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EB10 滤芯

EB10 滤芯规格

用途:用于从各种复杂混合物中纯化聚糖(包括去除盐和洗涤剂)。

说明:滤芯包含独特的无孔电子相互作用(EI)基质。这就像一种超级疏水性树脂,甚至可以结合非常亲水的聚糖。大多数盐和洗涤剂要么简单地通过滤筒,要么结合得很轻,可以在聚糖洗脱之前洗掉。


结合能力:每个EB10 滤芯通常可结合多达50μg的O-或N-连接聚糖。

结构完整性:唾液酸、岩藻糖、硫酸盐或磷酸盐无明显损失(<2摩尔%)。

样品数量:EB10 滤芯仅设计用于一次性使用。

合适的样品:可以纯化多种聚糖。这些包括N-连接和O-连接型寡糖、三糖和更大的结构。该滤筒既不适用于单糖或二糖,它们通常结合得太弱而无法有效纯化,也不适用于可与树脂紧密结合的大型线性聚唾液酸化聚糖。

甘氨酸样品必须在基本上为水溶液的溶液中应用于药筒。

结合效率:大多数聚糖>95%

结合选择性:大多数复杂聚糖混合物的基本化学计量结合和洗脱。

储存:在室温下黑暗中储存。避免热源、光源和湿气。墨盒在供应时至少稳定两年。

装运:产品可在环境温度下装运。

处理:确保使用的玻璃、塑料制品或溶剂不含糖苷酶和环境碳水化合物。在所有样品处理程序中使用无粉末手套,避免污染环境碳水化合物。

安全:请阅读所有使用化学品的材料安全数据表(MSDS)。

所有涉及危险试剂的过程都应使用适当的个人安全防护措施-眼镜、耐化学手套(如丁腈橡胶)等-并在适当的情况下在实验室通风柜中进行。


仅供研究使用。不适用于人类或药物使用。


所需的其他试剂和设备

•纯水(HPLC级)

•甲醇

•1M氢氧化钠(aq)

•30%乙酸(aq)

•乙腈(HPLC级)

•三氟乙酸(分析级)

•洗涤A:5%(v/v)乙腈(aq)加0.1%三氟乙酸

•洗涤B:50%(v/v)乙腈(aq)加0.1%三氟乙酸

•移液管

•0.5μm或0.2μm微离心过滤器

•微型离心机


介绍

EB10滤芯设计用于从非碳水化合物材料(包括盐、蛋白质和洗涤剂)中纯化聚糖。应用包括在肼解、内切糖苷酶消化物(包括PNGase F消化物)和酶处理后以及荧光标记前后清除聚糖。


EB10清理协议概述

1) 清洗墨盒

用连续的水、1M氢氧化钠、水、30%乙酸和水洗涤EB10滤筒。

2) 给树脂涂底漆

通过用酸性乙腈水溶液洗涤,使填料中树脂的活性表面涂底漆。

3) 准备聚糖样品

稀释所有有机溶剂,并从样品中去除粘性或颗粒物质。

4) 应用聚糖样品

将聚糖样品的水溶液应用于滤筒。

5) 洗掉非聚糖污染物

非聚糖污染物如盐和洗涤剂用稀酸性乙腈水溶液洗涤。

6) 洗脱聚糖

使用更高浓度的酸性乙腈水溶液将结合的聚糖从滤筒中洗掉。

7) 洗脱后处理

过滤洗脱的聚糖溶液。

8) 分析聚糖

聚糖现在可以进行分析了。


清理时间线

EB10聚糖清理程序通常需要约65分钟:

程序

时间

已用时间(分钟)

过滤器样本

20分钟

20

清洗和灌注滤筒

15分钟

25

应用示例

10分钟

35

洗掉非聚糖污染物

15分钟

50

洗脱聚糖

15分钟

65

 

药筒的制备

1) 清洗墨盒

用以下方法清洗每个EB10滤芯:

试剂

体积(ml)

甲醇

0.5

1M氢氧化钠

0.5

水

1

30%乙酸

1

水

1

这去除了在储存期间可能与树脂基质结合的任何杂质

如果流量受到限制,例如气隙,则向滤筒顶部施加轻微压力(例如,使用干净的带手套的拇指),以恢复正常流量。

N、 B.不要通过施加过大压力或使用真空迫使液体通过树脂床,因为这会导致多孔玻璃料堵塞或树脂通过底部玻璃料泄漏。

2) 给墨盒注油

用以下物质填充每个滤筒:

试剂         体积(ml)

洗涤B          0.5

洗涤A            1

这为聚糖的结合准备了树脂表面。

3) 准备聚糖样品
待清洗的样品必须在含水缓冲液中或仅含有低百分比有机溶剂的缓冲液中。如果样品含有有机溶剂,则用水稀释,直到有机溶剂含量小于5体积%。

某些类型的样品可能含有颗粒或粘性物质,这些物质会阻碍通过EB10滤筒的流动。其中包括通过内切糖苷酶处理释放聚糖的一些糖蛋白。用PNGase F处理的单克隆抗体特别容易形成粘性物质。在这种情况下,为了最大限度地减少EB10清理筒的堵塞:
a、 用500μl水稀释每个样品。
b、 通过涡旋充分混合。
c、 在微型离心机中旋转(典型条件是以10000rpm离心15分钟。
c、 小心地用移液管吸出上清液,并将其涂抹到制备好的EB10滤筒上(参见步骤4)。
4) 应用样本
将样本涂抹到滤筒上。
当盐和非疏水性非聚糖污染物通过时,聚糖应与基质结合。
5) 洗掉非聚糖污染物
用以下物质清洗滤筒:
试剂        体积(ml)
水               0.7

洗涤A         0.7
这将从柱中去除残留的盐和非疏水性非聚糖材料。
将这些洗涤物丢弃到合适的废物容器中。
6)洗脱聚糖
将滤筒放在收集容器上,用4 x 0.2 ml洗涤液B洗脱,使每个等分试样在下一个应用前排出,从而回收聚糖。
当疏水性物质如某些肽、蛋白质和洗涤剂与固相基质结合时,应洗脱甘氨酸。
7)干燥洗脱的聚糖(可选)
如果合适,将含聚糖的部分蒸发至干,然后重新溶解在所需体积的水或溶剂中,以便进一步分析。
8)过滤洗脱的聚糖
样品应过滤至至少0.5μm。
我们建议使用带有惰性膜(例如PTFE或聚丙烯)的微型离心旋转过滤器进行过滤。

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Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《EB10 滤芯》. 阿拉丁知识库,更新于 2022年12月19日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/EB10-Cartridges.html
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