重组人CHD1蛋白:常见问题与规格说明
重组人CHD1蛋白:常见问题与规格说明
Recombinant Human CHD1 Protein 是一种染色质域解旋酶DNA结合蛋白,在ATP依赖性染色质重塑、转录调控及DNA修复中发挥核心作用,是表观遗传学与染色质生物学研究的重要工具。
- 产品名称
- 重组人CHD1蛋白
- 货号
- rp377077
- 蛋白家族
- CHD(染色质域解旋酶DNA结合)家族,SNF2超家族
- 关键功能域
- 串联染色质域、SNF2样ATP酶/解旋酶结构域、DNA结合域
- 主要生物学功能
- ATP依赖性染色质重塑、核小体滑动、转录延伸促进及DNA损伤应答
- 供应商
- 阿拉丁科学
CHD1是什么?为什么它在科学研究中重要?
CHD1(染色质域解旋酶DNA结合蛋白1)是染色质重塑酶SNF2超家族中CHD亚家族的成员。它利用ATP水解释放的能量对核小体进行重新定位、移除或重构,从而调控转录因子、复制机器及DNA修复复合物对DNA的可及性。
CHD1具有三个关键结构特征:识别组蛋白H3赖氨酸4三甲基化(H3K4me3)的N端串联染色质域;驱动核小体重塑的中央SNF2样ATP酶/解旋酶结构域;以及C端DNA结合域。这些特征共同使CHD1能够将活性染色质标记的识别与主动重塑活性相偶联。
CHD1与多种重要生物学过程相关,包括RNA聚合酶II介导的转录延伸、胚胎干细胞多能性维持、同源重组DNA修复以及肿瘤抑制。CHD1功能缺失突变已在多种肿瘤中被发现,尤其是前列腺癌,使其成为肿瘤学研究的热点靶标。
重组人CHD1蛋白有哪些推荐的科研应用?
重组人CHD1蛋白适用于多种体外生化及无细胞分析实验,典型科研应用包括:
- 核小体重塑实验:利用限制性酶可及性分析或凝胶实验,检测ATP依赖性核小体在重构染色质底物上的重新定位。
- ATP酶活性检测:通过比色法磷酸释放检测或放射性标记ATP水解法,定量CHD1的DNA或核小体刺激性ATP酶活性。
- 蛋白-蛋白相互作用研究:通过pull-down、共免疫沉淀或表面等离子体共振实验,研究CHD1的结合伴侣。
- 结合研究:利用凝胶迁移实验(EMSA)或荧光偏振法,评估CHD1与修饰组蛋白肽段(如H3K4me3)或特定DNA序列的相互作用。
- 结构与生物物理研究:支持冷冻电镜、X射线晶体学或氢氘交换质谱学对CHD1结构与构象动态的研究。
- 药物发现:作为生化靶标,用于针对CHD1 ATP酶或染色质域功能的抑制剂筛选项目。
研究人员在收到产品后,应针对每种实验类型确认具体活性参数及推荐浓度范围,因最优条件可能因实验而异。
重组人CHD1蛋白应如何储存和操作?
适当的储存和操作对于保持重组人CHD1蛋白的结构完整性和酶活性至关重要。重组染色质重塑蛋白的通用最佳操作规范包括:
- 长期储存:在−80 °C下储存,以长期维持蛋白稳定性。避免反复冻融,冻融循环会导致蛋白聚集并丧失活性。
- 短期储存:若计划在数天至数周内使用,收到产品后立即分装,根据配方缓冲液和稳定剂的不同,可在−20 °C或冰上(4 °C)储存。
- 分装:收到产品后立即将原液分装为单次用量,以减少冻融次数。
- 工作液配制:使用前即时用兼容缓冲液(通常含温和还原剂如DTT或TCEP、载体蛋白如BSA及生理盐浓度)配制稀释液。
- 避免去垢剂和极端pH:暴露于非离子型或离子型去垢剂,或pH超出6.5–8.5范围的溶液中,可能导致蛋白变性。
注意:请始终参阅每批次rp377077随附的质量检验报告(CoA)和产品说明书,以获取精确的储存缓冲液组成、推荐工作浓度及批次特异性活性数据。
质量、纯度与表达系统注意事项
在为科研选择重组CHD1蛋白时,了解表达平台和质量属性对于实验重现性和数据解读至关重要。
表达系统:重组人CHD1蛋白可在多种异源系统中生产,最常见的是昆虫细胞(杆状病毒/Sf9)或哺乳动物细胞(HEK293)表达平台。对于CHD1这样大型、多结构域的染色质重塑酶,昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统通常更为适合,因为它们能支持正确的蛋白折叠、翻译后修饰(磷酸化、乙酰化)以及具有酶活性复合物的组装。由于全长CHD1蛋白体积较大(约200 kDa)且结构复杂,细菌(大肠杆菌)表达可能产生错误折叠或无活性的蛋白。
纯度:高质量的重组CHD1制剂通过SDS-PAGE及考马斯亮蓝或银染法评估,纯度应≥85%。对于细胞实验应用,内毒素水平应较低(通常<1.0 EU/µg)。
活性确认:每批次产品应通过核小体刺激ATP酶活性实验或等效功能实验进行活性测试,以在使用前确认生物活性。
建议研究人员向阿拉丁科学索取rp377077批次的质量检验报告(CoA),以根据具体实验需求核实所有质量参数。
常见问题
重组人CHD1蛋白的分子量是多少?
根据氨基酸序列预测,全长人源CHD1蛋白的分子量约为197 kDa。SDS-PAGE上观测到的表观分子量可能略有差异。请参阅rp377077批次专属质量检验报告(CoA),以获取经确认的分子量及SDS-PAGE图谱。
重组人CHD1蛋白(rp377077)是否具有经确认的ATP酶活性?
质量级别的重组CHD1蛋白通常在批次放行质量控制中进行核小体刺激ATP酶活性测试。但rp377077的具体活性数据应在产品质量检验报告中核实。如需批次特异性活性文件,请联系阿拉丁科学技术支持团队。
重组人CHD1蛋白推荐使用哪种缓冲液和配方条件?
重组CHD1蛋白的最优配方缓冲液通常包含生理盐浓度(如150–300 mM NaCl)、温和还原剂(DTT或TCEP)、稳定剂(甘油,10–20%)以及中性至弱碱性pH(7.2–7.8)。rp377077的精确缓冲液组成详见产品说明书和CoA;研究人员在使用前应查阅这些文件。
重组人CHD1蛋白能否用于药物筛选或抑制剂研究?
可以。重组人CHD1蛋白适合作为生化靶标用于小分子抑制剂筛选,尤其适用于针对CHD1 ATP酶或染色质域功能的实验。它可用于基于荧光的ATP酶实验、热稳定性漂移实验或结合实验,以进行苗头化合物的识别和化合物表征。
重组人CHD1蛋白是否与疾病相关生物学研究有关?
是的。CHD1功能缺失突变已在前列腺癌中被发现,CHD1缺失与基因组不稳定性和转录程序改变相关。CHD1还在胚胎发育和干细胞多能性维持研究中受到广泛关注。这些疾病相关性使重组人CHD1蛋白成为肿瘤学和发育生物学研究的重要工具。
参考文献
- Woodage T, et al. Characterization of the CHD family of proteins. Proc Natl Acad Sci USA. 1997;94(21):11472–11477. PMID:9326634
- Sims RJ 3rd, et al. Human but not yeast CHD1 binds directly and selectively to histone H3 methylated at lysine 4 via its tandem chromodomains. J Biol Chem. 2005;280(51):41789–41792. PMID:16247017
- Flanagan JF, et al. Double chromodomains cooperate to recognize the methylated histone H3 tail. Nature. 2005;438(7071):1181–1185. PMID:16372014
- Burkhardt L, et al. CHD1 is a 5q21 tumor suppressor required for ERG rearrangement in prostate cancer. Cancer Res. 2013;73(9):2795–2805. PMID:23447578
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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