BioReagent,标曲法 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
2-8°C储存,避光。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
铁是人体必需的元素之一，对人体的新陈代谢和身体健康具有重要作用，血液中铁的含量不足，就会造成缺铁性贫血。铁存在于人体所有的细胞内，各组织、器官包括各内分泌腺都含有铁。肝脏、脾脏和肺组织内含量较为丰富。成人体内含铁3～5克，大部分都以蛋白质复合物形式存在，极少部分以离子的形态存在。本试剂盒可用于动植物组织和血清（浆）或其他液体样本中的亚铁离子定量。样本中的Fe²⁺在酸性条件下和亚铁嗪反应生成紫红色化合物，在562nm处有吸收峰，通过测定该波长吸光度即可计算Fe²⁺的含量。
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使用方法
1. 样品处理
(1) 组织样本：按照每0.01 g组织加入0.1 mL提取液的比例，用匀浆器或研钵冰浴匀浆。12000× g，4℃离心 10 min，收集上清液，置冰上待测。
(2) 血清（浆）等液体样本：澄清的液体样本可直接检测。如果样本浑浊，5000× g，4℃离心 5 min，取上清液，置冰上待测。
注：本试剂盒提取液不能使用 BCA 蛋白定量，如需测定蛋白浓度，推荐使用阿拉丁即用型Bradford蛋白定量试剂盒 (去垢剂兼容型) （B1509656）。
2. 样品稀释
(1) 为确保样品数值在标准曲线范围内，建议进行预实验将样品设置多个稀释倍数，以确定样品中亚铁离子的大致浓度，如果数值不在标准曲线范围内，请调整样品的稀释倍数。
(2) 样本如需要稀释，血清（浆）等液体样本的稀释建议使用缓冲液，而组织样品的稀释建议使用提取液。
3. 绘制标准曲线
将40 mmol/L（40000 μmol/L）亚铁离子标准品用标准品稀释液进行稀释得到100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625 μmol/L的标准品，现配现用。
标准品稀释可参考下表：
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备注：下述实验中每个标准品管需200 μL标准品（注意不要在此步骤直接检测吸光度）。
4. 样品测定
(1) 酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 562 nm。
(2) 按下表设置反应体系加样。设置不加样品的空白对照管。
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(3) 混匀，37°C 孵育30 min，若浑浊则需12000× g，离心 10 min。取200 μL上清液于酶标板各对应孔中，在酶标仪562 nm处测定各孔OD值。空白孔的OD值记为A<sub>空白</sub>，标准品孔的OD值记为A<sub>标准</sub>，测定样品孔的OD值记为A<sub>测定</sub>。计算：ΔA<sub>测定</sub>= A<sub>测定</sub> - A<sub>空白</sub> ，Δ A<sub>标准</sub> = A<sub>标准</sub> - A<sub>空白</sub> 。
5. 亚铁离子含量计算
5.1 标准曲线的绘制
以标准品浓度为x轴，Δ A<sub>标准</sub> 为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将 ΔA<sub>测定</sub> 带入方程得到样品浓度Cₛₐₘₚₗₑ (μmol/L)。
5.2 亚铁离子浓度计算
5.2.1 血清（浆）等液体样本：亚铁离子含量 (μmol/L) = Cₛₐₘₚₗₑ × f；
5.2.2 组织样本：
(1) 以组织湿重进行计算： 亚铁离子含量 (μmol/kg wet weight) = Cₛₐₘₚₗₑ × f ÷ (m/V)；
(2) 按蛋白浓度计算：亚铁离子含量 (nmol/mg 蛋白) = Cₛₐₘₚₗₑ × f ÷ Cₚᵣ
注：
f：样本加入检测体系前的稀释倍数；
m：组织湿重质量（g）；
V：样本提取液加入量(mL)；
Cₚᵣ：样本蛋白质浓度，mg/mL。
注意事项
1. 操作过程中，样品与试剂等避免与铁器接触，以防污染。
2. 建议使用新鲜样本。亚铁离子易被氧化，样本放置时间较长或反复冻融会造成结果不准确。
3. 所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。
4. 正式检测前，建议选择 2-3 个预期差异较大的样本进行预实验。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
结果展示
典型标准曲线：
Iron is an essential trace element in the human body and a key component of hemoglobin, myoglobin, cytochromes, and various enzyme systems. It plays a crucial role in oxygen transport and fatty acid oxidation. Iron deficiency can lead to anemia, metabolic disorders, and impaired immune function, while iron overload is a risk factor for the development or exacerbation of several chronic diseases, such as diabetes, cardiovascular disorders, and neurodegenerative conditions. The detection principle of this kit is based on the reaction between ferrous ions (Fe²⁺) and ferrozine, which forms a violet-red colored complex. This colored product exhibits a characteristic absorption peak at 562 nm, and within a certain concentration range, the color intensity is directly proportional to the concentration of ferrous ions. By measuring the absorbance, the ferrous ion content in the sample can be quantitatively determined. This method offers high sensitivity, good stability, and excellent reproducibility, and is suitable for the determination of ferrous iron in various sample types, such as animal blood, tissues, cells, bacteria, and plants. This product is intended for research use only and is not suitable for clinical diagnosis or other purposes.
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ26F0838769 |
分析证书 | F1515877 |
危险品化学品经营许可证（带存储）