重组人CFAP57蛋白:操作与使用实验方案
重组人CFAP57蛋白:操作与使用实验方案
Recombinant Human CFAP57 Protein(重组人CFAP57蛋白)是一种研究级试剂,专为支持纤毛相关蛋白功能、运动纤毛组装及相关细胞过程研究而设计。
- 产品名称
- 重组人CFAP57蛋白
- 货号
- rp375991
- 蛋白来源
- 人(智人)
- 蛋白类型
- 重组纤毛与鞭毛相关蛋白
- 推荐储存条件
- 冻干蛋白储存于-20°C或-80°C;避免反复冻融
- 用途
- 仅供科学研究使用,不用于诊断或治疗目的
背景:CFAP57及其生物学功能
CFAP57(纤毛与鞭毛相关蛋白57)是由人类CFAP57基因编码的蛋白质。作为纤毛与鞭毛相关蛋白家族的成员,CFAP57被认为在运动纤毛和鞭毛的组装与功能调控中发挥结构性或调节性作用。运动纤毛是存在于呼吸道、脑室及生殖器官上皮表面的重要细胞器,负责驱动液体流动和细胞转运。
CFAP家族蛋白的功能缺陷或缺失与原发性纤毛运动障碍(PCD)及相关纤毛病变有关,这类疾病以纤毛运动受损为特征,可导致慢性呼吸道感染、内脏位置异常和不育。对CFAP57及其相互作用蛋白的研究有助于深入理解纤毛生物学及纤毛病的分子基础。
复溶操作方案
按照以下步骤对重组人CFAP57蛋白(rp375991)进行复溶,以用于后续实验:
- 平衡温度:开盖前将冻干瓶在室温下平衡5–10分钟,以减少冷凝和蛋白聚集。
- 复溶缓冲液:按产品说明书的规定,将冻干蛋白溶于无菌去离子水或适当缓冲液(如PBS,pH 7.4)中。轻轻旋转或用移液管混匀,避免剧烈涡旋。
- 浓度:按质检报告(CoA)推荐浓度进行复溶。请参阅产品说明书了解具体工作浓度范围。
- 离心:开瓶前对冻干瓶进行短暂离心(1,000 × g,30秒),确保所有冻干物沉于瓶底。
- 分装:复溶后立即制备单次使用分装,避免反复冻融对蛋白活性和完整性的影响。
注意:具体复溶体积和缓冲液建议请参见每批次产品随附的产品说明书和质检报告,务必以批次专属文件为准。
储存与稳定性指南
正确储存对于维持重组人CFAP57蛋白的活性和完整性至关重要:
- 冻干形式:储存于无霜冷冻箱的-20°C或-80°C。正确储存条件下,冻干蛋白通常自收货之日起可稳定保存12个月。
- 复溶后蛋白:复溶后将工作分装储存于-80°C。短期使用(1周内)可在4°C保存,但应验证其活性。
- 避免冻融循环:每次冻融均可能破坏蛋白结构并降低生物活性,强烈建议制备单次使用分装。
- 载体蛋白:若产品不含载体蛋白,可考虑添加牛血清白蛋白(BSA)至终浓度0.1%以提高储存稳定性,除非与您的实验不相容。
请务必查阅产品专属说明书和CoA,获取批次专属稳定性数据和有效期信息。
实验应用
重组人CFAP57蛋白适用于纤毛生物学及相关学科的多种研究应用,典型用途包括:
- 蛋白质-蛋白质相互作用研究:作为pull-down实验、共免疫沉淀(co-IP)或表面等离子体共振(SPR)实验中的诱饵蛋白或猎物蛋白,用于鉴定CFAP57结合伴侣。
- 抗体制备与验证:作为免疫原用于制备抗CFAP57抗体,或作为ELISA和Western blot验证实验中的阳性对照抗原。
- 功能/生化实验:研究CFAP57的生化特性,包括其在轴丝组装或与动力蛋白调节复合物相互作用中的作用。
- 结构研究:适合作为冷冻电子显微镜(cryo-EM)或X射线晶体学等结构生物学方法的底物(需满足纯度和缓冲液相容性要求)。
- 细胞实验:在无细胞体系或重组体系中用于研究纤毛组装动力学。
注意:每种具体应用的最适工作浓度和实验条件需通过实验摸索确定。本产品仅供科学研究使用,不适用于临床或诊断应用。
质量控制与故障排查
每批重组人CFAP57蛋白在出厂前均经过质量控制检测。典型质控评估可能包括SDS-PAGE纯度评估和Western blot身份确认。请参阅随批次提供的CoA获取详细质控数据。
常见故障排查建议
- 蛋白活性低:确认蛋白未经历多次冻融循环。检查复溶缓冲液成分和pH值。确保实验孵育条件(温度、时间)已针对您的检测方案进行优化。
- 蛋白沉淀:若复溶后出现沉淀,可在4°C下轻柔离心(10,000 × g,5分钟)后使用上清液。若聚集持续存在,可考虑加入相容的载体蛋白或低浓度去垢剂。
- SDS-PAGE或Western blot出现意外条带:微小条带可能代表翻译后修饰产物、降解产物或在可接受质控范围内的宿主细胞来源杂质。若结果与CoA不一致,请联系Aladdin Scientific技术支持。
- 功能实验无信号:确认实验格式和检测方法已针对CFAP57进行验证。优化蛋白浓度和实验缓冲液条件。
如需进一步技术支持,请联系Aladdin Scientific客户服务团队。
常见问题
重组人CFAP57蛋白的推荐复溶缓冲液是什么?
推荐的复溶缓冲液通常为无菌去离子水或PBS(pH 7.4),具体以每批次产品随附的产品说明书和质检报告为准。由于配方不同,缓冲液建议可能有所差异,请务必参阅批次专属文件。
如何储存重组人CFAP57蛋白以维持其活性?
将冻干蛋白储存于无霜冷冻箱的-20°C或-80°C。复溶后,制备单次使用分装并储存于-80°C,以避免反复冻融导致蛋白活性和结构完整性显著降低。4°C短期储存(最多一周)可能可以接受,但需针对您的具体应用进行验证。
重组人CFAP57蛋白经过验证的应用有哪些?
重组人CFAP57蛋白适用于多种研究应用,包括蛋白质-蛋白质相互作用研究(如pull-down、co-IP、SPR)、抗体制备与验证(ELISA、Western blot)、功能和生化实验以及结构生物学研究。具体应用验证信息和推荐浓度详见产品说明书。本产品仅供科学研究使用。
重组人CFAP57蛋白是否适用于临床或诊断用途?
不适用。重组人CFAP57蛋白(rp375991)严格仅供科学研究使用(RUO),未经批准且不适用于临床诊断、治疗应用或任何涉及临床环境中人或动物的操作。
复溶后出现蛋白沉淀应如何处理?
若出现沉淀,可在4°C下以10,000 × g离心5分钟,取澄清上清液使用。若聚集持续存在,可考虑添加相容载体蛋白(如0.1% BSA)或低浓度非离子型去垢剂。如问题仍未解决,请联系Aladdin Scientific技术支持。
参考文献
- Horani A, Ferkol TW. Understanding Primary Ciliary Dyskinesia and Other Ciliopathies. J Pediatr. 2021;230:15-22.e1. doi:10.1016/j.jpeds.2020.11.040
- Reiter JF, Leroux MR. Genes and molecular pathways underpinning ciliopathies. Nat Rev Mol Cell Biol. 2017;18(9):533-547. doi:10.1038/nrm.2017.60
- Wallmeier J, et al. Motile ciliopathies. Nat Rev Dis Primers. 2020;6(1):77. doi:10.1038/s41572-020-0209-6
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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