在呼吸机相关性肺炎的发病机制研究中，发现气管导管细菌生物被膜与呼吸机相关性肺炎之间存在密切相关性。细菌生物被膜是细菌黏附于活性或情性材料表面形成的与浮游细胞相对应的生长方式，由细菌和自身分泌的胞外基质组成，导致体内感染难以清除。细菌在气管导管上定植，形成生物膜，导致细菌耐药性增加，感染难以清除，从而成为一个持续存在的感染源，是导致慢性感染的一个重要原因。

应用

用来研究生物膜体内致病机制，开发研究抗气管导管相关性细菌生物被摸的药物及其药物的筛选等。

操作方法

气管导管相关性细菌生物膜感染动物模型的建立

材料与仪器

器材：
常规手术器械一套、导管、一次性输液器。
试剂：
①菌种；②培养基；③麻醉药（水合氯醛）；④无菌生理盐水。

步骤

静脉置管法建立静脉置管感染动物模型的造模方法分有无导管两类，具体步骤如下：

A、挑取铜绿假单胞菌临床分离株单菌落接种于 L-Broth 培养液中，37 ℃、200 r/min 振荡培养过夜。

B、分光光度计测定菌液 OD 值，调整 OD 值至 0.5。

C、取 10% 水合氯醛 0.3 mL/100 g 麻醉大鼠，固定大鼠四肢和头，将颌下至两前腿之间的皮毛剪掉，用碘酒从中间向外周消毒，再用乙醇脱碘。

D、用镊子提起皮肤，用小剪刀剪开一个小口，再在消毒范围的正中，从颌下至胸部剪一个长约 1.5 cm 的小口。用剪刀剪开浅筋膜，直至暴露肌肉，用弯钳从中央钝性分离肌肉直至暴露气管。

E、分离气管周围组织，将小管垫放到气管下，用小剪刀垂直剪开气管一个长约 0.5 cm 的小口，将灭菌导管放入气管内，再用小缝线针穿过气管切口远端最近的软骨间肌肉，并穿过导管，从切口近段最远的软骨间肌肉穿出。先拉紧缝线，观察大鼠呼吸情况，如平稳即可结扎。

F、将菌液通过导管缓慢注入肺内，然后将皮下组织理顺盖好，将皮肤缝合后用乙醇消毒伤口。

G、在不同时间点处死大鼠取出导管研究肺部变化。

A、挑取铜绿假单胞菌临床分离株单菌落接种于 L-Broth 培养液中，37 ℃、200 r/min 振荡培养过夜。

B、分光光度计测定菌液 OD 值，调整 OD 值至 0.5。

C、接种菌液于预先放置无菌导管 (约 l cm，作为 BF 生长的载体) 的 24 孔细胞培养板中，每孔 1 mL，隔日换液，7 天后得到成熟 BF。

D、取 10% 水合氯醛 03 mL/100 g 麻醉大鼠。固定大鼠四肢和头，将颌下至两前腿之间的皮毛剪掉，用碘酒从中间向外周消毒，再用乙醇脱碘。

E、用镊子提起皮肤，用小剪刀剪开一个小口，再在消毒范围的正中，从颌下至胸部剪一个长约 1.5 cm 的小口。用剪刀剪开浅筋膜，直至暴露肌肉，用弯钳从中央钝性分离肌肉直至暴露气管。

F、分离气管周围组织，将小管垫放到气管下，用小剪刀垂直剪开气管一个长约 0.5 cm 的小口，将长有 BF 的导管放入气管内，再用小缝线针穿过气管切口远端最近的软骨间肌肉，并穿过导管，从切口近段最远的软骨间肌肉穿出。先拉紧缝线，观察大鼠呼吸情况. 如平稳即可结扎。

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