CD83 小鼠单克隆抗体:筛选、应用与操作指南
CD83 小鼠单克隆抗体:筛选、应用与操作指南
CD83 Mouse mAb是一种以人CD83抗原为靶标的鼠源单克隆抗体,专为在多种免疫学研究应用中可靠检测CD83表达细胞(尤其是成熟树突状细胞)而设计。
- 产品货号
- Ab350904
- 抗体形式
- 鼠单克隆抗体(mAb)
- 制剂
- 仅PBS缓冲液(不含载体蛋白,不含防腐剂)
- 靶抗原
- CD83(人源)
- 主要应用
- 流式细胞术及基于免疫检测的成熟树突状细胞和活化B/T细胞检测
- 克隆参考
- absea #KC-626
背景:CD83作为免疫学标志物
CD83是一种跨膜糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族,主要表达于成熟树突状细胞(DC)表面。其表面表达被广泛用作DC成熟的标志,在抗原递呈、免疫激活及DC生物学研究中不可或缺。
除树突状细胞外,CD83的表达还见于活化B淋巴细胞、活化T淋巴细胞及某些单核细胞群体。从细胞表面脱落的可溶性CD83(sCD83)与免疫调节功能相关,包括抑制T细胞应答及在耐受诱导中发挥潜在作用。
CD83抗体的研究应用涵盖基础免疫学、疫苗开发、自身免疫研究及肿瘤学等领域,其中DC成熟状态的改变是常见研究对象。
产品规格与储存指南
货号:Ab350904 | 克隆:absea #KC-626 | 宿主种属:小鼠 | 抗体类型:单克隆
制剂:本抗体以纯PBS配制,不含载体蛋白(如BSA)或防腐剂(如叠氮化钠)。纯PBS配方有利于后续偶联、标记实验,以及在外源蛋白会干扰检测性能的应用场景中使用。
储存建议(通用最佳实践——请以批次特定说明书为准):
- 短期使用(4周以内)可储存于2–8 °C。
- 长期储存请分装后于−20 °C或−80 °C冷冻,避免反复冻融。
- 冻融次数不超过3次;条件允许时建议制备单次用量分装。
- 若使用荧光素偶联变体,请避光保存。
注意:由于配方不含防腐剂,操作时应严格遵守无菌要求;若细胞实验需要无菌条件,融化后可考虑进行无菌过滤。
推荐实验方案:流式细胞术(细胞表面染色)
以下方案为CD83细胞表面流式染色的通用起始框架。请针对具体细胞类型和仪器配置,通过滴定实验优化抗体浓度和孵育条件。
- 细胞制备:收获目标细胞(如单核细胞来源树突状细胞、PBMC或活化B细胞)。用冰冷PBS+1% BSA(FACS缓冲液)洗涤两次,调整至每100 µL含1–5×106个细胞。
- Fc受体封闭:在冰上加入适量Fc封闭试剂孵育10分钟,以减少非特异性结合。
- 一抗染色:加入CD83 Mouse mAb(Ab350904),按经验确定的最佳浓度使用(建议起始范围0.5–5 µg/mL,需经滴定验证)。在冰上避光孵育20–30分钟。
- 洗涤:用FACS缓冲液洗涤两次(300–400×g,5分钟,4 °C)。
- 二抗(若使用未偶联一抗):如使用未偶联形式,加入与所选荧光素偶联的适当抗小鼠二抗,冰上孵育20分钟,再洗涤两次。
- 活力染色:加入活力染料以排除死细胞。
- 固定(可选):若生物安全要求或后续分析需要,可用PBS配制的1–4%多聚甲醛进行固定。
- 上机检测与分析:在校准的流式细胞仪上采集数据。设置同型对照和/或荧光减一(FMO)对照以准确设门。
注意:由于Ab350904以纯PBS配制(不含叠氮化物),可直接用于基于细胞的功能实验,无需担心叠氮化物相关的细胞毒性。
常见问题排查
当实验结果异常时,请将下表作为首要诊断参考。
| 观察到的问题 | 可能原因 | 建议措施 |
|---|---|---|
| 无信号或信号极弱 | 抗体浓度不足;目标抗原在所测细胞类型上不表达;细胞未成熟/活化 | 向上滴定抗体浓度;用阳性对照细胞系或LPS成熟DC确认CD83表达;核实成熟刺激条件 |
| 背景高/非特异性染色 | Fc封闭不充分;抗体浓度过高;二抗交叉反应 | 优化Fc封闭;降低一抗浓度;使用种属特异性封闭血清;设置FMO对照 |
| 信号随时间下降 | 反复冻融导致蛋白降解;纯PBS配方不含防腐剂 | 制备单次用量分装;于−80 °C储存;收货时确认冷链完整性 |
| 批次间结果不一致 | 批次变异性;不同批次抗体浓度差异 | 对每批新货进行滴定;开展批次间桥接实验;保留阳性对照样本 |
质量控制与订购信息
质量保证:每批CD83 Mouse mAb(Ab350904)在放行前均经过质量控制检测。建议研究人员索取对应批次的分析证书(CoA),查阅质控数据,包括纯度评估和功能测试结果。
订购信息:
- 货号:Ab350904
- 产品名称:CD83 Mouse mAb
- 克隆:absea #KC-626
- 制剂:仅PBS
订购方式:可通过Aladdin Scientific官网、发送邮件至所在地区销售代表,或经由所在机构的采购门户下单。如需大批量采购、定制偶联服务或OEM合作,请联系Aladdin Scientific技术销售团队。
退货与质量投诉:如发现产品质量问题,请携带批次编号、订单编号及问题简述联系Aladdin Scientific客户支持团队。退货资格请参阅Aladdin退货与退款政策。
常见问题
CD83 Mouse mAb染色的阳性对照应选用哪些细胞类型?
成熟单核细胞来源树突状细胞(通过GM-CSF、IL-4及LPS或TNF-α等成熟刺激处理单核细胞获得)是最常用的阳性对照,因为这类细胞在成熟后会显著上调CD83表达。活化B细胞和某些T细胞群体也表达CD83,可根据实验背景作为辅助对照。
纯PBS配方为何重要?与含叠氮化物的抗体相比,应如何差异化处理?
纯PBS配方(不含BSA,不含叠氮化钠)意味着本抗体可直接用于活细胞功能实验和后续偶联,无需担心叠氮化物的细胞毒性或对酶标记的干扰。但由于不含防腐剂,操作时必须严格遵守无菌规范,强烈建议制备单次用量分装,并于−20 °C或−80 °C长期保存以维持活性。
Ab350904除流式细胞术外,是否可用于免疫组化或ELISA等其他应用?
现有产品信息主要说明本抗体适用于基于免疫检测的应用;然而,其是否适用于免疫组化(冰冻或石蜡切片)或ELISA等特定平台,取决于表位在相应固定和变性条件下是否能够保留。用户在每种新应用场景中均应进行验证实验,并设置适当的阳性和阴性对照。如需了解该克隆的已验证应用数据,请联系Aladdin Scientific技术支持团队。
如何确定CD83 Mouse mAb在我的实验中的最佳工作浓度?
最佳抗体浓度应始终通过滴定实验凭经验确定。建议制备系列稀释(如0.1、0.5、1、2和5 µg/mL),在特定细胞群上通过流式细胞术评估信噪比,选择特异性信号最高、背景最低的浓度。在更换细胞类型、检测仪器或抗体批次时,滴定尤为重要。
参考文献
- Aladdin Scientific product datasheet: CD83 Mouse mAb, SKU Ab350904, clone absea #KC-626, PBS formulation.
- Zhou LJ, Tedder TF. Human blood dendritic cells selectively express CD83, a member of the immunoglobulin superfamily. Journal of Immunology. 1995;154(8):3821-3835. PMID:7706722
- Lechmann M, Zinser E, Golka A, Steinkasserer A. Role of CD83 in the immunomodulation of dendritic cells. International Archives of Allergy and Immunology. 2002;129(2):113-118. PMID:12403943
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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