实验方案(Protocols)

重组人GNAO1蛋白:操作与使用实验方案

Recombinant Human GNAO1 Protein 是一种高纯度G蛋白α亚基重组蛋白,适用于G蛋白信号通路研究、神经科学研究及生化相互作用检测。

产品名称
重组人GNAO1蛋白
货号
rp367898
蛋白家族
异三聚体G蛋白α亚基(Gi/Go家族)
推荐储存条件
-80°C长期储存;避免反复冻融
主要应用
生化检测、蛋白质相互作用研究、G蛋白信号通路研究
表达系统
重组表达系统(详见产品数据表)

所需材料与仪器

开始操作前,请确认以下材料已备齐:

  • 重组人GNAO1蛋白(货号:rp367898),使用前于-80°C储存
  • 无菌、无核酸酶水或推荐的复溶缓冲液(具体缓冲液组成请参阅产品数据表)
  • 微量离心管(1.5 mL,推荐使用低蛋白吸附型)
  • 经校准的微量移液器及无菌吸头
  • 可达≥10,000 × g的微量离心机
  • 冰盒或冷却模块,操作过程中将样品维持在4°C
  • 蛋白定量试剂(如BCA或Bradford法试剂盒)
  • 适用于下游应用的检测缓冲液(如GTPase活性检测缓冲液、免疫沉淀裂解缓冲液)

注意:操作前务必查阅随产品提供的批次特异性质量检验报告(CoA)和产品数据表,以确认规格参数。

复溶与分装操作步骤

请按照以下步骤仔细操作,完成重组人GNAO1蛋白的复溶与分装:

  1. 解冻:从-80°C取出小瓶,置于冰上在4°C缓慢解冻。勿在室温解冻或使用水浴,因快速温度变化可能损害蛋白活性。
  2. 离心:将小瓶短暂离心(低速约5–10秒),使管壁和瓶盖上的冻干材料或液体沉集至瓶底。
  3. 复溶:按产品数据表指定的体积,将无菌复溶缓冲液逐滴加入小瓶中。轻轻旋转或上下吹打使其溶解——切勿涡旋振荡,剧烈振荡可能导致蛋白变性。
  4. 平衡:将复溶蛋白置于冰上静置5–10分钟,确保完全溶解。
  5. 定量:以BSA为标准曲线,采用BCA法或Bradford法测定蛋白浓度,确认浓度符合预期。
  6. 分装:使用低蛋白吸附管将复溶蛋白分装为单次用量,以减少吸附损失并避免反复冻融。
  7. 分装储存:在液氮中快速冷冻分装样品,于-80°C储存。若1–2周内短期使用,可在4°C保存。

重要提示:反复冻融会显著降低蛋白活性。请根据每次实验的预期用量规划分装体积。

G蛋白信号检测应用指南

重组人GNAO1蛋白适用于多种研究G蛋白α亚基功能的生化和无细胞检测。典型应用包括:

  • GTPase活性检测:GNAO1具有内在GTPase活性。可将该蛋白用于GTP水解检测,以表征基础活性或RGS蛋白及药理试剂的调节作用。建议通过预实验凭经验优化蛋白浓度。
  • 蛋白质相互作用研究:GNAO1与Gβγ亚基、GPCR、RGS蛋白及效应分子相互作用。该重组蛋白可用于GST pull-down、共免疫沉淀(co-IP)或表面等离子共振(SPR)检测,以绘制相互作用界面图谱。
  • 结构与生物物理研究:纯化蛋白可作为ELISA和Western blot验证实验中的参考标准品或抗原。
  • 药物筛选:GNAO1是神经系统疾病研究的重要靶点。该重组蛋白可用于竞争性结合或基于活性的筛选平台。

优化说明:最适工作浓度因检测格式而异。请始终设置适当的阳性和阴性对照。起始浓度建议请参阅同行评审文献和产品数据表。

质量控制与故障排除

为确保实验可靠性,请纳入以下质量控制(QC)检查:

问题可能原因推荐措施
活性低或未检测到活性因解冻不当或涡旋振荡导致蛋白变性在冰上解冻;轻柔复溶;勿涡旋振荡
聚集或沉淀冻融次数过多或缓冲液不兼容使用单次分装;对照数据表核实缓冲液组成
SDS-PAGE条带大小异常降解或样品制备错误使用新鲜分装样品;检查还原与非还原条件
实验间重复性差复溶后蛋白浓度不稳定使用前重新定量每份分装;标准化复溶体积

如需进一步技术支持,请联系阿拉丁科学技术支持团队,并提供货号rp367898及CoA上的批次号。

安全、废弃物处置与法规说明

安全:重组人GNAO1蛋白仅供研究使用(RUO),未经批准用于人体治疗、诊断或兽医用途。请按照所在机构关于重组蛋白的生物安全指南进行操作。佩戴适当的个人防护装备(PPE),包括手套和实验服。

废弃物处置:按照当地机构和政府关于生物材料的法规处置含蛋白废弃物。如机构生物安全规程要求,在处置前需采用适当方法(如高压灭菌或化学灭活)对蛋白废弃物进行灭活。

法规:本产品仅供研究用途。用户有责任遵守其所在司法管辖区内所有适用的地方、国家及国际法规,包括重组蛋白使用相关规定。

常见问题

重组人GNAO1蛋白的推荐复溶缓冲液是什么?

具体的复溶缓冲液和体积详见货号rp367898随附的产品数据表和批次特异性质量检验报告(CoA)。请始终遵循批次特异性说明,因配方可能有所不同。如未获得数据表,请联系阿拉丁科学技术支持团队。

重组人GNAO1蛋白能耐受多少次冻融循环?

为保持蛋白活性和完整性,强烈建议冷冻前制备单次分装以减少冻融次数。作为重组G蛋白亚基的通用最佳实践,反复冻融(通常超过2–3次)可能导致活性显著丧失和蛋白聚集。批次特异性指导请参阅产品数据表。

重组人GNAO1蛋白经过哪些下游检测的验证?

重组人GNAO1蛋白(rp367898)适用于GTPase活性检测、蛋白质相互作用研究(pull-down、co-IP、SPR)、ELISA及作为参考抗原的Western blot等应用。经验证的应用在产品数据表上确认;如需特定应用的技术指导,请联系阿拉丁科学。

GNAO1的生物学意义是什么?

GNAO1编码Go异三聚体G蛋白的α亚基,该亚基在神经系统中大量表达,是GPCR信号传导的关键介质。它在神经传递、神经元分化和离子通道调控中发挥关键作用。GNAO1突变与人类早发性癫痫和运动障碍相关,使其成为具有重要临床意义的研究靶点。

收到GNAO1蛋白后,如何确认其身份和纯度?

收货后,取少量样品进行SDS-PAGE电泳,将条带大小与CoA中标注的预测分子量进行比对,以验证蛋白身份和纯度。将观察到的纯度与CoA规格进行交叉核对。如需功能确认,建议使用GTPase活性检测或与已知相互作用蛋白的结合检测。若不立即使用,请立即将蛋白于-80°C储存。

参考文献

  1. Jiang M, Bajpayee NS. Molecular mechanisms of Go signaling. Neurosignals. 2009;17(1):23-41.
  2. Saitsu H, et al. De novo mutations in GNAO1 cause a severe neurological disorder with epilepsy, intellectual disability, and movement disorder. American Journal of Human Genetics. 2016.
  3. Gilman AG. G proteins: transducers of receptor-generated signals. Annual Review of Biochemistry. 1987;56:615-649.

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

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Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《重组人GNAO1蛋白:操作与使用实验方案》. 阿拉丁知识库,更新于 2026年10月31日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/recombinant-human-gnao1-protein-handling-usage-protocol.html
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