CEX纯化柱的规格

用途：用于从非碳水化合物材料（包括盐、蛋白质和洗涤剂）中纯化O-聚糖。应用包括在肼解或任何其他非还原性O-聚糖释放方法后清除聚糖。

说明：滤筒含有储存在1M盐酸中的阳离子交换树脂。

结合能力：每个CEX盒通常可以清除1000µg糖蛋白释放的O-聚糖。

样品数量：CEX墨盒仅设计用于一次性使用。

合适的样品：可以纯化多种O-聚糖，包括二糖、三糖和寡糖。甘氨酸样品必须在基本上为水溶液的溶液中应用于药筒。

结构完整性：未检测到唾液酸化聚糖的丢失。

结合选择性：大多数复杂聚糖混合物的基本化学计量结合和洗脱。

储存：在4至10°C的黑暗中冷藏。避免热源、光源和湿气。自制造之日起，滤筒至少稳定6个月。

装运：产品可在环境温度下装运。

处理：确保使用的玻璃、塑料制品或溶剂不含糖苷酶和环境碳水化合物。在所有样品处理程序中使用无粉末手套，避免污染环境碳水化合物。

安全：请阅读所有使用化学品的材料安全数据表（MSDS）。

所有涉及危险试剂的过程都应使用适当的个人安全防护措施-眼镜、耐化学手套（如丁腈橡胶）等-并在适当的情况下在实验室通风柜中进行。

仅供研究使用。不用于人类或药物

所需的其他试剂和设备

• 纯水：电阻率18 MΩ-cm，无颗粒（>0.22μM），TOC<10 ppb

• 移液管

• pH纸

• 离心式蒸发器（例如ThermoSvant SpeedVac®或GeneVac®）。

CEX清理计划概述

1）准备聚糖样品

     去除所有有机溶剂，并从样品中去除粘性或颗粒材料。

2）充注滤筒

      CEX药筒注水。

3）涂抹聚糖样品

      将聚糖样品的水溶液应用于滤筒。

4）洗脱聚糖

      用水冲洗滤筒中的结合聚糖。

5）洗脱后处理

      干燥聚糖，以便进一步分析。

清理时间线

CEX聚糖清理程序通常需要约90分钟：

样品制备

1） 准备聚糖样品

待清洗的样品必须在含水缓冲液中或仅含有低百分比有机溶剂的缓冲液中。如果样品含有有机溶剂，则干燥样品并在水中或水性缓冲液中进行重组。

药筒的制备

2）给CEX药筒注水

对于每个样品，用10 x 1 ml水清洗，制备CEX药筒

检查最后1 mL水洗液的pH值。水洗后，洗脱液的pH应为7。

如果流量受到限制，例如气隙，则向药筒顶部施加轻微压力（例如使用移液管），以恢复正常流量。

不要让树脂变干。

在应用下一种溶液之前，让每个等分试样流过树脂床。

样品的应用

3） 应用示例

a、 将药筒放在要收集洗脱液的小瓶上

b、 将每个样品应用于准备好的CEX滤筒，并使溶液在重力作用下缓慢流过树脂床。

c、 用200µl水冲洗每个小瓶，并添加到每个柱的顶部，使溶液在重力作用下缓慢流过树脂床。

如果通过柱的流动受到限制，例如受到气隙的限制，则向药筒顶部施加轻微压力（例如使用移液管），以恢复正常流动。

甘氨酸的洗脱

4） 洗脱聚糖

用3 x 0.5 ml水洗涤，洗脱CEX柱上的聚糖。

洗脱液将含有纯化的释放聚糖。

如果通过柱的流动受到限制，例如受到气隙的限制，则向药筒顶部施加轻微压力（例如使用移液管），以恢复正常流动。

注意，在该阶段，聚糖从CEX滤筒中洗脱后将在微酸水中。

5）干燥洗脱的聚糖

如果需要，并取决于聚糖的分析方法，应通过离心蒸发干燥样品，然后将其重新溶解在所需体积的水或溶剂中，以便进一步分析。

保持样品温度低于28°C，以尽量减少脱分析。

如果您通过任何首先涉及干燥的方法（例如添加到MALDI-MS板或荧光标记）分析等分试样，则该步骤是可选的，可以省略。

样品储存

6）冷冻保存甘氨酸

对于长期储存，将聚糖储存在-20℃或更低的温度下。

释放的聚糖可在干燥或用水重新配制后冷冻储存。

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