重组人CENPC蛋白:功能与研究应用
重组人CENPC蛋白:功能与研究应用
Recombinant Human CENPC Protein是内层动粒的关键组分,负责将着丝粒染色质锚定至有丝分裂纺锤体,是研究染色体分离保真性及动粒组装机制不可或缺的研究工具。
- 产品名称
- 重组人CENPC蛋白
- 货号
- rp364883
- 基因名称
- CENPC(又称CENPC1)
- 蛋白功能
- 内层动粒支架;维持着丝粒完整性与染色体分离
- 研究应用
- 动粒组装研究、有丝分裂研究、蛋白质相互作用检测
- 物种
- 人(智人)
CENPC的生物学背景
着丝粒蛋白C(CENPC)是内层动粒的固有组分,动粒是介导细胞分裂过程中染色体与纺锤体微管连接的特化染色体结构。CENPC属于CCAN(组成型着丝粒相关网络)的组成部分,该多蛋白复合体连接由组蛋白H3变体CENP-A标记的着丝粒染色质与负责捕获微管的外层动粒KMN网络。
CENPC含有保守的CENP-C基序和杯状二聚化结构域。其N端区域与外层动粒Mis12复合体相互作用,C端区域则直接结合着丝粒染色质上的CENP-A核小体,从而作为染色质身份与动粒功能之间的关键连接因子。CENPC功能缺失与染色体排列异常、有丝分裂错误及基因组不稳定性密切相关。
重组人CENPC蛋白的分子特征
重组人CENPC蛋白(rp364883)采用重组表达系统生产,具有高纯度和批次间一致性,满足严苛生化应用的需求。该重组蛋白忠实再现了天然人CENPC蛋白的关键结构域,包括对CENP-A核小体识别至关重要的CENP-C基序,以及稳定整合至动粒所需的二聚化结构域。
由于CENPC在多个区域具有内在无序特性,在受控条件下进行重组生产对维持结构域相互作用的功能完整性尤为重要。研究人员应参阅随附数据表(参考编号:absea#PP-382),核实具体表达宿主、标签配置及纯度等级,以确保与其实验体系的兼容性。
研究应用
重组人CENPC蛋白适用于以染色体生物学和有丝分裂保真性为核心的多种体外及细胞研究应用:
- 动粒重组实验:CENPC可用于体外重建内层动粒亚复合体,从而对CCAN组分在着丝粒处的组装与维持机制进行功能解析。
- 蛋白质相互作用研究:通过pull-down、共免疫沉淀及表面等离子体共振实验,可绘制CENPC与CENP-A核小体、Mis12复合体亚基及其他CCAN成员的相互作用图谱。
- 结构生物学:纯化的重组CENPC结构域可作为X射线晶体学、冷冻电镜及核磁共振研究的材料,用于探究动粒的分子架构。
- 抗体验证与ELISA标准品:重组CENPC为验证抗CENPC抗体及在定量免疫检测中建立标准曲线提供了明确定义的抗原。
- 有丝分裂错误的功能研究:CENPC可用于无细胞体系或显微注射实验,探究动粒破坏对纺锤体组装检测点信号传导的影响。
储存、操作与质量注意事项
为保持重组人CENPC蛋白的活性和结构完整性,研究人员应遵照官方产品数据表(absea#PP-382)中提供的储存和操作指南。此类重组蛋白的一般最佳操作规范包括:
- 按数据表规定的温度储存冻干或液态蛋白(长期储存通常为−20°C或−80°C)。
- 避免反复冻融,以防聚集和结合活性丧失。首次复溶时应分装成单次使用量。
- 在推荐缓冲液中复溶冻干蛋白,开盖前先使冻干管在室温下平衡,再轻柔混匀。
- 在关键实验前,通过SDS-PAGE验证蛋白完整性,并通过功能检测(如CENP-A核小体结合实验)确认活性。
配方缓冲液组成、载体蛋白含量、内毒素水平及纯度等级等具体细节应以产品数据表为准,因为这些参数直接影响实验结果。
常见问题
CENPC在人类细胞中的生物学功能是什么?
CENPC(着丝粒蛋白C)是内层动粒的关键蛋白,负责将由组蛋白变体CENP-A标记的着丝粒染色质与负责纺锤体微管附着的外层动粒机器相连接。它在CCAN复合体中发挥关键支架作用,对有丝分裂和减数分裂过程中染色体的精确分离至关重要。CENPC缺失会导致动粒组装缺陷和染色体排列异常。
重组人CENPC蛋白(rp364883)适用于哪些实验应用?
重组人CENPC蛋白适用于体外动粒重组实验、蛋白质相互作用研究(pull-down、共免疫沉淀、SPR)、结构生物学研究(X射线晶体学、冷冻电镜)、抗体验证及ELISA标准曲线建立。该蛋白也可用于检测纺锤体组装检测点信号传导的无细胞功能实验。研究人员应查阅产品数据表以确认经验证的应用范围。
如何储存重组人CENPC蛋白以维持其活性?
一般而言,重组蛋白应按生产商数据表规定储存于−20°C或−80°C,并通过分装成单次使用量避免反复冻融。rp364883的具体推荐储存条件、缓冲液组成及保质期详见产品数据表(absea#PP-382),使用前请务必查阅。
重组人CENPC蛋白是否适用于ELISA标准品或抗体验证抗原?
是的,重组CENPC蛋白提供了特性明确且重复性良好的抗原,广泛用于验证抗CENPC抗体在蛋白质印迹和免疫荧光中的应用,以及建立定量ELISA格式的标准曲线。研究人员应从数据表中核实纯度等级和标签配置,以确保其适用于特定免疫检测格式。
参考文献
- Musacchio A, Desai A. A molecular view of kinetochore assembly and function. Biology (Basel). 2017;6(1):5. doi:10.3390/biology6010005
- McKinley KL, Cheeseman IM. The molecular basis for centromere identity and function. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2016;17(1):16–29. doi:10.1038/nrm.2015.5
- Klare K, et al. CENP-C is a blueprint for constitutive centromere–associated network assembly within human kinetochores. Journal of Cell Biology. 2015;210(1):11–22. doi:10.1083/jcb.201412028
- Aladdin Scientific. Recombinant Human CENPC Protein (rp364883) Product Datasheet, absea#PP-382.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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