DNA/RNA Adenylase 进行 5'端腺苷酰化修饰反应 时,需要 ATP 和待腺苷酰化修饰的 5'端磷酸化的单链 DNA 或单链 RNA。5' DNA/RNA Adenylase 催化单链核酸 5'端腺苷酰化反应的原理如下: 以 5'端磷酸化的单链 DNA 或单链 RNA 为底物,本产品首先将 ATP 分解成 AMP 和 PPi,接着 AMP 转移到单链 DNA 或单链 RNA 的 5'磷酸基团上, 之后形成腺苷酰化单链 DNA 或单链 RNA,从而生成腺苷酰化产物。
纯度(Purity):不含 DNA 内切酶和外切酶,不含核糖核酸酶。
组分和说明
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产品应用
制备 5'端腺苷酰化的单链 DNA 接头,最终用于 miRNA 等 3'端为羟基的 RNA 或 3'端为羟基的单链 DNA 在克隆、高通量测序建库或 PCR 检测等时, 在 3'端添加的接头。
产品优势
本产品可以高效催化产生 5'端腺苷酰化产物。在反应体系中不存在 ATP 的条件下,本产品还可以催化 5'端磷酸化的单链 DNA (pDNA)生成环状 DNA (circular DNA)。
使用说明
1.解冻 5'端腺苷酰化修饰反应所需的各种试剂,将 5' DNA/RNA adenylase 置于冰上或冰盒内。
2.参考下表在冰浴中配制如下反应体系:
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注 1:如果同时进行多个腺苷酰化反应,可以把上表中除 ssDNA 或 ssRNA 之外的所有溶液和酶提前预混合,然后再分装到各反应管内。
注 2:如果涉及 RNA 操作,需要严格按照 RNA 操作的规范进行,避免 RNase 污染,相关试剂和耗材需要经过 DEPC 处理去除 RNase 或者确保是 RNase free 的。如果涉及单链 RNA,推荐适量添加 RNase Inhibitor。
3.腺苷酰化反应:65℃孵育 1h。为了使连接反应更加充分,可以适当延长反应时间。
4.终止反应:85℃孵育 5min 以终止反应。
5.腺苷酰化产物的电泳鉴定:电泳上样前 95℃孵育 5min 随后置于冰浴,以充分变性。尿素(7M)变性聚丙烯酰胺凝胶(15%)进行凝胶电 泳分析。腺苷酰化修饰后分子量会变大一点。
6.浓缩及后续用途:可以采用常规的乙醇沉淀方法进行浓缩,后续可以使用 T4 RNA Ligase2, truncated (200U/µl)等用于和小 RNA 等 的 3'羟基的连接反应。
保存条件: -20℃保存,≤0℃运输
注意事项:
(1)底物单链 DNA 或单链 RNA 的 5'端磷酸化是必须的,3'端可以进行氨基化等封闭,也可以不封闭;不进行 3'端氨基化等封闭时,建议将 ATP 的浓度增加至 0.5mM,可以避免底物发生环化或串联反应。
(2)5' DNA/RNA adenylase 不能连接双链 DNA (dsDNA)之间的缺刻。5' DNA/RNA adenylase 的最佳反应温度为 65℃,并且在 25℃时会出现 去腺苷酰化现象,因此反应完成后推荐在 85℃孵育 5min 以失活 5' DNA/RNA adenylase。如果没有充分失活 5' DNA/RNA adenylase,后续经 历室温温度条件时,会导致腺苷酰化比例下降。
(3)5' DNA/RNA adenylase 使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
(4)本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
(5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
我们的级别选择指南涵盖了目录中所有的变体的纯度、稳定剂状态和应用适用性。
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