小鼠GDF15 ELISA试剂盒：检测与定量指南
小鼠GDF15 ELISA试剂盒：检测与定量指南
Mouse Growth Differentiation Factor 15 (GDF15) ELISA Kit是一种固相夹心免疫分析试剂盒，专为灵敏、特异性定量检测血清、血浆及其他生物基质中内源性小鼠GDF15蛋白而设计。
- 产品货号
- EJ1512880
- 检测靶标
- 小鼠生长分化因子15（GDF15）
- 检测格式
- 夹心ELISA
- 物种反应性
- 小鼠（Mus musculus）
- 推荐样品类型
- 血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆
- 检测方法
- 比色法（HRP/TMB）
背景：GDF15的生物学功能与研究意义
生长分化因子15（GDF15）是转化生长因子-β（TGF-β）超家族的一个分化成员。在大多数组织中其基础表达水平较低，但在细胞应激、炎症、组织损伤和代谢紊乱时显著上调。GDF15主要通过GDNF家族受体α样（GFRAL）受体发挥信号传导作用，该受体主要在后脑表达，从而将循环中的GDF15水平与食欲抑制和体重调节相关联。
在小鼠模型中，GDF15已被广泛研究于癌症恶病质、肥胖、心血管疾病、线粒体功能障碍和衰老等领域。小鼠血浆GDF15升高与代谢应激和炎症状态相关，使其成为重要的生物标志物和机制研究靶标。因此，准确定量小鼠GDF15对于研究代谢性疾病、肿瘤学、心脏保护和炎症的科研人员至关重要。
检测原理与试剂盒组成
小鼠GDF15 ELISA试剂盒（EJ1512880）采用定量夹心酶联免疫吸附分析（ELISA）格式。在此格式中，特异性针对小鼠GDF15的捕获抗体预先包被于96孔微板上。将标准品、对照品和待测样品加入孔中，使样品中存在的GDF15与固定化捕获抗体结合。洗去未结合物质后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，使其与已捕获的GDF15结合。经第二次洗涤后，加入底物溶液（3,3′,5,5′-四甲基联苯胺；TMB），产生与GDF15含量成正比的比色信号。终止反应后，在450 nm处测定吸光度，并以参考波长进行校正。
试剂盒的典型组成包括：预包被96孔微板、冻干或液态重组小鼠GDF15标准品、HRP标记检测抗体、分析稀释液、洗涤缓冲液浓缩液、TMB底物溶液、终止液及封板膜。具体组分列表和储存条件请参阅产品随附说明书。
样品制备与操作流程概述
样品类型与采集：本试剂盒经验证适用于小鼠血清、EDTA或肝素处理的血浆、细胞培养上清液及组织匀浆。采集血清时，室温静置30分钟待血液凝固，然后在4°C、1,000–2,000 × g条件下离心15分钟。采集血浆时，将血液收集于含抗凝剂的采血管中并及时离心。脂血或严重溶血样品可能干扰检测，应予以去除。组织匀浆应在含蛋白酶抑制剂的PBS中制备，使用前离心去除细胞碎片。避免反复冻融；冷冻前应将样品分装保存。
操作流程简述：
- 使用前将所有试剂和样品恢复至室温（18–25°C）。
- 将提供的重组GDF15标准品进行梯度稀释，制备标准曲线。
- 将标准品、样品和对照品（每孔100 µL）加入预包被板中，在37°C下按规定时间（通常90–120分钟）轻柔振荡孵育。
- 吸弃液体，用稀释洗涤缓冲液洗板（通常3–5次）。
- 加入HRP标记检测抗体（每孔100 µL），按说明书孵育。
- 重复步骤4洗板。
- 加入TMB底物（每孔100 µL），避光孵育至显色。
- 加入终止液（每孔50–100 µL），30分钟内在450 nm处读取吸光度。
- 根据标准曲线（适当采用四参数逻辑回归或线性回归）插值计算GDF15浓度。
确切的加样量、孵育时间和温度请参阅试剂盒随附说明书，以上为一般性流程描述，实际操作可能有所不同。
常见ELISA问题排查
即使使用经过优化的试剂盒，ELISA结果偶尔也可能超出预期范围。以下指导针对最常见问题进行说明：
- 高背景/空白孔OD值偏高：确保洗板步骤充分彻底；洗涤不充分是最常见原因。检查各步骤之间微板是否出现干燥。确认底物溶液未被污染。
- 所有孔信号偏低：验证检测抗体和HRP底物是否过期或储存不当。确认孵育步骤中微板已密封，防止蒸发。检查标准品是否正确配制。
- 标准曲线与样品稀释曲线不平行：这可能提示存在基质干扰。将样品在分析稀释液中进一步稀释，或在定量前验证样品稀释线性度。
- 样品值超出标准曲线范围：低于定量下限的样品应进一步稀释或报告为低于检测限；高于上限的样品应稀释至线性范围内重新检测。
- 孔间变异较大（CV >15%）：确保移液操作一致，所有试剂已平衡至室温。使用经校准的多道移液器，并尽量减少各排加样的时间间隔。
常见问题
小鼠GDF15 ELISA试剂盒（EJ1512880）适用于哪些样品类型？
本试剂盒适用于小鼠血清、EDTA或肝素抗凝血浆、细胞培养上清液及组织匀浆。样品应无明显颗粒物、过度溶血或脂血现象。建议通过平行性或加标回收实验确认您特定基质的兼容性。
重组GDF15标准品应如何储存和配制？
冻干标准品应按说明书规定储存，通常置于−20°C或−80°C，使用前立即用说明书指定体积的分析稀释液复溶。复溶后，每次实验前新鲜配制梯度稀释液，避免将复溶后的标准品反复冻融。具体储存和复溶说明请参阅产品随附说明书。
如何根据原始吸光度数据计算GDF15浓度？
以各标准品的平均吸光度（OD 450 nm）为纵轴，已知GDF15浓度为横轴，绘制标准曲线。推荐使用四参数逻辑（4-PL）曲线拟合，以在整个动态范围内获得最佳准确性。从标准曲线内插未知样品浓度，若样品在检测前经过稀释，需将结果乘以稀释倍数。
小鼠GDF15夹心ELISA的预期灵敏度是多少？
针对小鼠GDF15的夹心ELISA灵敏度因试剂盒批次和厂家而异。小鼠GDF15 ELISA的典型最低检测浓度处于pg/mL的较低范围内。关于EJ1512880的具体灵敏度、检测范围和变异系数数据，请参阅随试剂盒附送的质量检验报告和说明书。
本试剂盒是否可用于小鼠以外的其他物种？
不可以。小鼠GDF15 ELISA试剂盒（EJ1512880）仅经过小鼠（Mus musculus）样品验证。捕获抗体和检测抗体均针对小鼠GDF15特异性筛选，可能不与其他物种（包括大鼠或人类）的GDF15发生交叉反应。非小鼠样品应使用相应物种特异性试剂盒。
参考文献
- Bootcov MR, et al. MIC-1, a novel macrophage inhibitory cytokine, is a divergent member of the TGF-β superfamily. Proc Natl Acad Sci USA. 1997;94(21):11514-11519. PMID:9326640
- Emmerson PJ, et al. The metabolic effects of GDF15 are mediated by the orphan receptor GFRAL. Nat Med. 2017;23(10):1215-1219. PMID:28846097
- Patel S, et al. GDF15 provides an endocrine signal of nutritional stress in mice and humans. Cell Metab. 2019;29(3):707-718. PMID:30581120
- Aladdin Scientific. Mouse Growth Differentiation Factor 15 (GDF15) ELISA Kit, SKU EJ1512880, Product Description and Package Insert. Shanghai: Aladdin Scientific.
产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。
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