计算溶液所需的质量、体积或浓度。
ActiBioPure™,EnzymoPure™,无RNA酶,无动物源,无菌,无载体,生物活性 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
阿拉丁生产的 FnCas12a (Cpf1),也称为 Cpf1,是本公司自主研发的技术平台表达、纯化获得的一种由 RNA 引导的可编辑 DNA 的重组核酸内切 酶,具有基因编辑效率高,脱靶效率低的优点。FnCas12a 来源于 Francisella novicida U112, 分子量大约为 154kDa。FnCas12a 识别含有 TTN 的 PAM 序列,并且 FnCas12a 的切割位点相对远离其识别位点为多次编辑提供了可能性,这些特点使 Cas12a 与 Cas9 可以互为补充。只需简单将 guide RNA (gRNA)与 Cas12a 蛋白相结合,由于该 gRNA 仅含有 crRNA,无需 trans-activating crRNA (tracrRNA)即可实现基因编辑的目的。 FnCas12a 包含约 1300 个氨基酸,含有 RuvC-like 结构域,同时具有 DNA 和 RNA 内切酶的活性。研究表明,FnCas12a 与 Cas9 由于两者结构的 不同导致了其分子机制有所差异。CRISPR-Cas12a 系统是由 Cas12a 和 gRNA (crRNA,仅需约 40-44 个碱基)组成。FnCas12a 由 gRNA 引导 至互补链,识别互补链上 5'端短的富含 T 碱基(5'-TTN-3')的 PAM (Protospacer adjacent motif)序列,然后 FnCas12a 中的 RuvC 核酸内切酶结构 域逐个切割互补链和靶链,以产生交错的 DNA 双链断裂,断裂发生在 PAM 序列 3'端的约第 18 个碱基处,切割产物为 5'端突出 4 或 5 个碱基的粘 性末端。而 CRISPR-Cas9 系统是由 Cas9 和 gRNA (crRNA 和 tracrRNA 两个 RNA 分子融合而成)组成,Cas9 在 gRNA 的引导下,识别 3'端富含 G 碱基(5'-NGG-3')的 PAM 序列,并且 Cas9 需要使用 HNH 和 RuvC 两个核酸酶结构域协同切割 DNA,断裂通常发生在 PAM 序列 5'端的第 3 个碱基 处,最终产生平末端。
纯度(Purity):不含 DNA 内切酶和外切酶,不含 RNA 酶。
失活或抑制(Inactivation or inhibition):65℃加热 10 分钟失活。
组分和说明
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产品应用
可用于基因编辑和基因检测等。线粒体或质粒 DNA 等双链环形 DNA 的线性化。
产品优势
FnCas12a (Cpf1)酶的 C 端融合了核定位信号(Nuclear localization signal, NLS),NLS 有助于 FnCas12a 进入细胞后定位至细胞核,从而提高基 因编辑的效率。
使用说明
FnCas12a (Cpf1)体外消化靶 DNA
1.溶解并混匀体外消化反应所需的各种溶液。将 F Cas12a、gRNA、底物 DNA 置于冰浴上,使用无核酸酶水稀释 gRNA 至 300nM,底物 DNA 至 30nM。
2.按照下表配制反应体系(以 30μl 体系为例):
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3.用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀,室温离心数秒,使液体积聚于管底。25℃预孵育 10min。
4.加入 3μl 30nM 底物靶 DNA (30μl 最终体积),轻轻混匀(用移液器轻轻吹打混匀或用涡旋混合器在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀 液体,37℃孵育 10min。
5.向每个样品中加入 1μl 蛋白酶 K ,轻轻混匀, 室温孵育 10min。
6.向反应体系中加入 6μl DNA 上样缓冲液(6X) ,然后使用 1%琼脂糖凝胶进行电泳分析。
保存条件: -20℃保存,≤0℃运输
注意事项:
(1)本产品使用过程中需要确保 Nuclease-free,操作时应特别小心,避免被污染。所有操作都需要按照 RNase-free 的要求进行。
(2)对于操作环境中核酸酶的去除,推荐使用阿拉丁生产的 RNase and DNase Away (R749971) 以去除实验桌面上或其它接触面上的核酸酶。反应体系中 推荐加入 RNase Inhibitor 以保护 RNA 不被降解。
(3)本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
(4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
通过匹配包装上的批号来查找并下载产品的 COA,每批产品都进行了严格的验证,您可放心使用!
| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | F746075 | |
| 分析证书 | F746075 | |
| 分析证书 | F746075 |
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