BioReagent 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
外泌体(Exosome)是由不同细胞分泌的直径 30-150nm 的胞外膜性囊泡(Extracellular Vesicles，EVs）。外泌体普遍存在于多种体液中，其内容物丰富，包括蛋白质、脂质和核酸等，在细胞间信息交流中发挥着重要作用，主要参与免疫抗原呈递，神经递质传递，脂类代谢及细胞信号转导等过程，并与多种疾病的发生、发展、治疗及预后密切相关。差速超速离心作为传统并有效的外泌体分离方法，但其复杂的操作流程，昂贵的仪器设备，限制了外泌体的常规研究。通过多聚物沉淀外泌体，具有简单、快速、可大体积操作和成本较低优点外，其分离的外泌体含有较多污染蛋白，限制了下游部分应用。能够高纯度地提取和纯化生物样本（血清、血浆或尿液等）和细胞培养上清中外泌体，目前有效的方法是通过抗体偶联磁珠亲和捕获，但是其成本较高，且不易捕获总外泌体，也限制了外泌体的常规研究，尤其是临床样本外泌体的研究。
阿拉丁研发出一种具有自主知识产权的提取和纯化生物样本和细胞培养上清中外泌体的方法，即外泌体提取和纯化试剂盒，能够简单、快速地捕获生物样本（血清、血浆或尿液等）和细胞培养上清中外泌体，尤其是血清或血浆样本。其主要原理是依据外泌体的膜结构特点（脂质双分子层），设计和修饰特异结合外泌体的树脂，通过与外泌体脂质双分子层组成成分结合，而几乎不与样本中其它蛋白质结合来实现外泌体的提取和纯化，得到较纯的完整外泌体。这种方法简单，易于操作，适合常规外泌体实验要求，有广泛的下游应用，如粒径分析，核酸提取，WesternBlot，ELISA，蛋白质质谱和外泌体标记等。
应用范围：
本产品只用于科学研究，不能用于临床诊断。
本试剂盒提取的外泌体除了可用于粒径分析，WesternBlot，ELISA，核酸提取及其后续分析（Q-PCR，测序等）外，也可用于蛋白质质谱和外泌体标记等。
试剂盒组成和说明：
本试剂盒只适用于血清或血浆的外泌体提取和纯化。
本试剂盒每个反应是基于500μl血清或血浆作为起始体积，样本不足时，需要用无核酸酶水补充至500μl，但样本量不要低于200μl。
组分表：
| E771451 | 组分名称 | 10T | 30T | 50T | Storage |
| E771451A | 平衡缓冲液（Equilibration Buffer） | 5mL | 15mL | 25mL | 2-8℃ |
| E771451B | 结合缓冲液（Binding Buffer） | 20mL | 60mL | 50mL×2 | 2-8℃ |
| E771451C | 洗涤缓冲液（Washing Buffer） | 5mL | 15mL | 25mL | 2-8℃ |
| E771451D | 洗脱缓冲液（Elution Buffer） | 5mL | 10mL | 15mL | 2-8℃ |
| E771451E |
纯化柱和收集管（Spin Columns Containing Resin/Collection Tubes 2.0mL）
| 10套 | 30套 | 50套 | 2-8℃ |
| E771451F | 1.5mL离心管 (Centrifuge Tubes1.5mL) | 10个 | 30个 | 50个 | 2-8℃ |
试剂盒在使用前需恢复到室温。
操作方法：
1.样本预处理
对于冻存血清或血浆，室温或25℃水浴解冻，将完全融化的样品置于冰上；对于新鲜血清或血浆，收集样品后置于冰上，12,000×g，离心15min，去除细胞或细胞碎片，离心后将上清吸入新管中。
图1 简单操作流程图
2. 纯化柱平衡
吸取500μl平衡缓冲液加入纯化柱中（已放入收集管中），500×g离心2min，弃去滤液，纯化柱重新放入收集管中，待用。
3. 外泌体结合
吸取500μl处理的血清或血浆放入5.0ml离心管中（试剂盒不提供），加入结合缓冲液1.5ml，颠倒混匀后静置2min，然后将混合液分3次（每次大约700μl）加入已平衡的纯化柱中（已放入收集管中），500×g离心2min，每次倒掉滤液。
4. 外泌体洗涤
吸取0.5ml洗涤缓冲液加入纯化柱中（已放入收集管中），500×g离心2min，然后再1,500×g离心4min，弃去滤液和收集管。
5. 外泌体洗脱
将纯化柱放入新的1.5ml离心管中（试剂盒提供），加入200μl洗脱液于纯化柱中，室温静置5min，500×g离心2min，将离心得到的溶液再加入纯化柱中，500×g 离心2min，弃掉纯化柱，最后离心管中液体为提取的外泌体，可直接应用于下游实验（如，外泌体鉴定、核酸提取、蛋白质质谱和外泌体标记等），或者储存在2-8℃保存一周，-20℃或-80℃保存大约三个月。
注意事项：
1. 离心均在室温下进行。
2. 纯化柱最大容量为700μl，转移混合液至纯化柱时要小心，不要溢出。
常见问题：
Q1: 外泌体提取和纯化试剂盒是特异分离样本中外泌体吗？
A1：外泌体提取和纯化试剂盒分离外泌体的原理是依据外泌体的膜结构特点，设计和修饰特异结合外泌体的树脂，通过与外泌体脂质双分子层组成成分结合，而几乎不与样本中其它蛋白质结合来实现外泌体的提取和纯化的，所以不能区分颗粒的大小，即含有其它囊泡。
Q2：提取的外泌体如何保存？
A2：短时间内使用，可在4°保存一周，长时间保存，需要-80°C保存，避免反复冻融，另外，保存管最好是低吸附蛋白的。
Q3：用此种方法分离的外泌体，具体有哪些应用呢？
A3：由于此种方法分离的外泌体污染蛋白较少，其应用范围较广，如：
(1) 外泌体鉴定，包括电镜形态观察，纳米颗粒追踪（NTA），WesternBlot或流式细胞分析等。
(2) 分离外泌体蛋白质，用于质谱分析。
(3) 分离外泌体DNA/RNA，用于突变检测、RT-qPCR、芯片表达谱或测序（NGS）等。
(4) 外泌体荧光标记和受体细胞的摄取实验等。
Q4：如何鉴定提取的外泌体？
A4：外泌体是体细胞分泌的囊泡群体中一种，直径一般30-150nm，通常确定外泌体一般至少需要三个条件：电镜形态观察；颗粒粒径测定和蛋白标志物检测（WesternBlot检测CD9，CD81,CD63，Alix等）。
Q5:如何定量纯化的外泌体蛋白质浓度？
A5:裂解外泌体后，可应用Bradford或BCA方法测定裂解物蛋白浓度（µg/µl）。
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ25F0825254 |
分析证书 | E771451 |
危险品化学品经营许可证（带存储）