重组人CACNA1B蛋白:研究指南
重组人CACNA1B蛋白:研究指南
Recombinant Human CACNA1B Protein是人N型电压门控钙通道α-1B亚基(Cav2.2)的研究级重组蛋白,可帮助科学家在体外研究钙信号传导、突触传递及痛觉通路。
- 基因名称
- CACNA1B
- 蛋白名称
- 电压依赖性N型钙通道α-1B亚基(Cav2.2)
- 货号
- rp370147
- 物种来源
- 人(智人)
- 蛋白家族
- 电压门控钙通道(VGCC)α-1亚基家族
- 主要研究领域
- 神经科学、痛觉生物学、突触生理学、心血管研究
CACNA1B与Cav2.2通道的生物学
CACNA1B基因编码N型(神经元型)电压门控钙通道的α-1B亚基,命名为Cav2.2。该亚基构成通道的离子传导孔,是决定通道生物物理和药理特性的主要组分。N型钙通道主要在神经系统中表达,尤其集中于神经元突触前末梢,在膜去极化与神经递质释放的偶联过程中发挥关键作用。
膜去极化时,Cav2.2通道开放,允许钙离子内流,从而触发囊泡融合和神经递质(包括谷氨酸、GABA和去甲肾上腺素)的胞吐。由于在突触传递中的核心地位,CACNA1B与Cav2.2通道被广泛认为与痛觉信号传导、癫痫及精神疾病密切相关。该通道可被多肽毒素ω-芋螺毒素GVIA选择性抑制,后者被广泛用作区分N型与其他高电压激活钙通道的研究工具。
CACNA1B转录本的选择性剪接可产生多种亚型,实现通道特性的区域特异性和发育阶段调控。这些亚型在电压依赖性、失活动力学以及与辅助亚基(α-2/δ和β亚基)的相互作用上可能存在差异,使通道的生理功能更加复杂多样。
重组蛋白的生产与规格
重组人CACNA1B蛋白(Aladdin Scientific货号:rp370147)采用重组蛋白表达技术生产,可获得人CACNA1B α-1B亚基或其功能片段的明确、可重复形式。重组生产方式克服了从组织中纯化天然全长钙通道蛋白的难题——后者嵌于细胞膜中且含量极低。
典型的CACNA1B片段或结构域重组制品在合适的宿主系统中表达,并在受控条件下纯化,以确保批次间质量的一致性。研究人员应查阅产品说明书,了解rp370147批次的确认表达宿主、标签信息、分子量、纯度等级、缓冲液组成及推荐储存条件,这些参数对实验重现性至关重要。
妥善操作至关重要:重组蛋白收到后应立即分装,避免反复冻融;按说明书规定温度储存(通常为-20°C或-80°C);并在建议期限内使用,以维持蛋白活性和完整性。
研究应用
重组人CACNA1B蛋白支持多种生化和细胞生物学研究应用,主要包括:
- 蛋白–蛋白相互作用研究:CACNA1B片段用于pull-down实验、共免疫沉淀及表面等离子共振(SPR)研究,以绘制与辅助钙通道亚基、骨架蛋白及G蛋白βγ亚基等调节分子的相互作用图谱。
- 抗体开发与验证:重组CACNA1B蛋白可作为抗原,用于生成和验证适用于免疫组化(IHC)、Western blot及免疫荧光的抗体。
- 药物发现与筛选:N型钙通道是经验证的镇痛药物开发靶点,重组CACNA1B蛋白及相关检测平台可用于鉴定小分子调节剂和多肽抑制剂。
- 结构生物学:CACNA1B可溶性结构域构建体便于开展晶体学和冷冻电镜研究,以阐明通道结构和门控机制。
- ELISA与结合实验:重组蛋白可用作包被抗原或标准品,用于定量检测CACNA1B特异性结合或抗体滴度。
从事神经科学、痛觉生物学和心血管生理学研究的科学家,尤其是研究兴奋-分泌偶联和钙依赖性信号转导的研究人员,将发现本试剂具有重要的应用价值。
储存、操作与质量注意事项
为保持重组人CACNA1B蛋白的功能完整性,必须严格遵守推荐的储存和操作规程:
- 温度:按说明书规定储存。大多数重组蛋白长期储存于-80°C,短期使用可保存于-20°C。避免在4°C长期储存。
- 冻融循环:收到蛋白后立即分装为单次用量,尽量减少反复冻融。每次冻融循环均可能破坏蛋白结构并降低活性。
- 缓冲液与载体蛋白:部分制剂含有载体蛋白(如BSA)或稳定性辅料。请验证其与下游实验的相容性,特别是对BSA或特定缓冲液组分敏感的实验。
- 无菌性:若蛋白用于细胞实验,请确认无菌状态,必要时进行过滤灭菌。
- 质量控制:Aladdin Scientific对重组蛋白产品实施质量控制检测。请参阅每批次随附的分析证书(CoA),了解纯度、鉴定及活性数据。
研究人员如遇意外结果,应将实验条件与说明书建议进行对照,并联系Aladdin Scientific技术支持寻求故障排除指导。
常见问题
CACNA1B是什么?为何它是重要的研究靶点?
CACNA1B编码Cav2.2 N型电压门控钙通道的α-1B亚基,该亚基在整个神经系统突触前末梢的神经递质释放中至关重要。由于其在痛觉信号传导、突触传递及癫痫等神经系统疾病中的核心作用,CACNA1B是镇痛药物开发和神经科学研究的重要靶点。
重组人CACNA1B蛋白适用于哪些研究应用?
重组人CACNA1B蛋白(rp370147)适用于蛋白–蛋白相互作用研究、抗体开发与验证、药物发现筛选、结构生物学研究以及ELISA等定量结合实验。该蛋白在神经科学、痛觉生物学和钙通道药理学研究中尤具应用价值。
重组人CACNA1B蛋白应如何储存以维持活性?
蛋白应按产品说明书规定的温度储存,长期保存通常为-80°C。收到后应立即分装为单次使用量,以避免反复冻融导致蛋白完整性下降和活性降低。请务必参阅分析证书获取批次特异性储存说明。
重组人CACNA1B蛋白适合用于细胞实验吗?
是否适合细胞实验取决于具体制剂,包括无菌状态和缓冲液组成。研究人员在用于细胞培养实验前,应确认制剂的无菌状态,必要时进行过滤灭菌。请参阅产品说明书并联系Aladdin Scientific技术支持,获取针对特定应用的指导建议。
重组人CACNA1B蛋白与从组织中分离的天然CACNA1B有何不同?
天然全长CACNA1B是一种大型膜嵌入蛋白,从组织来源中难以获得足够的数量和纯度。重组CACNA1B在受控表达系统中生产,通常以可溶性结构域或片段形式提供,具有明确的纯度、可重复的批次间一致性和可扩展的供应量,因此在大多数生化和生物物理研究应用中更具实用性。
参考文献
- Catterall WA. Voltage-gated calcium channels. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 2011. doi:10.1101/cshperspect.a003947
- Dolphin AC. Voltage-gated calcium channels and their auxiliary subunits: physiology and pathophysiology and pharmacology. Journal of Physiology. 2016. doi:10.1113/JP272262
- Olivera BM, Gray WR, Zeikus R, et al. Peptide neurotoxins from fish-hunting cone snails. Science. 1985.
- Aladdin Scientific. Recombinant Human CACNA1B Protein. Product Datasheet, SKU rp370147.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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