骨髓内的铁蛋白及含铁血黄素（细胞外铁）和幼稚红细胞的铁粒（细胞内铁）在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用生成亚铁氰化铁，即普鲁士蓝反应．本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

操作方法

细胞铁染色实验

原理

骨髓内的铁蛋白及含铁血黄素（细胞外铁）和幼稚红细胞的铁粒（细胞内铁）在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用生成亚铁氰化铁，即普鲁士蓝反应．

材料与仪器

盐酸溶液 亚铁氰化钾溶液 碱性复红贮存液 复染应用液 甲醛

步骤

一、 实验试剂：

1. 4％盐酸溶液，小心取浓盐酸（38％）40ml慢慢滴加至冷蒸馏水340ml中，边加边搅拌，此液在室温下保存数月．2. 40g/L亚铁氰化钾溶液，（在室温可保存数月）3. 碱性复红（Basic Fucbsin）贮存液：溶解碱性复红1g于无水乙酸10ml及5％的碳酸溶液90ml以上混匀．4. 复染应用液：加上述碱性复红贮存液3ml于蒸馏水100ml中，在室温保存数天．5. 37％甲醛．

二、 实验操作：

l. 将血片和骨髓片在空气中干燥，将涂片置甲醛蒸气中固定2-3min。

2. 将等量40g/L亚铁氰化钾和4％盐酸溶液混合，新鲜配制加热至约56℃将待检已固定的血涂片或骨髓片放入其中30分钟后取出用流水冲洗。

3. 置复染应用液中复染5min，依次用蒸馏水冲洗，无水乙醇冲洗，蒸馏水冲洗，最后在空气中干燥后用显微镜检查．四. 实验结果判断：铁可染色成蓝色颗粒，小珠及小块。

细胞外铁：先低倍镜观察未完全展开的骨髓小粒，再用油镜观察。

“－” 无蓝色铁粒可见

“＋” 有少量铁粒或仅占少铁小珠

“2＋” 有多铁粒和铁珠和少数小块

“3＋”       有许多铁粒或有铁珠和少数小块．

“4＋” 有极多铁粒、铁珠．并有许多小块

细胞内铁：计数100个有核红细胞，记录阳性细胞（胞浆中有蓝色颗粒者）的百分率同时注意细胞内铁颗粒数目，大小、染色深浅等，有无环形铁粒的红细胞．参考值：正常人骨髓涂片中细胞外铁呈少量至较多的铁粒，铁珠、多数人呈“＋”，少数人为“2＋”

幼红细胞有铁粒的阳性率为12％一14％．多数以中、晚幼细胞为主，大多数阳性的幼红细胞内含1-2个细小而无规律的铁粒，仅少数含3-5个铁粒，一般不见含5个以上铁粒的幼红细胞及环形铁粒幼红细胞．

注意事项

l. 所用器材必须清洁，事先经除铁处理，尤其是载玻片．2. 亚铁氰化钾－盐酸反应应用液必须临时配制．3. 作细胞外铁检查时，需用含有骨髓小粒的涂片．4. 细胞内铁计数应以中. 晚幼红细胞为谁．

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