重组人GJA8蛋白:操作与使用实验方案
重组人GJA8蛋白:操作与使用实验方案
Recombinant Human GJA8 Protein is a research-grade connexin 50 protein produced for use in gap-junction biology, lens physiology studies, and cataract-associated mutation research.(重组人GJA8蛋白是一种研究级连接蛋白50,专为间隙连接生物学、晶状体生理研究及白内障相关突变研究而制备。)
- 产品名称
- 重组人GJA8蛋白
- 货号
- rp370641
- 别名
- 连接蛋白50(Cx50)、间隙连接α-8蛋白
- 物种
- 人(智人)
- 表达系统
- 重组表达(具体表达系统请以产品数据表为准)
- 建议储存条件
- -20°C或-80°C保存;避免反复冻融
- 应用
- 体外生化检测、结构研究、抗体验证、间隙连接研究
背景:GJA8与间隙连接生物学
GJA8(间隙连接α-8蛋白),通常称为连接蛋白50(Cx50),是连接蛋白家族跨膜蛋白的成员,负责形成细胞间间隙连接通道。这些通道允许离子、小分子代谢物及分子量约1 kDa以下的信号分子通过,从而促进相邻细胞间的直接胞质通讯。
在人体中,GJA8主要在眼晶状体中表达,对维持晶状体的透明性和稳态起关键作用。GJA8基因的致病突变与常染色体显性先天性白内障相关,使该蛋白成为眼科学和结构生物学研究的重要对象。
重组人GJA8蛋白使研究人员能够在受控的体外环境中研究连接蛋白50通道的组装、蛋白质-蛋白质相互作用以及与疾病相关变体的功能后果。
复溶操作方案
请按照以下步骤复溶重组人GJA8蛋白。在操作前,请务必参阅产品专用数据表(货号:rp370641),了解确切的缓冲液成分、浓度及加量建议。
- 平衡样品瓶:将样品瓶从冷冻储存中取出,在室温下平衡10–15分钟。请勿将冻干蛋白暴露于直接热源。
- 准备复溶缓冲液:使用无菌去离子水或产品数据表中指定的缓冲液(通常为PBS,pH 7.4,如需要可加入载体蛋白如0.1% BSA)。新鲜配制缓冲液或使用经验证的储存液。
- 轻柔加入缓冲液:将建议体积的复溶缓冲液沿样品瓶内壁移液,勿涡旋,轻轻旋转样品瓶使蛋白完全溶解。
- 短暂孵育:将复溶液在室温下静置5–10分钟,确保完全溶解。
- 离心:短暂离心(300–500 × g,1–2分钟),收集瓶底溶液并去除不溶性颗粒。
- 分装储存:分装为单次使用量,以减少冻融次数,并按指示储存(见储存部分)。
注意:具体缓冲液成分和复溶体积必须以rp370641官方产品数据表为准。
储存与稳定性
正确储存对于维持重组人GJA8蛋白的活性和完整性至关重要。
- 长期储存:冻干蛋白在-20°C或-80°C保存。正确储存时,冻干制剂通常稳定12个月或更长时间;具体保质期请以数据表为准。
- 复溶后蛋白:复溶后立即使用,或分装后于-80°C保存。若已添加BSA等载体蛋白,复溶蛋白可在4°C短期保存(通常不超过1周);请以数据表为准。
- 避免反复冻融:每次冻融均可导致蛋白聚集和活性损失,强烈建议单次使用分装。
- 载体蛋白:在复溶缓冲液中加入0.1% BSA或人血清白蛋白有助于稳定稀释蛋白溶液,减少蛋白对管壁的非特异性吸附。
所有储存条件均应以rp370641官方产品数据表为准。
实验应用
重组人GJA8蛋白(rp370641)适用于多种体外研究应用,包括但不限于:
- 生化检测:作为阳性对照或标准品用于ELISA、蛋白质印迹(Western blot)和点印迹检测,用于检测或定量GJA8/连接蛋白50。
- 抗体验证:适用于在免疫检测开发中验证抗GJA8抗体的特异性。
- 蛋白质-蛋白质相互作用研究:可用于pull-down实验、共免疫沉淀实验或表面等离子共振实验,以鉴定连接蛋白50的结合伙伴。
- 结构与生物物理研究:支持体外研究连接蛋白寡聚化、半通道及全通道的组装。
- 疾病突变研究:为白内障相关GJA8变体的比较研究提供野生型参考。
用户应针对每种具体应用优化检测条件、蛋白浓度和缓冲液体系。请参阅产品数据表获取经验证的应用数据。
质量、安全与合规说明
质量:Aladdin Scientific重组人GJA8蛋白在受控条件下生产。每批次均检测纯度、内毒素水平和生物活性;具体规格请参阅随产品附带的批次质量检验报告(CoA)。
安全:本产品仅供科学研究使用(RUO),未经批准用于人或动物的诊断或治疗。请按照良好实验室规范(GLP)操作。有关危害信息、个人防护装备要求和废弃物处置指南,请参阅安全数据表(SDS)。
法规:不适用于临床、兽医或食品加工用途。用户有责任确保在使用或处置本产品时符合适用的地方法规。
批次间一致性:请务必记录样品瓶标签上的批号。如批次间性能出现意外差异,请联系Aladdin Scientific技术支持,并保留CoA以供参考。
常见问题
GJA8蛋白是什么,为何在研究中具有重要意义?
GJA8编码连接蛋白50(Cx50),这是一种对眼晶状体细胞间通讯至关重要的间隙连接蛋白。GJA8基因突变与常染色体显性先天性白内障相关,使其成为理解晶状体生物学和深入研究连接蛋白相关疾病的主要靶点。
如何复溶和储存重组人GJA8蛋白以保持其活性?
使用无菌PBS(pH 7.4)或产品数据表中规定的缓冲液复溶冻干蛋白。避免涡旋,轻轻旋转溶解。将复溶蛋白分装为单次使用量,于-80°C储存。避免反复冻融,因为这会降低蛋白活性并促进聚集。请务必以rp370641数据表确认具体条件。
rp370641经验证适用于哪些实验应用?
重组人GJA8蛋白(rp370641)适用于体外应用,包括ELISA、蛋白质印迹、抗体特异性验证、蛋白质-蛋白质相互作用研究(如pull-down、SPR),以及作为白内障突变研究中的野生型参考。应用特异性的验证数据请以官方产品数据表为准。
重组人GJA8蛋白是否可用于细胞实验?
重组人GJA8蛋白主要用于无细胞体外生化和生物物理应用。其在细胞实验中的适用性取决于纯度、内毒素水平和制剂。在细胞培养体系中使用前,请参阅产品数据表和批次质量检验报告(CoA)了解批次特异性内毒素数据。
复溶后蛋白未完全溶解,应如何处理?
如轻轻旋转后仍有颗粒残留,在300–500 × g下短暂离心1–2分钟,转移上清液。如问题持续,可在37°C下轻柔混合不超过5分钟。如仍无法完全溶解,请联系Aladdin Scientific技术支持,并保留批号和CoA以便排除故障。
参考文献
- White TW, Bruzzone R. Multiple connexin proteins in single intercellular channels: connexin compatibility and functional consequences. J Bioenerg Biomembr. 1996;28(4):339-350.
- Shiels A, Bhatt DL, Bhatt P. Connexin 50 and connexin 46: in the lens you are connected. Trends Mol Med. 2007; (general reference – specific details to be verified).
- Aladdin Scientific. Recombinant Human GJA8 Protein, SKU rp370641. Product Datasheet. Aladdin Scientific; [date to be confirmed].
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
危险品化学品经营许可证(带存储)