重组人GNAO1蛋白:操作与使用实验方案
重组人GNAO1蛋白:操作与使用实验方案
Recombinant Human GNAO1 Protein 是一种高纯度G蛋白α亚基重组蛋白,适用于G蛋白信号通路研究、神经科学研究及生化相互作用检测。
- 产品名称
- 重组人GNAO1蛋白
- 货号
- rp367898
- 蛋白家族
- 异三聚体G蛋白α亚基(Gi/Go家族)
- 推荐储存条件
- -80°C长期储存;避免反复冻融
- 主要应用
- 生化检测、蛋白质相互作用研究、G蛋白信号通路研究
- 表达系统
- 重组表达系统(详见产品数据表)
所需材料与仪器
开始操作前,请确认以下材料已备齐:
- 重组人GNAO1蛋白(货号:rp367898),使用前于-80°C储存
- 无菌、无核酸酶水或推荐的复溶缓冲液(具体缓冲液组成请参阅产品数据表)
- 微量离心管(1.5 mL,推荐使用低蛋白吸附型)
- 经校准的微量移液器及无菌吸头
- 可达≥10,000 × g的微量离心机
- 冰盒或冷却模块,操作过程中将样品维持在4°C
- 蛋白定量试剂(如BCA或Bradford法试剂盒)
- 适用于下游应用的检测缓冲液(如GTPase活性检测缓冲液、免疫沉淀裂解缓冲液)
注意:操作前务必查阅随产品提供的批次特异性质量检验报告(CoA)和产品数据表,以确认规格参数。
复溶与分装操作步骤
请按照以下步骤仔细操作,完成重组人GNAO1蛋白的复溶与分装:
- 解冻:从-80°C取出小瓶,置于冰上在4°C缓慢解冻。勿在室温解冻或使用水浴,因快速温度变化可能损害蛋白活性。
- 离心:将小瓶短暂离心(低速约5–10秒),使管壁和瓶盖上的冻干材料或液体沉集至瓶底。
- 复溶:按产品数据表指定的体积,将无菌复溶缓冲液逐滴加入小瓶中。轻轻旋转或上下吹打使其溶解——切勿涡旋振荡,剧烈振荡可能导致蛋白变性。
- 平衡:将复溶蛋白置于冰上静置5–10分钟,确保完全溶解。
- 定量:以BSA为标准曲线,采用BCA法或Bradford法测定蛋白浓度,确认浓度符合预期。
- 分装:使用低蛋白吸附管将复溶蛋白分装为单次用量,以减少吸附损失并避免反复冻融。
- 分装储存:在液氮中快速冷冻分装样品,于-80°C储存。若1–2周内短期使用,可在4°C保存。
重要提示:反复冻融会显著降低蛋白活性。请根据每次实验的预期用量规划分装体积。
G蛋白信号检测应用指南
重组人GNAO1蛋白适用于多种研究G蛋白α亚基功能的生化和无细胞检测。典型应用包括:
- GTPase活性检测:GNAO1具有内在GTPase活性。可将该蛋白用于GTP水解检测,以表征基础活性或RGS蛋白及药理试剂的调节作用。建议通过预实验凭经验优化蛋白浓度。
- 蛋白质相互作用研究:GNAO1与Gβγ亚基、GPCR、RGS蛋白及效应分子相互作用。该重组蛋白可用于GST pull-down、共免疫沉淀(co-IP)或表面等离子共振(SPR)检测,以绘制相互作用界面图谱。
- 结构与生物物理研究:纯化蛋白可作为ELISA和Western blot验证实验中的参考标准品或抗原。
- 药物筛选:GNAO1是神经系统疾病研究的重要靶点。该重组蛋白可用于竞争性结合或基于活性的筛选平台。
优化说明:最适工作浓度因检测格式而异。请始终设置适当的阳性和阴性对照。起始浓度建议请参阅同行评审文献和产品数据表。
质量控制与故障排除
为确保实验可靠性,请纳入以下质量控制(QC)检查:
| 问题 | 可能原因 | 推荐措施 |
|---|---|---|
| 活性低或未检测到活性 | 因解冻不当或涡旋振荡导致蛋白变性 | 在冰上解冻;轻柔复溶;勿涡旋振荡 |
| 聚集或沉淀 | 冻融次数过多或缓冲液不兼容 | 使用单次分装;对照数据表核实缓冲液组成 |
| SDS-PAGE条带大小异常 | 降解或样品制备错误 | 使用新鲜分装样品;检查还原与非还原条件 |
| 实验间重复性差 | 复溶后蛋白浓度不稳定 | 使用前重新定量每份分装;标准化复溶体积 |
如需进一步技术支持,请联系阿拉丁科学技术支持团队,并提供货号rp367898及CoA上的批次号。
安全、废弃物处置与法规说明
安全:重组人GNAO1蛋白仅供研究使用(RUO),未经批准用于人体治疗、诊断或兽医用途。请按照所在机构关于重组蛋白的生物安全指南进行操作。佩戴适当的个人防护装备(PPE),包括手套和实验服。
废弃物处置:按照当地机构和政府关于生物材料的法规处置含蛋白废弃物。如机构生物安全规程要求,在处置前需采用适当方法(如高压灭菌或化学灭活)对蛋白废弃物进行灭活。
法规:本产品仅供研究用途。用户有责任遵守其所在司法管辖区内所有适用的地方、国家及国际法规,包括重组蛋白使用相关规定。
常见问题
重组人GNAO1蛋白的推荐复溶缓冲液是什么?
具体的复溶缓冲液和体积详见货号rp367898随附的产品数据表和批次特异性质量检验报告(CoA)。请始终遵循批次特异性说明,因配方可能有所不同。如未获得数据表,请联系阿拉丁科学技术支持团队。
重组人GNAO1蛋白能耐受多少次冻融循环?
为保持蛋白活性和完整性,强烈建议冷冻前制备单次分装以减少冻融次数。作为重组G蛋白亚基的通用最佳实践,反复冻融(通常超过2–3次)可能导致活性显著丧失和蛋白聚集。批次特异性指导请参阅产品数据表。
重组人GNAO1蛋白经过哪些下游检测的验证?
重组人GNAO1蛋白(rp367898)适用于GTPase活性检测、蛋白质相互作用研究(pull-down、co-IP、SPR)、ELISA及作为参考抗原的Western blot等应用。经验证的应用在产品数据表上确认;如需特定应用的技术指导,请联系阿拉丁科学。
GNAO1的生物学意义是什么?
GNAO1编码Go异三聚体G蛋白的α亚基,该亚基在神经系统中大量表达,是GPCR信号传导的关键介质。它在神经传递、神经元分化和离子通道调控中发挥关键作用。GNAO1突变与人类早发性癫痫和运动障碍相关,使其成为具有重要临床意义的研究靶点。
收到GNAO1蛋白后,如何确认其身份和纯度?
收货后,取少量样品进行SDS-PAGE电泳,将条带大小与CoA中标注的预测分子量进行比对,以验证蛋白身份和纯度。将观察到的纯度与CoA规格进行交叉核对。如需功能确认,建议使用GTPase活性检测或与已知相互作用蛋白的结合检测。若不立即使用,请立即将蛋白于-80°C储存。
参考文献
- Jiang M, Bajpayee NS. Molecular mechanisms of Go signaling. Neurosignals. 2009;17(1):23-41.
- Saitsu H, et al. De novo mutations in GNAO1 cause a severe neurological disorder with epilepsy, intellectual disability, and movement disorder. American Journal of Human Genetics. 2016.
- Gilman AG. G proteins: transducers of receptor-generated signals. Annual Review of Biochemistry. 1987;56:615-649.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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