细胞转染方法之一

原理

应用

细胞转染

操作方法

脂质体转染

材料与仪器

细胞、细胞培养液、转染试剂、培养皿
EP 管、6 孔培养板、培养箱

步骤

（1）细胞培养：取 6 孔培养板（或用 35 mm 培养皿），向每孔中加入 2 mL 含 1~2×10⁵ 个细胞培养液，37 ℃ CO₂ 培养至 40%~60% 汇合时（汇合过度，转染后不利筛选细胞）。

（2）转染液制备：在 EP 管中制备以下两液（为转染每一个孔细胞所用的量）。

A 液：用不含血清培养基稀释 1~10 μg DNA，总量 100 μL；

B 液：用不含血清培养基稀释 3 倍体积的转染试剂，总量 100 μL，轻轻混合 A、B 液，室温中置 10~15 分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染（如出现沉淀可能因转染试剂或 DNA 浓度过高所致，应酌情减量）。

（3）转染准备：用 2 mL 不含血清培养液漂洗两次，再加入 1 mL 不含血清培养液。

（4）转染：把 A/B 复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37 ℃ 温箱置 6~24 小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。

（5）其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。

注意事项

转染时切勿加血清，血清对转染效率有很大影响。

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