重组人GPR158蛋白:制备与使用实验方案
重组人GPR158蛋白:制备与使用实验方案
Recombinant Human GPR158 Protein是孤儿G蛋白偶联受体GPR158的纯化重组形式,专为结合实验、结构研究及GPCR相关药物发现研究而制备。
- 产品名称
- 重组人GPR158蛋白
- 货号
- rp368052
- 蛋白家族
- C类G蛋白偶联受体(GPCR),孤儿受体
- 物种来源
- 人(智人)
- 推荐储存条件
- -80°C长期储存;避免反复冻融
- 供应商参考编号
- absea#PQ-843
GPR158概述及研究意义
GPR158是C类G蛋白偶联受体(GPCR)超家族的成员,被归类为孤儿受体,即其内源性配体尚未被明确鉴定。该受体主要在中枢神经系统中表达,在小脑、前额叶皮层和海马体中均有较高表达水平。新兴研究表明GPR158参与情绪调节、应激反应,并可能与抑郁症等神经精神疾病相关。由于其选择性神经表达模式,该受体已被视为开发新型治疗药物的候选靶点。
重组人GPR158蛋白(rp368052)使研究人员能够在不依赖内源性表达系统的情况下研究受体结构、筛选潜在配体并进行生化表征实验。本产品仅供体外研究使用。
复溶操作规程
请按照以下步骤正确复溶重组人GPR158蛋白:
- 平衡温度:开瓶前,将小瓶在室温下平衡10–15分钟,勿加热。
- 离心:短暂离心小瓶(1,000–2,000 × g,30秒),使可能附着于瓶盖或瓶壁的冻干物沉降。
- 复溶缓冲液:用无菌去离子水或适当的生理缓冲液(如PBS,pH 7.4)将蛋白复溶至工作浓度。请参阅质量检验报告(CoA)获取供应商推荐的复溶体积和终浓度。
- 轻柔混匀:轻轻旋转或用移液器混匀,勿涡旋,以免蛋白变性。
- 载体蛋白(可选):为提高长期稳定性,尤其在低蛋白浓度条件下,建议在复溶缓冲液中加入0.1% BSA(牛血清白蛋白)作为载体蛋白。
注意:请务必查阅产品专属CoA(absea#PQ-843)获取批次特异性复溶说明,因不同批次规格可能有所差异。
储存与操作指南
妥善储存对维持重组人GPR158蛋白的生物活性和结构完整性至关重要:
- 短期储存(≤1周):复溶后在4°C条件下保存。
- 长期储存:将复溶蛋白分装为单次用量,于-80°C储存,以防止反复冻融导致的降解。
- 避免反复冻融:每次冻融循环均可降低蛋白活性,请按单次实验用量分装。
- 冻干原液:未开封的冻干蛋白应按产品标签和CoA规定条件储存,通常为-20°C或-80°C。
- 无菌操作:在无菌条件下处理复溶蛋白,防止微生物污染。
如发现蛋白出现聚集、浑浊或污染迹象,应及时丢弃未使用的蛋白。
推荐实验应用
重组人GPR158蛋白(rp368052)适用于以下研究应用:
- 配体结合实验:利用GPR158蛋白筛选小分子库或多肽文库中的潜在受体配体,支持孤儿受体去孤儿化研究。
- 蛋白质-蛋白质相互作用研究:研究GPR158与胞内信号转导伴侣(如G蛋白或支架蛋白,例如RGS7复合物组分)之间的相互作用。
- 结构生物学:可用作抗体制备的抗原,或作为冷冻电镜和X射线晶体学研究中解析GPR158结构的实验组分。
- ELISA与蛋白质印迹(作为抗原/标准品):可用作免疫分析方法开发与验证中的蛋白标准品或阳性对照。
- 药物发现:支持以GPR158为靶点的新型中枢神经系统药物的高通量筛选活动。
重要提示:请针对每种具体应用通过实验优化分析条件(蛋白浓度、缓冲液组成、孵育时间和温度)。本产品仅供研究使用(RUO),不适用于诊断或治疗目的。
质量控制与故障排查
质量控制:每批次重组人GPR158蛋白在发货前均经过纯度和鉴别检测。请参阅质量检验报告(CoA,absea#PQ-843)获取批次特异性数据,包括纯度评估(通常采用SDS-PAGE)、鉴别确认及内毒素水平(如适用)。
常见问题故障排查:
- 蛋白聚集:若观察到沉淀,低速离心溶液(500–1,000 × g,5分钟,4°C)后使用上清液。聚集可能由不当浓度冻存或缺乏载体蛋白引起。
- 活性丧失:核实储存条件,确认冻融次数已降至最低。确保复溶缓冲液适当且新鲜配制。
- 结合实验信号偏低:优化蛋白包被浓度、孵育温度和时间。确认检测试剂和实验方案与所用蛋白标签或天然形式相容。
- 污染:如怀疑微生物污染,请丢弃该小瓶并联系Aladdin Scientific技术支持。
如需进一步技术支持,请联系Aladdin Scientific客户支持,并提供货号rp368052及CoA上的批次号。
常见问题
重组人GPR158蛋白(rp368052)采用何种表达系统生产?
rp368052所使用的具体表达系统应通过查阅质量检验报告(CoA,absea#PQ-843)或联系Aladdin Scientific技术支持进行确认。膜相关GPCR常用的表达系统包括哺乳动物细胞表达(如HEK293)或昆虫细胞系统(如Sf9),这些系统能更好地保留与GPCR功能相关的翻译后修饰。
重组人GPR158蛋白能否用于细胞功能实验?
可溶性或部分纯化形式的重组GPR158蛋白主要用于生化实验,如配体结合、蛋白质相互作用研究和免疫分析。对于检测下游信号传导(如cAMP、钙流量)的细胞功能实验,通常优先选择在适当细胞系中过表达GPR158。请联系Aladdin Scientific技术支持,确认rp368052的形式及其对特定实验方案的适用性。
如何处理重组人GPR158蛋白以防止活性丧失?
为保持活性,请在开瓶前将小瓶平衡至室温,轻柔复溶勿涡旋,并立即分装为单次用量储存于-80°C。避免反复冻融,低浓度操作时考虑添加0.1% BSA作为载体蛋白。请务必遵循rp368052 CoA中提供的具体操作说明。
重组人GPR158蛋白(rp368052)是否适合用作ELISA标准品?
重组蛋白可用作ELISA实验中的标准品或阳性对照,前提是该蛋白能被实验中使用的检测抗体识别。请通过查阅CoA确认rp368052与您的抗体对的相容性,如有需要,可联系Aladdin Scientific技术支持获取抗原-抗体相容性方面的指导。
参考文献
- Orlandi C, et al. GPR158 mediates RGS7 function and interacts with RGS7-Gβ5 complexes. Research describing GPR158's interaction with RGS7 scaffolding complexes and its role in neuronal signaling.
- Hauser AS, et al. Pharmacogenomics of GPCR Drug Targets. Cell. 2017. Review covering the landscape of GPCR targets including orphan receptors such as GPR158.
- Aladdin Scientific Product Page: Recombinant Human GPR158 Protein, SKU rp368052. Certificate of Analysis absea#PQ-843.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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