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重组人GBA2蛋白:研究使用指南

Recombinant Human GBA2 Protein 是一种非溶酶体葡萄糖神经酰胺酶,用于研究鞘脂代谢、神经系统疾病机制及葡萄糖神经酰胺水解途径。

产品名称
重组人GBA2蛋白
货号
rp372119
蛋白功能
非溶酶体葡萄糖神经酰胺酶,在细胞表面及内质网将葡萄糖神经酰胺水解为神经酰胺和葡萄糖
研究相关性
与鞘脂稳态、男性生育力、神经退行性疾病及遗传性痉挛性截瘫相关
物种来源
人(智人)
推荐储存条件
收到后立即置于-80°C保存;避免反复冻融
用途
仅供研究使用;不适用于治疗或诊断目的

蛋白背景与生物学意义

GBA2(非溶酶体葡萄糖神经酰胺酶2)由GBA2基因编码,是一种膜结合酶,催化葡萄糖神经酰胺(GlcCer)水解为神经酰胺和葡萄糖。与溶酶体葡萄糖脑苷脂酶GBA1不同,GBA2主要定位于内质网和质膜,在中性至弱酸性pH条件下发挥功能。这种空间分布和pH差异使GBA2成为细胞外及非溶酶体鞘脂库的关键调节因子。

GBA2活性失调与多种疾病密切相关。GBA2功能缺失突变与遗传性痉挛性截瘫(SPG46)及小脑共济失调相关。GBA2还与男性生育力有关,参与调控精母细胞中葡萄糖神经酰胺水平,对正常精子形态至关重要。此外,GBA2活性与帕金森病病理之间的关系也受到日益广泛的关注,神经酰胺和葡萄糖神经酰胺代谢失衡可能影响α-突触核蛋白聚集。重组人GBA2蛋白为研究人员提供了一种纯化、表征明确的工具,可在体外研究上述与疾病相关的生化途径。

蛋白操作、复溶与储存

正确操作重组人GBA2蛋白对于保持酶活性和确保实验重复性至关重要。收到产品后,应短暂离心,以集中运输过程中可能附着于管壁的物料。若产品为冻干形式,请使用产品说明书推荐的缓冲液(通常为无菌PBS或Tris缓冲液)轻柔复溶;在4°C下缓慢溶解,轻轻旋转混匀,避免剧烈涡旋,以防蛋白变性。

短期储存(不超过一周)时,复溶后的蛋白可在4°C保存。长期储存时,应按单次使用量分装以减少冻融次数,并置于-80°C保存。反复冻融会显著降低酶活性,应严格避免。在复溶缓冲液中加入0.1% BSA等载体蛋白,有助于稳定低浓度制剂。进行酶活性实验时,应始终在冰上操作,以减少使用前的活性损失。

注意:具体复溶体积、缓冲液组成及浓度数据请参见批次特定的质量检验报告(CoA)。研究人员应查阅CoA以获取每批次产品的确切规格信息。

实验应用与检测指导

重组人GBA2蛋白适用于以鞘脂生物学和酶生物化学为核心的多种体外研究应用:

  • 酶活性检测:可使用人工底物4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷(4-MUG)通过荧光法,或使用天然底物葡萄糖神经酰胺通过质谱法检测GBA2活性。建议在平行反应中加入去氢差向导醇B环氧化物(CBE),以选择性抑制GBA1活性,从而在混合体系中分离出GBA2特异性活性。
  • 抑制剂筛选:该重组蛋白非常适合用于药物发现中针对GBA2的新型小分子抑制剂测试,特别适用于遗传性痉挛性截瘫和C型尼曼匹克病等疾病研究。
  • 蛋白-蛋白相互作用研究:可设计pull-down及共免疫沉淀实验,以鉴定与鞘脂转运相关的GBA2结合蛋白。
  • Western blot及ELISA标准品:重组GBA2蛋白可用作免疫检测实验中的阳性对照或校准标准品。
  • 结构与生物物理研究:纯化蛋白支持圆二色谱(CD)、热位移实验及其他生物物理表征实验。

最佳检测条件(pH、温度、底物浓度及缓冲液组成)应通过实验确定,或参照已验证的已发表方案,因不同实验设计条件可能有所差异。

质量、安全与法规注意事项

质量:重组人GBA2蛋白(rp372119)在受控条件下生产,通过SDS-PAGE纯度分析和功能活性测试评估质量。研究人员应在启动实验前索取每批次的质量检验报告(CoA),以确认纯度、浓度和比活性数据。在持续进行的研究中更换批次时,应评估批次间一致性。

安全:本蛋白仅供体外研究使用。操作重组蛋白时应遵守标准实验室安全规范,包括佩戴手套、实验服和护目镜等适当个人防护装备(PPE)。尽管重组GBA2在标准实验室法规下不属于危险材料,但所有生物材料均应谨慎操作。具体危害信息请参阅阿拉丁科学提供的安全数据表(SDS)。

法规:本产品仅供研究使用(RUO),未获批用于临床诊断、治疗应用,或对人或动物给药。研究人员有责任确保遵守所在机构的生物安全规程及当地关于重组蛋白使用的所有适用法规要求。

常见问题

GBA1与GBA2有何区别?

GBA1(酸性β-葡萄糖苷酶)是一种溶酶体酶,在溶酶体内水解葡萄糖神经酰胺,其缺乏与戈谢病相关。GBA2是一种非溶酶体葡萄糖神经酰胺酶,定位于内质网和质膜,在中性pH下发挥功能。两者是由不同基因编码、结构不同、抑制剂敏感性不同的酶;值得注意的是,GBA2可被N-丁基脱氧野尻霉素(NB-DNJ)抑制,但不受去氢差向导醇B环氧化物(CBE)抑制,而GBA1则可被CBE抑制。

复溶后如何验证重组GBA2蛋白的酶活性?

通常使用4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷(4-MUG)作为人工底物,通过标准荧光法验证GBA2活性。反应应在GBA2的最适pH(通常接近中性pH)下进行,并与无酶空白对照比较。为特异性归因于GBA2的活性,应加入去氢差向导醇B环氧化物(CBE)以抑制任何GBA1污染。具体活性规格请参阅批次特定的CoA。

重组人GBA2蛋白是否可用于体内研究?

不可以。重组人GBA2蛋白(rp372119)仅供研究使用(RUO),未经验证、批准或设计用于对人或动物进行体内给药,也不适用于临床诊断或治疗应用。本产品的所有使用均应符合适用的机构生物安全及监管规定。

重组GBA2蛋白可耐受多少次冻融循环?

强烈建议尽量减少冻融次数以保持酶活性。最佳做法是在首次解冻后将蛋白分装为单次使用量,并将分装品储存于-80°C。作为重组酶的通用准则,超过两到三次冻融循环可能导致显著的活性损失;但GBA2的确切耐受性应通过产品特定CoA确认或在实验室中通过实验验证。

哪些疾病与GBA2相关?为何它是研究靶点?

GBA2突变与遗传性痉挛性截瘫46型(SPG46)、常染色体隐性遗传性小脑共济失调以及因精子形态异常导致的男性不育相关。由于GBA2在葡萄糖神经酰胺和神经酰胺稳态中的作用可能与α-突触核蛋白生物学相交,其在帕金森病研究中也备受关注。此外,GBA2抑制还被探索作为戈谢病和C型尼曼匹克病等溶酶体贮积症的治疗策略。

参考文献

  1. Körschen HG, Yildiz Y, Raju DN, et al. The non-lysosomal beta-glucosidase GBA2 is a non-integral membrane-associated protein at the endoplasmic reticulum (ER) and Golgi. J Biol Chem. 2013;288(5):3381-3393. doi:10.1074/jbc.M112.414714
  2. Boot RG, Verhoek M, Donker-Koopman W, et al. Identification of the non-lysosomal glucosylceramidase as beta-glucosidase 2. J Biol Chem. 2007;282(2):1305-1312. doi:10.1074/jbc.M610544200
  3. Martin E, Schüle R, Smets K, et al. Loss of function of glucocerebrosidase GBA2 is responsible for motor neuron defects in hereditary spastic paraplegia. Am J Hum Genet. 2013;92(2):238-244. doi:10.1016/j.ajhg.2012.11.021
  4. Yildiz Y, Matern H, Thompson B, et al. Mutation of beta-glucosidase 2 causes glycolipid storage disease and impaired male fertility. J Clin Invest. 2006;116(11):2985-2994. doi:10.1172/JCI29224

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

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Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《重组人GBA2蛋白:研究使用指南》. 阿拉丁知识库,更新于 2026年11月1日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/recombinant-human-gba2-protein-guideline.html
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