重组人ATP8B2蛋白:研究使用指南
重组人ATP8B2蛋白:研究使用指南
Recombinant Human ATP8B2 Protein是一种研究级重组蛋白,代表人ATP8B2基因产物,属于P4-ATP酶亚家族成员,参与细胞膜上磷脂的转位过程。
- 产品名称
- 重组人ATP8B2蛋白
- 货号
- rp366537
- 蛋白家族
- P4-ATP酶(IV型P型ATP酶)磷脂翻转酶
- 来源物种
- 人(智人)
- 应用
- 体外生化检测、脂质转运研究、抗体验证、结构研究
- 储存建议
- 储存于-80°C;避免反复冻融(重组蛋白通用建议)
- 质量控制
- 使用前应通过SDS-PAGE和Western印迹确认纯度和特异性
ATP8B2概述及其生物学功能
ATP8B2(ATP酶磷脂转运蛋白8B2)是P4-ATP酶亚家族的成员,该家族由一组跨膜蛋白组成,具有磷脂翻转酶功能。这些酶催化特定磷脂以ATP依赖方式从脂双层外叶转位至内叶,从而维持膜不对称性——这是真核细胞生物学的关键特征。
ATP8B2蛋白由ATP8B2基因编码,在多种人体组织中表达。与其他P4-ATP酶类似,其被认为与CDC50家族辅助亚基相互作用,后者对其正确折叠、转运及在质膜或细胞内区室的催化活性至关重要。
对ATP8B2的研究有助于深入理解脂质稳态、膜生物学以及与磷脂转运缺陷相关的疾病,包括与相关P4-ATP酶家族成员相关的肝脏和神经系统疾病。
试剂规格与质量控制
重组人ATP8B2蛋白(货号:rp366537)在受控表达条件下生产,以确保实验间的一致性和可靠性。研究人员应查阅随附产品说明书,获取批次特定信息,包括宿主表达系统、标签配置、分子量、纯度级别和内毒素水平。
使用前,建议采用以下质量控制措施验证试剂完整性:
- SDS-PAGE:确认预期分子量条带并评估纯度。单一主条带表明制备纯度较高。
- Western印迹:使用经验证的抗ATP8B2抗体确认蛋白特异性。
- 蛋白浓度:使用以BSA为标准的BCA法或Bradford法测定。
- 活性检测(如适用):可通过无机磷酸盐释放检测法评估ATP酶活性,具体取决于所提供蛋白的活性状态。
请注意,具体纯度百分比、精确分子量及表达系统详情因批次而异,应以阿拉丁科学提供的官方质量检验报告(CoA)为准。
储存、复溶及操作指南
正确操作重组人ATP8B2蛋白对保持生物活性、避免降解至关重要。以下为适用于此类重组蛋白的通用指南;权威操作说明请始终参阅产品专用说明书:
- 短期储存(≤1周):在所提供的缓冲液中4°C储存。不得反复冻融。
- 长期储存:分装为单次用量,于-80°C储存。记录分装日期。
- 复溶:若以冻干形式供应,使用推荐体积的无菌超纯水或说明书指定缓冲液复溶。开瓶前使小瓶恢复至室温。轻柔吹打混匀,切勿涡旋振荡。
- 载体蛋白:对于低浓度工作液,可考虑加入0.1% BSA(牛血清白蛋白)以在稀释过程中稳定蛋白。
- 避免:反复冻融、长时间室温暴露以及在非检测特别要求情况下使用去垢剂。
膜相关P4-ATP酶可能需要基于去垢剂的增溶条件。跨膜蛋白操作的具体指导请参阅说明书和相关文献。
实验应用与检测方案建议
重组人ATP8B2蛋白适用于多种体外研究应用。研究人员应在其特定实验背景下验证试剂性能。典型应用包括:
- 生化表征:研究P4-ATP酶家族成员的ATP水解动力学、底物特异性及抑制剂筛选。
- 磷脂翻转酶活性检测:可使用荧光标记磷脂类似物(如NBD标记的磷脂酰丝氨酸或磷脂酰胆碱)进行基于脂质体的检测,评估翻转酶活性。
- 蛋白-蛋白相互作用研究:使用共免疫沉淀、拉下实验或表面等离子共振研究ATP8B2与CDC50家族分子伴侣(如CDC50A/TMEM30A)之间的相互作用。
- 抗体验证:作为阳性对照抗原,用于Western印迹、ELISA或免疫沉淀,验证抗ATP8B2抗体。
- 结构研究:作为冷冻电镜或X射线晶体学研究的底物,解析P4-ATP酶的结构和构象状态。
最佳工作浓度和检测条件应通过实验确定。在开展大规模研究前,强烈建议进行预实验梯度滴定。
安全、合规及订购信息
重组人ATP8B2蛋白仅供研究使用(RUO),未经批准用于诊断、治疗或兽医用途。用户在操作来源于人类的重组蛋白时,有责任遵守所有适用的机构生物安全指南。
安全注意事项:
- 按照机构针对BSL-1级重组蛋白材料的生物安全规程进行操作。
- 穿戴适当的个人防护装备(PPE):实验服、手套和护目镜。
- 按照机构及地方法规处置蛋白溶液和污染材料。
- 详细的危害和处置信息请参阅阿拉丁科学提供的安全数据表(SDS)。
订购:重组人ATP8B2蛋白可通过阿拉丁科学以货号rp366537购买。如需批量定价、定制配方或技术支持,请联系阿拉丁科学客户服务团队。采购团队在完成机构采购文件时,建议参考CoA和SDS。
常见问题
ATP8B2的生物学功能是什么?
ATP8B2是一种P4-ATP酶磷脂翻转酶,通过ATP水解将特定磷脂从细胞膜外叶转位至内叶,维持脂双层的不对称性。该功能对膜完整性、细胞信号传导和囊泡运输至关重要。
重组人ATP8B2蛋白(rp366537)应如何储存以保持活性?
长期储存时,将蛋白分装为单次用量,于-80°C保存。若一周内短期使用,在所提供缓冲液中4°C储存即可。应严格避免反复冻融,因其可导致蛋白不可逆变性。权威储存条件请始终参阅产品专用说明书。
重组人ATP8B2蛋白是否可用于抗体验证?
是的。重组人ATP8B2蛋白非常适合作为阳性对照抗原,用于在Western印迹、ELISA和免疫沉淀应用中验证抗ATP8B2抗体。研究人员应确认所用抗体识别的表位在所使用的重组构建体中存在且可被识别。
ATP8B2是否需要辅助亚基才能发挥活性?
与其他P4-ATP酶类似,ATP8B2被认为需要与CDC50家族辅助亚基(如CDC50A/TMEM30A)相互作用,以实现正确折叠、膜转运和完整催化活性。设计功能检测的研究人员应考虑所提供的重组蛋白是否包含或需要与该亚基共表达;详情请参阅说明书。
rp366537随附哪些纯度和质量控制数据?
阿拉丁科学为每批rp366537提供质量检验报告(CoA),包括SDS-PAGE纯度评估、蛋白特异性确认和浓度数据。具体数值因批次而异,购买时请索取您所在批次的CoA。
参考文献
- Andersen JP, Vestergaard AL, Mikkelsen SA, Mogensen LS, Chalat M, Molday RS. P4-ATPases as Phospholipid Flippases—Structure, Function, and Enigmas. Front Physiol. 2016;7:275. doi:10.3389/fphys.2016.00275
- Coleman JA, Quazi F, Bhatt DL, Bhatt DL, Bhatt DL. Mammalian P4-ATPases and ABC transporters and their role in phosphatidylserine translocation across cellular membranes. Biochim Biophys Acta. 2013;1831(3):555-574. doi:10.1016/j.bbalip.2012.10.006
- Aladdin Scientific. Recombinant Human ATP8B2 Protein (rp366537) Product Datasheet. Aladdin Scientific; [current lot].
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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