重组人CEP63蛋白:操作与应用实验方案
重组人CEP63蛋白:操作与应用实验方案
Recombinant Human CEP63 Protein是一种与中心体相关的重组蛋白,用于中心粒复制、细胞周期检查点调控及纤毛生成研究,需经过严格的复溶和储存操作以维持其完整的生物活性。
- 产品名称
- 重组人CEP63蛋白
- 货号
- rp374824
- 蛋白功能
- CEP63(中心体蛋白63)参与中心粒复制,对正常细胞周期进程和纤毛生成不可或缺。
- 推荐储存条件
- 冻干蛋白应在-20°C或-80°C条件下保存;避免反复冻融。复溶后应分装并在-80°C长期保存。
- 宿主/表达系统
- 该重组蛋白由异源表达系统生产,具体宿主信息请参阅产品说明书。
- 研究应用
- 适用于SDS-PAGE、Western blot、ELISA标准曲线制备、蛋白质相互作用研究及中心体功能相关细胞生物学实验。
背景:CEP63及其生物学意义
CEP63(中心体蛋白63)是一种含有卷曲螺旋结构域的蛋白质,定位于中心体,在细胞周期中对中心粒的复制发挥至关重要的作用。它作为中心体的支架蛋白,招募有丝分裂前中心粒忠实复制所必需的其他因子。CEP63表达或功能的破坏与中心粒生成障碍、细胞周期进程异常及初级纤毛形成缺陷相关,因此该蛋白在肿瘤生物学、发育生物学和纤毛病研究领域具有重要意义。
阿拉丁科学提供的重组人CEP63蛋白(rp374824)可用于多种生化和细胞生物学研究,帮助科研人员研究CEP63相互作用、开发和验证抗体,以及建立定量检测方法。
试剂准备与复溶
使用前,将重组人CEP63蛋白小瓶在室温下平衡10–15分钟。开瓶前短暂低速离心(如低速离心5–10秒),使附着于瓶壁和瓶盖的冻干粉沉至瓶底。
复溶:将冻干蛋白溶于无菌去离子水或产品说明书推荐的缓冲液中,以达到所需工作浓度。轻柔移液混匀,避免剧烈涡旋,以防蛋白变性。复溶后在室温静置5–10分钟,确保完全溶解。
分装:立即将复溶蛋白分装为单次用量,以减少反复冻融次数。每份分装物应标注日期、浓度和批号。长期保存请置于-80°C;短期保存(1个月内)可置于-20°C。请勿在4°C长期保存,否则蛋白稳定性将下降。
注意:具体复溶缓冲液及终浓度建议请以货号rp374824的最新产品说明书为准。
实验应用与使用指南
重组人CEP63蛋白适用于以下研究应用:
- SDS-PAGE与Western Blot:可作为CEP63检测的阳性对照或分子量参考,建议初始上样量为每泳道50–200 ng,并根据实验需要进行优化。
- ELISA标准曲线:对重组蛋白进行梯度稀释,可用于构建定量检测生物样本中CEP63含量的标准曲线。
- 抗体验证:作为抗原,用于在免疫检测开发流程中确认抗体的特异性和灵敏度。
- 蛋白质-蛋白质相互作用研究:可开展pull-down实验、共免疫沉淀对照或表面等离子体共振实验,以表征CEP63的结合伴侣。
- 功能性细胞生物学实验:在适用条件下,该蛋白可用于无细胞体系中研究中心体组装的重建实验。
最佳工作浓度应针对每种检测系统通过实验确定。在低浓度条件下,可向稀释缓冲液中添加载体蛋白(如0.1% BSA)以稳定重组蛋白。
质量控制与故障排查
质量控制:阿拉丁科学的重组人CEP63蛋白经SDS-PAGE检测纯度,并在适用条件下进行生物活性检测。每批产品附有批次检验报告(CoA),其中包含该批次特定的纯度、浓度及质控数据,请参阅。
常见故障排查:
- 蛋白聚集:若复溶后出现聚集,请在使用前于4°C、10,000 × g条件下离心5分钟去除不溶性物质。确保使用说明书指定的正确缓冲液进行复溶。
- Western blot信号弱:验证抗体与重组蛋白的兼容性,优化抗体浓度,确认转膜条件正确。检查蛋白是否经历了过多次反复冻融。
- 蛋白降解:蛋白降解可能由储存不当、反复冻融或蛋白酶污染引起。在适用条件下务必使用蛋白酶抑制剂,并在整个操作过程中维持冷链。
如需技术支持,请携带批号及产品货号(rp374824)联系阿拉丁科学客服团队。
安全、废弃处置及法规注意事项
重组人CEP63蛋白仅供科学研究使用(RUO),未经批准用于人体或动物的诊断、治疗或临床应用。
安全:操作所有重组蛋白时,请遵循标准实验室安全规范,佩戴适当的个人防护装备(PPE),包括手套和实验服。尽管该蛋白在标准法规框架下未被列为危险物质,仍应将其视为潜在过敏原,避免吸入冻干粉末或皮肤接触。
废弃处置:请按照所在机构的生物安全及化学废物处置法规处理蛋白溶液和受污染材料。如机构政策要求,在废弃前应使用适当消毒剂对蛋白溶液进行灭活处理。
出口及法规合规:本产品可能受目的地国家出口管制法规的约束。订购和使用前,请确认符合所有适用的地方、国家及国际法规。
常见问题
重组人CEP63蛋白应如何复溶和储存?
将冻干蛋白溶于无菌去离子水或产品说明书指定的缓冲液中,轻柔混匀,切勿涡旋。复溶后立即分装为单次使用量,长期保存请置于-80°C。应避免反复冻融,因为这会降低蛋白活性并促进聚集。
重组人CEP63蛋白的推荐应用有哪些?
重组人CEP63蛋白(rp374824)适用于Western blot和SDS-PAGE阳性对照、ELISA定量标准品、抗体验证,以及pull-down等蛋白质-蛋白质相互作用研究,还可用于探索中心体组装的无细胞重建实验。
CEP63的生物学功能是什么?它与我的研究有何相关性?
CEP63是一种中心体支架蛋白,对中心粒复制和正常细胞周期进程至关重要。其功能障碍与初级纤毛形成缺陷(与纤毛病相关)及有丝分裂异常(与肿瘤生物学相关)有关。从事中心体生物学、细胞分裂或纤毛相关疾病研究的科研人员将发现CEP63是极具价值的研究靶点。
如何排查重组蛋白纯度偏低或聚集的问题?
若观察到聚集,请在使用前于4°C、10,000 × g条件下离心复溶液5分钟,去除不溶性聚集体。确保使用说明书规定的正确复溶缓冲液和浓度。如对纯度有疑虑,请核对随批次提供的CoA,并携带批号联系阿拉丁科学技术支持团队寻求进一步帮助。
参考文献
- Loffler H, Fechter A, Liu FY, Poppelreuther S, Kramer A. DNA damage-induced centrosome amplification occurs via excessive numbers of progenitor centrioles. Cell Cycle. 2013;12(17):2916–2921.
- Sir JH, Barr AR, Nicholas AK, et al. A primary microcephaly protein complex forms a ring around parental centrioles. Nat Genet. 2011;43(11):1147–1153.
- Aladdin Scientific. Recombinant Human CEP63 Protein (rp374824) Product Datasheet. Aladdin Scientific; [current version].
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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