DNPEP 小鼠单克隆抗体:筛选、应用及使用指南
DNPEP 小鼠单克隆抗体:筛选、应用及使用指南
DNPEP Mouse mAb是一种针对天冬氨酰氨基肽酶(DNPEP)的高纯度小鼠单克隆抗体,浓度为0.95 mg/ml,以PBS为配方,旨在支持多种标准免疫学检测方法中对DNPEP的准确、可重复检测。
- 产品货号
- Ab377735
- 抗体类型
- 小鼠单克隆抗体(mAb)
- 浓度
- 0.95 mg/ml
- 配方
- 仅含PBS
- 靶蛋白
- DNPEP(天冬氨酰氨基肽酶)
- 宿主物种
- 小鼠
产品概述与靶标生物学
DNPEP(天冬氨酰氨基肽酶,又称Asp-AP)是一种锌依赖性金属蛋白酶,属于M18家族氨基肽酶。它催化从肽底物N末端去除天冬氨酸或谷氨酸残基,与神经肽代谢、肾素-血管紧张素系统及细胞内蛋白质降解途径密切相关。
Aladdin Scientific的DNPEP小鼠单克隆抗体(Ab377735)采用成熟的杂交瘤技术生产,具有严格的特异性和批次间一致性,可满足高要求研究应用的需求。该抗体以0.95 mg/ml浓度配制于磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)中,不含稳定剂、防腐剂或载体蛋白,与多种下游偶联和检测程序兼容。
研究氨基肽酶生物学、蛋白酶底物谱或肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的研究人员,可利用本抗体表征内源性DNPEP表达水平、亚细胞定位及蛋白质相互作用。
推荐应用与工作稀释度
针对DNPEP等胞内酶的小鼠单克隆抗体通常适用于以下免疫学技术。用户应进行实验性滴度优化,以确定在特定细胞系、组织类型和检测系统中的最佳工作浓度。
- 蛋白质印迹(WB):此类单克隆抗体通常推荐起始稀释范围为1:500–1:2000。通过滴定确定信噪比最高的浓度。
- 免疫组织化学(IHC):典型起始稀释度为1:50–1:200。根据组织固定方法,可能需要进行抗原修复(在柠檬酸缓冲液pH 6.0或EDTA缓冲液pH 9.0中进行热诱导表位修复)。
- 免疫荧光(IF)/免疫细胞化学(ICC):合理的起始稀释范围为1:100–1:500。针对特定细胞系优化封闭条件以降低背景信号。
- 免疫沉淀(IP):每次反应起始用量为1–5 µg抗体;结合裂解液投入量进行优化。
注意:Ab377735特异性验证的应用数据请咨询Aladdin Scientific技术支持,因应用领域不同,实验验证状态可能有所差异。
储存、操作与稳定性指南
妥善储存和操作DNPEP小鼠单克隆抗体(Ab377735)对于长期维持抗体完整性、结合亲和力及实验重复性至关重要。请遵循以下指南:
- 短期储存(≤1个月):在4°C条件下储存。避免反复冻融,以防抗体聚集和活性丧失。
- 长期储存:按适合实验工作流程的单次用量进行分装,并在−20°C或−80°C下储存,以最大限度减少反复冻融引起的降解。
- 配方注意事项:由于本产品仅以PBS配制(不含甘油、BSA或叠氮钠),如需长期储存稳定性,可考虑加入甘油至终浓度20–50%(v/v)作为冷冻保护剂。若计划进行下游偶联或酶活性检测,在修改配方前请咨询Aladdin Scientific技术支持。
- 避免:长时间暴露于室温、反复冻融以及非无菌移液器或试管造成的污染。
- 收货浓度:0.95 mg/ml——分装前无需稀释。
解冻后,请始终先短暂离心小瓶(1,000 × g,30秒),收集冷凝液后再开盖。
常见实验问题排查
以下排查指南针对使用小鼠单克隆抗体检测DNPEP等胞内蛋白时最常遇到的问题。
| 问题 | 可能原因 | 建议措施 |
|---|---|---|
| 未检测到信号 | 抗体浓度过低;目标蛋白表达不足;裂解液中蛋白质降解 | 提高抗体浓度;验证所选细胞/组织模型中靶蛋白的表达;裂解时加入蛋白酶抑制剂 |
| 背景过高/非特异性条带 | 一抗浓度过高;封闭不充分;与二抗发生交叉反应 | 将抗体滴定至较低浓度;延长封闭时间或提高封闭严格性;设置无一抗对照 |
| 实验间信号弱或不一致 | 冻融导致降解;上样量不一致 | 使用新鲜解冻的单次用量分装液;以管家蛋白对蛋白上样量进行归一化 |
| 储存后活性丧失 | 反复冻融;储存温度不当 | 分装为单次用量;在−20°C或−80°C下储存,必要时添加冷冻保护剂 |
如遇上述指南未涵盖的问题,请携带批次号及实验详情联系Aladdin Scientific技术支持。
订购信息与质量保证
DNPEP小鼠单克隆抗体可通过Aladdin Scientific独家购买,货号为Ab377735,供应浓度为0.95 mg/ml,以PBS配制。
Ab377735每批产品在发货前均经过内部质量控制检测,以确保浓度准确性和抗体完整性。建议研究人员在收货时记录批次号,以便处理技术咨询或复购一致性核查。
订购方式:
- 联系所在地区的Aladdin Scientific销售代表,了解批量定价及机构账户开设事宜。
- 采购订单(格式参考P260020464)可通过Aladdin Scientific在线订购平台提交,或通过电子邮件发送至所在地区办公室。
- 大批量订购及定制配方(如含BSA、甘油或叠氮化物)可按需提供——请联系技术支持进行可行性讨论。
如有关于运输条件、退货政策或付款方式的疑问,请参阅Aladdin Scientific帮助中心相关章节或直接联系客服。
常见问题
DNPEP小鼠单克隆抗体(Ab377735)的推荐储存条件是什么?
如需在一个月内短期使用,请将Ab377735储存于4°C。如需长期储存,请将抗体分装为单次用量,储存于−20°C或−80°C,以避免反复冻融导致活性丧失。由于该配方仅含PBS且不含甘油,如需长期储存,建议加入甘油(20–50% v/v)作为冷冻保护剂。
DNPEP小鼠单克隆抗体经验证适用于哪些应用?
DNPEP小鼠单克隆抗体(Ab377735)适用于标准免疫学技术,包括蛋白质印迹、免疫组织化学、免疫荧光和免疫沉淀。用户应针对自身特定系统进行实验性滴度优化,具体应用的验证数据请向Aladdin Scientific技术支持确认。
DNPEP小鼠单克隆抗体是否可用于下游偶联或酶活性检测?
由于Ab377735仅以PBS配制,不含BSA、甘油或叠氮钠,通常与偶联化学方法及酶联检测格式兼容。但计划进行偶联或基于活性检测的用户,在修改配方或继续操作前,应咨询Aladdin Scientific技术支持,以确认与特定化学方法的兼容性。
DNPEP小鼠单克隆抗体的供应浓度是多少?分装前是否需要稀释?
Ab377735以0.95 mg/ml浓度配制于PBS中供应,分装前无需稀释。解冻后,请先以1,000 × g离心小瓶30秒,收集冷凝液后再开盖,然后按实验需求分装为适量单份。
使用DNPEP小鼠单克隆抗体进行蛋白质印迹时,如何排查高背景问题?
蛋白质印迹中背景过高通常由一抗浓度过高、封闭不充分或交叉反应引起。建议将Ab377735滴定至较低工作浓度,延长封闭时间或使用更高浓度的封闭试剂,并始终设置无一抗阴性对照以区分真实信号与背景。提高洗涤严格性(增加洗涤次数或洗涤液中去污剂浓度)也有助于降低非特异性信号。
参考文献
- Rawlings ND, Barrett AJ, Thomas PD, Huang X, Bateman A, Finn RD. The MEROPS database of proteolytic enzymes, their substrates and inhibitors in 2017 and a comparison with peptidases in the PANTHER database. Nucleic Acids Res. 2018;46(D1):D624–D632. doi:10.1093/nar/gkx1134
- Wilk S, Wilk E, Magnusson RP. Purification, characterization, and cloning of a cytosolic aspartyl aminopeptidase. J Biol Chem. 1998;273(26):15961–15970. doi:10.1074/jbc.273.26.15961
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