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EZ-TA/Blunt 零背景 pTOPO II 克隆试剂盒
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为什么选择此级别
BioReagent,分子生物学级,无菌 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
本产品采用拓扑异构酶 I（Topoisomerase I）的连接原理，不同于使用 T4 DNA 连接酶的传统克隆方法，可在数分钟甚至数秒内高效连接 DNA 片段，可兼容 TA 克隆与平末端克隆。有效连接片段长度可达 10 kb。此外，本产品无自连、零背景，无需蓝白斑筛选，阳性克隆比例高，极少出现空载体，是简单、快速、零背景免筛选的 TOPO 通用型克隆试剂盒。载体上具有氨苄青霉素（Amp）和卡那青霉素（Kan）双抗性，有助于减少卫星菌落，便于后续挑取阳性克隆。试剂盒中提供 800 bp 的 DNA 片段（Control Insert）作为连接反应的阳性对照，同时提供 M13 F/R Primer Mix 通用型引物用于菌落 PCR 鉴定。
产品组分表
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产品特点
1. 兼容范围：适用于连接平末端和带3’-A的PCR产物。
2. 快速反应：连接反应仅需5 min。
3. 阳性率高：载体具有氨苄青霉素和卡那青霉素双抗性。
4. 简单高效：无自连、零背景，无需蓝白斑筛选。
保存条件
-20℃恒温保存，保质期 12 个月。
操作步骤
1. 连接反应的准备：PCR反应需使用非磷酸化引物。扩增产物可为平末端或携带3’-末端A碱基。
注1：PCR产物，特别是以质粒为模板的PCR产物，推荐进行胶回收纯化后使用，因为模板质粒也可能长出菌落（非目的载体）。
注2：酶切产物或其它带磷酸化末端的片段，需要进行去磷酸化处理后再进行连接反应。
2. 连接反应：
1） 室温下，按下表配制反应体系。
注：此步骤在室温进行，不能在冰上进行。
（注意表格中的字母a需上标） |
用移液器轻轻吹打或轻弹管底混匀，低速瞬时离心至所有液体在离心管底。
a如果使用5 μl体系连接，各成分按照比例减半使用。为提高加样准确性，尽量使用正常体系操作。
不同大小插入片段的推荐用量：
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2） 20-37℃连接5 min。
注：本载体推荐20-37℃放置5 min完成连接，但多数情况下连接2-3 min已经可以得到足够多的转化子。
3） 连接产物可直接转化感受态细胞。如尚未准备好感受态细胞，可以将连接产物短时间置于冰上备用。
3. 转化：以常规化学转化为例，具体方法请参考所使用感受态细胞的说明书；电转化需首先对连接反应液进行脱盐处理。
1） 将感受态细胞置于冰上融解。
2） 取适量连接反应液加入至感受态细胞中（连接反应液体积≤10%感受态细胞体积），轻柔混匀，冰浴10-30 min。
3） 42℃加热45-60 s后，冰浴2 min，该过程不要摇动离心管。
4） 加入800 μl SOC或LB培养基，37℃振荡培养40-60 min。
5） 将菌液均匀涂布到含100 μg/ml氨苄青霉素（Amp）或者50 μg/ml卡那青霉素（Kan）的LB琼脂平板，37℃培养
12-16 h。
4. 转化子筛选鉴定：
1） 菌落/菌液PCR：可选用M13 F/R Primer Mix或基因特异性引物进行菌落/菌液PCR扩增。应尽可能设立阳性对照和阴性对照反应。
2） 酶切鉴定：挑取白色正常菌落，摇菌抽提质粒。插入片段较大的情况下，可直接电泳观察质粒大小即可鉴定出是否含有插入片段；也可用EcoR I/EcoR V单酶切释放插入片段或用其它合适的内切酶酶切，琼脂糖凝胶电泳检测片段大小，确定是否含有目的片段。
3） DNA测序：选用M13 Forward和M13 Reverse通用型引物进行测序鉴定。
物理外观：Liquid
是否无菌：是
规格
规格或纯度
BioReagent, 分子生物学级, 无菌
英文名称
EZ-TA/Blunt Zero pTOPO II Cloning Kit
储存与运输
储存条件
-20°C储存,避免反复冻融
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
Store at -20℃ long term (12 months). Avoid freeze/thaw cycle.
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ25F0724834 |
分析证书 | E1372025 |
技术文档和文章
溶液计算器
常见问题
什么是「分子生物学级」？
「分子生物学级」表示该产品经过加工和检测，适用于分子生物学和蛋白质组学。典型规格包括：低或不可检测的核酸酶/蛋白酶活性、低内毒素、受控的微生物限度，以及高批间重现性。
什么是「BioReagent」？
「BioReagent」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。
本产品应如何储存？
请于?20 °C条件下保存。避免反复冻融。建议按单次用量分装保存。
本产品如何运输？
本产品采用保温箱配冰袋运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA？
每个订单都会随附分析证书（COA），您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA，请联系您的客户代表，或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。
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查看 BioReagent 级别指南 → 查看 Suitable for molecular biology 级别指南 → 查看 Sterile 级别指南 →产品仅提供给经过验证的企业、机构和合格的专业人员用于研发。不适用于人类、动物、诊断或治疗。
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