实验方案（Protocols）

聚乙二醇（PEG）操作与应用实验方案

· · 发布于 2026年10月26日 · 更新于 2026年10月26日 ·

Polyethylene glycol（PEG） is a versatile, water-soluble polymer widely used in biomedical and biochemical research for applications ranging from cell fusion and protein precipitation to cryopreservation and surface modification.

化学名称: 聚乙二醇（PEG）
CAS / 目录参考: 货号 P615504（阿拉丁科学）
物理状态: 根据分子量不同，呈粘稠液体或蜡状固体
溶解性: 可溶于水及多种有机溶剂
主要应用: 细胞融合、蛋白质沉淀、冷冻保存、药物递送、表面PEG化
储存条件: 室温储存，避免潮湿和光照

材料与设备

在开始操作前，请确保以下材料准备齐全：

阿拉丁科学聚乙二醇（PEG），货号 P615504 — 根据实验需求选择合适的分子量规格
无菌超纯水或磷酸盐缓冲液（PBS），pH 7.4
适合目标体积的容量玻璃器皿（烧杯、容量瓶）
磁力搅拌器及磁力搅拌子
可维持37–56 °C的水浴锅或加热模块
高压灭菌锅或0.22 µm注射器过滤器（用于灭菌）
分析天平（精度±0.1 mg）
pH计或pH指示条
适当的个人防护装备（PPE）：丁腈手套、实验服、护目镜

溶液配制步骤

按照以下步骤配制所需浓度的PEG储备液：

称量PEG：用分析天平准确称量所需质量的PEG（货号P615504）。配制50%（w/v）储备液时，每100 mL终体积称取50 g。
预热溶剂：在水浴锅中将无菌超纯水或PBS加热至50–56 °C。较高分子量的PEG（≥4000）需要加热才能完全溶解。
溶解PEG：在持续磁力搅拌下，将PEG缓慢加入预热溶剂中，待完全溶解后再进行下一步。
调整体积：待溶液冷却至室温后，转移至容量瓶中，用溶剂补足至目标终体积。
灭菌：细胞实验应用时，通过高压灭菌（121 °C，15 min，液体循环）或0.22 µm膜过滤灭菌。注意：高分子量PEG可能无法有效通过0.22 µm过滤器，建议优先使用高压灭菌。
质量检查：溶液应呈澄清至轻微乳光状，无颗粒杂质。在容器上记录批号、浓度和配制日期。
储存：配制好的溶液在室温（低分子量PEG）或4 °C（高分子量PEG）下储存以防止结晶。在3个月内使用，或按实验室验证的有效期执行。

关键应用方案

A. 细胞融合（杂交瘤制备）

PEG是杂交瘤制备的经典融合剂。使用平均分子量1000–4000 Da的PEG，在无血清培养基中配制为50%（w/v）溶液。

将骨髓瘤细胞与免疫脾细胞（比例1:5–1:10）以400 × g离心5 min成沉淀，彻底去除上清。
在轻轻旋转离心管的同时，在恰好1 min内逐滴加入1 mL预热（37 °C）的50% PEG溶液。
缓慢稀释：在1 min内加入1 mL无血清培养基，再在2 min内加入3 mL，最后在5 min内加入16 mL。
以400 × g离心5 min，将沉淀重悬于HAT选择培养基中，铺板至96孔板。

B. 蛋白质沉淀（PEG分级沉淀）

PEG沉淀法用于从血清或培养上清中富集免疫球蛋白和其他蛋白质。

以10,000 × g、4 °C离心10 min澄清样品。
在冰上缓慢加入固体PEG（通常分子量6000–8000）或浓缩PEG储备液，使其达到所需终浓度（如IgG沉淀需12–18% w/v）。
在4 °C下轻柔搅拌30–60 min，使蛋白质充分沉淀。
以10,000 × g、4 °C离心20 min收集沉淀，弃去上清。
将沉淀重悬于PBS中，对PBS进行充分透析以去除PEG。

C. 冷冻保存

低分子量PEG（分子量200–400）可作为某些细胞类型和生物样本的冷冻保护剂。

在含血清的细胞培养基中，按实验优化浓度配制含PEG的冷冻保护液。
在4 °C下将冷冻保护液逐步加入细胞悬液中，以减少渗透压冲击。
转移至冻存管，使用程序降温仪或异丙醇套管容器以−1 °C/min的速率降温至−80 °C，随后转入液氮长期储存。

故障排查

问题	可能原因	建议措施
PEG无法完全溶解	溶液温度过低；搅拌时间不足	将溶剂温度提高至50–56 °C，再搅拌15–20 min
杂交瘤融合效率低	PEG浓度或分子量不正确；融合前细胞活力差	确认PEG浓度为50% w/v；使用新鲜对数期骨髓瘤细胞；确认PEG分子量为1000–4000 Da
蛋白质沉淀收率低	PEG浓度过低；未维持4 °C低温	逐步提高PEG浓度；确保所有步骤在冰上或4 °C下进行
纯化蛋白中残留PEG污染	透析不充分	将透析延长至24–48 h内更换≥3次缓冲液；必要时通过PEG特异性检测验证
储存过程中溶液变浑浊或出现沉淀	吸湿；微生物污染	确保容器密封良好；重新灭菌或弃去后重新配制新鲜溶液

安全、操作与废弃物处理

安全：在标准实验室条件下，PEG通常被认为毒性较低。但在操作散装原料或浓缩溶液时，应始终佩戴标准实验室个人防护装备（丁腈手套、实验服、护目镜）。操作固体高分子量PEG时，避免吸入PEG粉尘。

操作：PEG具有吸湿性，不使用时应将容器密封保存。避免与强氧化剂接触。高分子量固体PEG洒落后表面可能湿滑，应及时清理。

废弃物处理：应按照所在机构的化学废弃物处理政策及当地适用法规处置PEG溶液和废弃物。稀释的水性PEG溶液在某些地区可能允许通过下水道排放，但在处置前务必向机构环境健康与安全（EHS）部门确认。

注意：使用前请务必查阅阿拉丁科学P615504的安全数据表（SDS），以获取最新的危害和操作信息。

常见问题

细胞融合实验应使用何种分子量的PEG？

用于杂交瘤制备和细胞融合时，最常用的PEG平均分子量为1000–4000 Da，在无血清培养基中配制为50%（w/v）浓度。PEG 1500和PEG 4000是文献中记载的经典选择。最佳分子量可能因细胞类型而异，建议通过实验验证。

如何从纯化蛋白质样品中去除PEG？

从蛋白质样品中去除PEG最有效的方法是用合适缓冲液（如PBS）进行充分透析，在24–48小时内更换至少三次缓冲液，使用分子量截留值适当的透析袋。也可使用凝胶过滤色谱（SEC）作为附加或替代的纯化步骤，将PEG与目的蛋白分离。

PEG溶液可以高压灭菌吗？

是的，水性PEG溶液通常可以通过标准液体循环高压灭菌（121 °C，15 min）。对于无法通过0.22 µm过滤器的高分子量PEG，这是首选灭菌方法。但应避免反复高压灭菌，因为可能导致降解或变色；建议尽量配制适合单次实验使用的无菌分装量。

阿拉丁PEG（P615504）的推荐储存条件是什么？

PEG应在室温下密封储存，避免潮湿和直接光照。固体高分子量PEG应避免接触强氧化剂。请始终参阅产品标签和安全数据表（SDS），以获取所购分子量规格最准确的储存建议。

PEG在实验室中操作安全吗？

PEG通常被认为急性毒性较低，广泛用于制药和生物医学领域。操作时应佩戴标准个人防护装备，包括丁腈手套、实验服和护目镜。应避免吸入固体PEG的细粉尘。使用前请务必查阅安全数据表（SDS）以获取产品特定的危害信息。

参考文献

Köhler G, Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature. 1975;256(5517):495–497. doi:10.1038/256495a0
Ingham KC. Precipitation of proteins with polyethylene glycol. Methods in Enzymology. 1984;104:351–356.
Harris JM, Chess RB. Effect of pegylation on pharmaceuticals. Nature Reviews Drug Discovery. 2003;2(3):214–221. doi:10.1038/nrd1033
Aladdin Scientific. Product Information Sheet: Polyethylene glycol (PEG), SKU P615504. Aladdin Scientific.

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

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探索主题：实验室试剂聚乙二醇冷冻保存细胞融合 PEG实验方案蛋白质沉淀

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。