重组人GPRASP1蛋白:实验方案与使用指南
重组人GPRASP1蛋白:实验方案与使用指南
Recombinant Human GPRASP1 Protein是一种研究级重组蛋白,专为支持人类细胞生物学中G蛋白偶联受体(GPCR)下调、受体内化及溶酶体分选通路的研究而设计。
- 产品名称
- 重组人GPRASP1蛋白
- 货号
- rp372286
- 靶蛋白
- GPRASP1(G蛋白偶联受体相关分选蛋白1)
- 物种来源
- 人源
- 应用
- 体外功能实验、蛋白相互作用研究、GPCR下调研究
- 储存建议
- 储存于-20°C或-80°C;避免反复冻融
背景:GPRASP1与GPCR调控
GPRASP1(G蛋白偶联受体相关分选蛋白1),又称GASP-1,是GASP蛋白家族成员,参与G蛋白偶联受体(GPCR)的内吞后转运及溶酶体降解过程。在激动剂诱导的内化发生后,GPCR或被分选回质膜循环利用,或被导向溶酶体降解。GPRASP1与多种GPCR的C末端相互作用,促进其靶向溶酶体,从而介导受体的持续下调。
GPRASP1已在阿片受体调控、多巴胺受体转运及大麻素受体下调等研究中得到广泛研究,与成瘾研究、疼痛生物学及神经精神疾病模型密切相关。重组人GPRASP1蛋白使研究人员能够在明确的生化体系中深入研究上述相互作用。
复溶操作方案
在使用前,请按以下步骤对重组人GPRASP1蛋白进行复溶:
- 离心:开盖前短暂离心小瓶(1,000–2,000 × g,30秒),使冻干物集中于管底。
- 复溶缓冲液:用无菌去离子水或产品说明书推荐的缓冲液(如pH 7.4的PBS,若需提高稳定性可加入0.1% BSA等载体蛋白)复溶蛋白。按说明书指定体积加入,以达到所需储备浓度。
- 轻柔混匀:通过轻柔吸打或温和涡旋混匀。切勿剧烈涡旋,以免引起蛋白质变性或聚集。
- 孵育:将溶液在室温下静置5–10分钟,确保完全溶解。
- 分装:将复溶后的蛋白分装为单次使用的小份,以避免反复冻融对蛋白完整性和活性的影响。
注意:请始终参阅具体批次的质检证书(CoA),以获取该批次的复溶体积和浓度信息。
储存与稳定性指南
正确的储存方式对于维持重组人GPRASP1蛋白的活性和完整性至关重要:
- 短期储存(不超过1个月):若复溶后的蛋白将在一个月内使用,可储存于4°C。加入载体蛋白(如0.1% BSA)有助于防止蛋白质吸附于管壁,并在短期冷藏期间提高稳定性。
- 长期储存:超过一个月的储存,应将蛋白分装后储存于-20°C,最好是-80°C。在-80°C下正确储存时,蛋白从收货之日起预计可稳定保存长达12个月。
- 避免冻融循环:每次冻融循环均可能降低蛋白活性,建议使用单次使用分装品以防止反复解冻。
- 冻干形式:若产品以冻干形式提供,请在复溶前储存于-20°C。冻干蛋白在长期储存期间通常比复溶形式更为稳定。
免责声明:具体稳定性数据应以产品说明书和质检证书(CoA)为准。针对批次特异性稳定性声明,已添加审核标记。
实验应用与操作提示
重组人GPRASP1蛋白适用于多种研究应用:
- 蛋白-蛋白相互作用实验:GPRASP1可用于pull-down实验、共免疫沉淀或表面等离子体共振(SPR)实验,以表征其与GPCR C末端结构域的相互作用。
- 生化表征:用于基于ELISA的结合研究或体外结合实验,以定位功能域。
- 无细胞系统:适用于作为无细胞转录/翻译体系或重组转运实验中的对照或功能组分。
- Western blot标准品:可作为针对GPRASP1的Western blot实验中的阳性对照或分子量标准。
操作提示:
- 操作蛋白时始终在冰上进行,以减少活性损失。
- 使用低吸附微量离心管,以降低蛋白对管壁的吸附。
- 若出现可见聚集体,使用前短暂离心。
- 根据实验方案和条件凭经验确定最佳工作浓度。
质量控制与验证
Aladdin Scientific的重组人GPRASP1蛋白(货号:rp372286)经过质量控制检测,以确保产品的一致性和可靠性:
- 纯度评估:通常在还原条件下通过SDS-PAGE评估纯度。请参阅产品质检证书(CoA)获取批次特异性纯度数据。
- 身份验证:可使用经验证的抗GPRASP1抗体通过Western blot确认蛋白身份。
- 内毒素检测:对内毒素水平进行测定,以确保适用于敏感的细胞实验。批次特异性内毒素水平请参见CoA。
- 功能活性:在适用情况下,通过相关结合或活性实验评估功能活性。具体功能数据应以产品说明书为准。
如需最准确、最新的质量控制数据,请始终参阅随每批产品提供的质检证书。如需更多信息或故障排除协助,请联系Aladdin Scientific技术支持。
常见问题
GPRASP1是什么?它在GPCR研究中有何重要意义?
GPRASP1(G蛋白偶联受体相关分选蛋白1)是一种通过促进GPCR的溶酶体降解(而非循环利用)来调控GPCR内吞后命运的蛋白质。它在受体持续下调中发挥关键作用,与阿片受体、多巴胺受体及大麻素受体生物学研究密切相关。
如何复溶重组人GPRASP1蛋白?
开盖前短暂离心小瓶,然后用无菌去离子水或推荐缓冲液(如含0.1% BSA的pH 7.4 PBS)按CoA指定体积复溶。轻柔混匀后,在室温静置5–10分钟,再分装并储存于-80°C。
重组人GPRASP1蛋白可以耐受多少次冻融循环?
作为通用最佳实践,重组蛋白应分装为单次使用量,以避免反复冻融。每次冻融均可能降低蛋白完整性和活性。建议每支分装品只使用一次,并丢弃剩余部分。
重组人GPRASP1蛋白经过验证可用于哪些应用?
重组人GPRASP1蛋白适用于蛋白-蛋白相互作用研究(pull-down、共免疫沉淀、SPR)、体外结合实验、作为Western blot阳性对照及无细胞系统实验。具体经验证的应用请以每批次产品说明书和CoA为准。
重组人GPRASP1蛋白可用于细胞实验吗?
GPRASP1主要用于生化和结合实验,其是否适用于细胞实验取决于内毒素水平和配方。请查阅CoA中的内毒素规格,若计划用于细胞实验,请咨询Aladdin Scientific技术支持。
参考文献
- Whistler JL et al. Modulation of postendocytic sorting of G protein-coupled receptors. Science. 2002;297(5581):615-620. doi:10.1126/science.1073308
- Martini L, Whistler JL. The role of mu opioid receptor desensitization and endocytosis in morphine tolerance and dependence. Curr Opin Neurobiol. 2007;17(3):308-313. doi:10.1016/j.conb.2007.04.001
- Tappe-Theodor A et al. A molecular basis of analgesic tolerance to cannabinoids. J Neurosci. 2007;27(15):4165-4177. doi:10.1523/JNEUROSCI.5648-06.2007
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