重组人GORAB蛋白:生产与使用实验方案
重组人GORAB蛋白:生产与使用实验方案
Recombinant Human GORAB Protein是一种研究级重组蛋白,靶向高尔基体RAB GTPase结合蛋白GORAB,由Aladdin Scientific提供(货号:rp373957),支持高尔基体功能、囊泡转运及颅面和骨骼发育不良疾病分子机制的研究。
- 产品名称
- 重组人GORAB蛋白
- 货号
- rp373957
- 来源物种
- 人(智人)
- 蛋白靶标
- GORAB(高尔基体RAB GTPase结合蛋白;又称Scyl1BP1)
- 主要研究应用
- 蛋白相互作用研究、功能检测、蛋白质印迹、ELISA、细胞生物学研究
- 相关疾病领域
- 老年性骨发育不良(Geroderma osteodysplastica)、颅面及骨骼发育不良
背景:GORAB蛋白生物学
GORAB(高尔基体RAB GTPase结合蛋白),又称Scyl1BP1,是人类GORAB基因编码的蛋白质。它主要定位于反式高尔基网络,在高尔基体稳态维持和囊泡转运中发挥重要作用。GORAB与RAB6及ARF4 GTPases相互作用,作为高尔基体相关膜转运协调过程中的关键支架蛋白。
GORAB功能缺失突变与老年性骨发育不良(GO)存在因果关联,该疾病是一种罕见的常染色体隐性遗传结缔组织病,以皮肤皱褶、骨质疏松和颅面异常为特征。因此,GORAB功能研究与理解高尔基体生物学、细胞外基质分泌及骨骼发育不良综合征发病机制密切相关。
复溶实验方案
按照以下步骤对重组人GORAB蛋白(rp373957)进行复溶,以备实验使用:
- 平衡:开封前,将小瓶在室温下平衡10–15分钟。请勿将冻干蛋白暴露于直接热源。
- 复溶缓冲液:用无菌去离子水或适当缓冲液(如PBS,pH 7.4)复溶冻干蛋白,达到所需工作浓度。轻轻旋转小瓶,切勿剧烈涡旋。
- 离心:开封前将小瓶短暂离心(如低速离心5–10秒),以收集附着在瓶盖和瓶壁上的冻干物料。
- 完全溶解:加入缓冲液后,在室温下静置5分钟,确保完全溶解后再使用。
注意:具体推荐复溶体积和浓度请参阅产品数据表,相关数值因批次而异。
储存与稳定性指南
妥善储存对于维持重组人GORAB蛋白的活性和完整性至关重要:
- 冻干形式:收到后在–20°C或–80°C下储存。避免反复冻融,因为这会损害蛋白质的完整性和活性。
- 复溶后的蛋白:短期使用(1周以内),将分装样品储存于4°C。长期储存时,制备单次使用分装样品并储存于–80°C。
- 载体蛋白:在复溶缓冲液中添加载体蛋白(如0.1% BSA,牛血清白蛋白)可增强稳定性,尤其是在蛋白浓度较低时。使用前请验证其与下游检测方法的兼容性。
- 避免:反复冻融、长时间暴露于室温,以及在存在温度循环的无霜冰柜中储存。
请参阅产品专属数据表,获取货号rp373957的确认稳定性数据和推荐储存条件。
实验应用
重组人GORAB蛋白(rp373957)适用于多种体外研究应用,包括但不限于:
- 蛋白质-蛋白质相互作用研究:用于下拉实验、共免疫沉淀验证或表面等离子体共振(SPR),表征GORAB与RAB GTPases或其他结合伴侣的相互作用。
- 蛋白质印迹(WB)标准品:作为阳性对照或分子量标准,用于验证免疫印迹实验中的抗GORAB抗体。
- ELISA开发:作为夹心法或竞争法ELISA格式中的标准品或捕获抗原,用于定量生物样品中的GORAB。
- 功能/酶学检测:研究GORAB在高尔基体转运重建系统或需要纯化组分的无细胞检测中的作用。
- 抗体生产与验证:用作免疫原或验证试剂,用于产生和检测抗GORAB抗体。
根据具体实验系统的不同,可能需要对蛋白质浓度、缓冲液条件和检测格式进行优化。
质量、安全及操作注意事项
质量:Aladdin Scientific生产的重组人GORAB蛋白在受控条件下生产,并经质量控制检测。纯度、浓度和活性数据在批次专属分析证书(CoA)中提供。研究人员在使用前应查阅CoA以确认规格参数。
安全:本产品仅供研究使用(RUO),未获准用于人或动物的诊断或治疗。操作时遵循标准实验室安全规程。穿戴适当的个人防护装备(PPE),包括手套和实验室外套。尽管该重组蛋白在标准实验室条件下不被归类为危险品,仍应遵循所在机构的生物安全指南。
操作:操作过程中尽量减少在室温下的暴露时间。制备分装样品时使用无菌技术,防止微生物污染导致蛋白质质量下降。按照所在机构的废物处理法规处置任何未使用的材料。
常见问题
GORAB蛋白是什么,为什么在研究中重要?
GORAB(高尔基体RAB GTPase结合蛋白)是定位于反式高尔基网络的支架蛋白,通过与RAB6和ARF4 GTPases相互作用来协调囊泡转运。其重要性在于GORAB功能缺失突变导致老年性骨发育不良,这是一种罕见的骨骼和结缔组织疾病,使其成为高尔基体生物学和罕见病机制研究的关键靶点。
如何复溶重组人GORAB蛋白(rp373957)?
开封前将小瓶平衡至室温,然后用无菌去离子水或PBS(pH 7.4)将冻干蛋白复溶至所需工作浓度。轻轻旋转混合,切勿涡旋,静置5分钟待完全溶解。请务必查阅批次专属数据表以获取推荐复溶体积。
该重组蛋白的推荐储存条件是什么?
收到后将冻干蛋白储存于–20°C或–80°C。复溶后,短期分装样品可在4°C储存最长一周,或制备单次使用分装样品在–80°C长期储存。避免反复冻融,因为这会降低蛋白质活性和完整性。
重组人GORAB蛋白经过验证适用于哪些实验应用?
重组人GORAB蛋白(rp373957)适用于蛋白质-蛋白质相互作用研究(如下拉实验、SPR)、蛋白质印迹阳性对照或标准品、ELISA开发、功能性无细胞检测,以及抗体生产与验证。具体验证数据见产品数据表和分析证书。
重组人GORAB蛋白适合临床或诊断用途吗?
不适合。本产品仅供研究使用(RUO),不适用于也未获准用于人或动物的诊断、治疗或临床应用。研究人员使用本试剂时必须遵守所在机构的生物安全和伦理指南。
参考文献
- Hennies HC, et al. Gerodermia osteodysplastica is caused by mutations in SCYL1BP1, a Rab-6 interacting golgin. Nature Genetics. 2008.
- Witkos TM, Lowe M. The Golgin Family of Proteins. Biochemistry. 2015.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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