用于致畸性试验的骨组织透明化溶液(KOH)
用于致畸性试验的骨组织透明化溶液(KOH)
Bone Tissue Clearing Solution (KOH Solution) for Teratogenicity Testing 是一种以氢氧化钾为基础配制的试剂,专门用于使软组织透明化,同时保留胎儿及新生动物标本的骨骼结构,以便准确评估致畸性和发育毒性。
- 产品名称
- 致畸性检测用骨组织透明液(KOH溶液)
- 货号
- B1529929
- 活性试剂
- 氢氧化钾(KOH)
- 主要应用
- 胎儿标本的骨骼透明化及致畸性评估
- 作用组织
- 包裹骨骼和软骨的软组织(肌肉、结缔组织)
- 兼容性
- 通常与茜素红S和/或阿尔新蓝染色联合使用
骨组织透明液是什么?为何使用?
致畸性检测用骨组织透明液(KOH溶液)是一种碱性试剂,其主要功能是选择性消化并透明化包裹胎儿或新生动物标本骨骼结构的软组织(肌肉、皮肤及结缔组织),从而在无需物理解剖的情况下,清晰呈现完整的骨骼和软骨结构。
在法规要求的临床前发育毒理学研究中,对啮齿类或兔胎儿进行骨骼评估是国际指南(如ICH S5、OECD TG 414)规定的必检终点,用于检测候选药物或化学物质的致畸效应。KOH透明化步骤是全标本骨骼染色工作流程的核心环节,可可靠检测骨骼畸形、变异及骨化缺陷。
作用机制:KOH如何透明化软组织
氢氧化钾(KOH)是一种强碱,可水解构成肌肉纤维和结缔组织基质的蛋白质中的肽键。在透明化方案中通常使用的浓度(一般为1–2% w/v水溶液),KOH可选择性降解软组织蛋白,同时在标本经预固定和预染色处理的情况下,对矿化骨骼和富含糖胺聚糖的软骨影响相对较小。
透明化程度与时间和温度相关。体积较大或肌肉较发达的标本需要更长的孵育时间或稍高的温度。KOH消化过度可能导致骨骼结构崩解,因此需密切监控标本处理进程。KOH透明化完成后,标本依次转移至梯度甘油溶液中,用于长期保存并提高光学清晰度。
注意:SKU B1529929产品的具体KOH浓度、孵育时间和温度参数应以产品说明书为准。此处引用的数值为常规教科书范围,需经核实。
致畸性研究中KOH骨骼透明化标准操作方案
以下概述了一种通用的全标本骨骼透明化与染色工作流程,其中致畸性检测用骨组织透明液(KOH溶液)(B1529929)作为核心透明化试剂。具体的试剂浓度和操作时间请以产品说明书为准。
- 固定:胎儿标本通常在95%乙醇或10%中性缓冲福尔马林中固定一定时间,以保存组织形态。
- 去内脏和去皮:小心去除内脏和皮肤,以促进试剂渗透并缩短透明化时间。
- 软骨染色(可选预处理步骤):可在KOH透明化前使用阿尔新蓝溶液对软骨成分进行染色标记。
- 骨骼染色:使用茜素红S溶液对矿化骨骼进行染色标记。
- KOH透明化:将标本浸入致畸性检测用骨组织透明液(KOH溶液)(B1529929)中孵育,直至软组织变为透明。应定期目视监控处理进程,防止过度消化。
- 甘油梯度转移:透明化后的标本依次转移至梯度甘油/KOH混合液中,最终保存于100%甘油中,用于检查和归档。
- 骨骼评估:在体视显微镜下检查标本,依据法规评分标准记录骨化中心、骨骼畸形及变异情况。
安全、操作与储存注意事项
氢氧化钾是一种腐蚀性强碱,操作时必须佩戴适当的个人防护装备(PPE),包括耐化学品手套、防护眼镜和实验室大衣。皮肤或眼睛接触可导致严重的化学灼伤。操作应在通风良好的区域或通风橱内进行,尤其是在配制或加热溶液时。
废液处置必须符合当地机构及法规对腐蚀性化学废物的处理要求。KOH溶液在未经适当中和处理的情况下,不得与强酸混合。
B1529929的储存条件和有效期应以产品标签和安全数据表(SDS)为准。一般而言,KOH水溶液应密封保存于耐碱容器中,避免受潮和接触二氧化碳,以防降解(生成碳酸钾)。
有关B1529929的完整危害信息、GHS分类及急救措施,请参阅官方安全数据表(SDS)。
常见问题
KOH溶液在骨骼致畸性研究中的作用是什么?
KOH溶液作为软组织透明剂,通过水解肌肉和结缔组织蛋白使标本变为透明,同时保留骨骼和软骨结构。这使研究人员无需机械解剖即可观察并评分整个胎儿骨骼,从而检测法规发育毒性指南要求的骨骼畸形、骨化缺陷及变异情况。
通常与KOH骨骼透明液联合使用的染料有哪些?
与KOH透明化联合使用的最常见染料为茜素红S(将矿化骨骼染成红色)和阿尔新蓝(将软骨染成蓝色)。两者联用可在同一透明标本中同时显示骨化和软骨骨骼成分。
如何防止KOH透明化过程中胎儿标本的过度消化?
为防止过度消化,应在KOH孵育过程中频繁目视检查标本。一旦软组织充分透明、骨骼结构清晰可见,应立即将标本转移至甘油梯度液中。体积较小或发育程度较低的标本所需的孵育时间和KOH浓度均低于较大标本。具体推荐参数请参阅B1529929产品说明书。
骨组织透明液(B1529929)是否适用于啮齿类和兔的胎儿标本?
KOH基透明液在法规发育毒理学研究中广泛应用于多种物种,包括小鼠、大鼠和兔。然而,KOH浓度和孵育时间等方案参数可能需要根据标本大小和组织密度进行调整。请参阅产品说明书或联系Aladdin Scientific技术支持,确认物种适用性。
参考文献
- Kimmel CA, Trammell C. A rapid procedure for routine double staining of cartilage and bone in fetal and adult animals. Stain Technology. 1981;56(5):271-273.
- OECD Test Guideline 414: Prenatal Developmental Toxicity Study. Organisation for Economic Co-operation and Development, Paris, 2018.
- ICH Harmonised Guideline S5(R3): Detection of Reproductive and Developmental Toxicity for Human Pharmaceuticals. International Council for Harmonisation, 2020.
- Inouye M. Differential staining of cartilage and bone in fetal mouse skeleton by alcian blue and alizarin red S. Congenital Anomalies. 1976;16(3):171-173.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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