协议

1.用蒸馏水将10x浓缩液稀释至1x，生成渗透缓冲液的新鲜工作溶液。每个样品需要约8.5 mL的工作溶液。

2.用3份稀释剂稀释一份浓缩液，生成转录因子固定通透性缓冲液的新鲜工作液。每个样品需要1毫升工作溶液。

3.安排感兴趣的细胞样本进行流式细胞术分析。

4.利用结合抗体对感兴趣的细胞表面标记物进行染色。

5.清洗颗粒并丢弃上清液。

6.通过使样品经受脉冲涡流来分离颗粒。

7.向每个样品中加入1毫升转录因子固定/渗透工作液和脉冲涡流。

8.在4°C或室温下，在黑暗中培养样品至少30分钟。

9.向每个样品中加入2mL 1x渗透工作液。

10.在室温下以300-400xg离心样品5分钟。

11.丢弃上清液，并选择性地重复步骤10-12。

12.将颗粒重新悬浮在约100μL的1x渗透缓冲液的残余体积中。

13.将具有细胞内抗原特异性的结合抗体添加到样品中。

14.在室温下，在黑暗中培养样品30分钟。

15.向每个样品中加入2mL 1x渗透工作液。

16.在室温下以300-400xg离心样品5分钟。

17.丢弃上清液，重复步骤16-18。

18.将样品重新悬浮在适当的缓冲液中，以用于流式细胞术分析。