抗体偶联药物（antibody–drug conjugate，ADC）通过将单克隆抗体的高特异性与小分子细胞毒药物的高活性有机结合，实现对肿瘤细胞的定向杀伤，从而在提升疗效的同时尽量降低全身毒副作用。相较于传统抗体或其片段，ADC可在肿瘤微环境中释放高活性毒素，理论上具有更优的治疗获益。

一、背景与机理概述

       在以巯基为位点的偶联策略中，关键步骤是对二硫键进行可控还原。作为维持抗体高级结构的重要“支架”，二硫键既存在于不同多肽链之间，也广泛分布于单条多肽链内部。以人源IgG1为例，通常含有约16对二硫键（其中4对链间、12对链内）。采用巯基偶联时，应尽量选择性地打开目标位点，而不破坏维持构象稳定性的关键二硫键。

二、常见还原剂

       实际工艺中常用的还原剂包括TCEP、β-巯基乙醇（β-ME）和二硫苏糖醇（DTT）。三者在化学结构、作用机制、还原强度与动力学、稳定性以及与后续偶联反应的兼容性等方面各不相同，需结合具体的抗体构型与偶联工艺窗口进行选型。

图一 DTT化学结构式

​

图二 β-ME化学结构式

​

图三 TCEP化学结构式

三、还原剂的化学与机理概览

四、还原剂的性能比较

五、安全与操作稳定性

六、常见问题与排查

• DAR偏高/多聚体上升：还原时间/温度过高→降低TCEP当量或缩短时间；加入EDTA抑制金属催化的巯基交换
• 偶联效率低：pH偏低或还原不充分→提升至pH6.8–7.0并微增TCEP；确认彻底去除DTT/β-ME残留
• 重氧化导致DAR回落：脱盐与偶联间隔过长→在惰性气氛/含少量抗氧化剂条件下快速转入偶联
• 强烈气味：使用了β-ME→替换为TCEP或DTT；加强通风与密闭操作

       综合稳定性、可控性与与下游偶联兼容性，TCEP在ADC工艺中正成为首选浅还原剂；DTT适合需要快速、强力还原且能做到立即彻底脱盐的场景；β-ME更多用于实验室探索或成本敏感但对气味/安全要求不高的前期尝试。未来更高选择性与位点特异的温和还原体系（或酶/化学辅助重构策略）有望进一步提升ADC的质量一致性与放大可行性。