重组人GPSM1蛋白:特性与研究应用
重组人GPSM1蛋白:特性与研究应用
重组人GPSM1蛋白是一种研究级试剂,可帮助科学家深入探究G蛋白信号调节蛋白1调控Gα亚基活性、细胞极性及有丝分裂纺锤体定向的分子机制。
- 蛋白质名称
- G蛋白信号调节蛋白1(GPSM1)
- 别名
- AGS3、LGN
- 物种来源
- 人(智人)
- 蛋白质家族
- 含GoLoco基序/GPR结构域蛋白质家族
- 主要生物学功能
- 调节Gα亚基GTPase活性;调控细胞极性和有丝分裂纺锤体定向
- 产品编号
- rp375069
- 供应商参考编号
- absea#PP-8802
GPSM1是什么?为何重要?
G蛋白信号调节蛋白1(GPSM1),又称AGS3(G蛋白信号激活蛋白3)或LGN,是一种多功能支架蛋白,在异三聚体G蛋白信号转导中发挥核心作用。该蛋白具有两个主要结构域:N端四三十四肽重复(TPR)结构域,介导与NuMA、mInsc等伴侣蛋白的相互作用;C端含多个GoLoco(或GPR)基序,可选择性结合处于GDP结合(非活化)状态的Gα亚基。
GPSM1通过充当Gαi/o亚基的鸟嘌呤核苷酸解离抑制剂(GDI),稳定Gα的非活化GDP结合构象,从而有效调节G蛋白介导的下游信号传导的持续时间和强度。除经典GPCR信号传导外,GPSM1还被证实是细胞极性和不对称细胞分裂的关键调节因子,这些过程对组织发育、干细胞命运决定和神经祖细胞分化至关重要。
GPSM1功能失调与多种病理状态有关,使其成为肿瘤学、神经科学和发育生物学基础研究的重要靶点。重组形式的该蛋白可用于可控的生化和细胞实验,而这些实验若使用内源性蛋白制备物则难以实现。
重组人GPSM1蛋白的生化特性
重组人GPSM1蛋白(货号:rp375069)采用重组表达系统生产,所得蛋白可再现天然人GPSM1蛋白的功能特性。重组生产可保证批次间的高度一致性、明确的纯度水平,以及不含人源病原体污染——这些均是保证可靠实验结果的关键因素。
重组GPSM1的主要生化特性包括:通过GoLoco基序与GDP-Gαi亚基高亲和力结合、抑制GTP加载至Gαi,以及通过TPR结构域与细胞骨架相关蛋白相互作用。这些活性可通过标准生化实验进行评估,包括共免疫沉淀、与重组Gα亚基的pull-down实验,以及荧光法GTPase活性检测。
用户应参阅产品数据表(absea#PP-8802),获取批次特异性信息,包括分子量、SDS-PAGE纯度、内毒素水平、推荐储存条件及复溶方案。妥善操作和储存对于长期维持蛋白活性至关重要。
研究应用
重组人GPSM1蛋白适用于多学科的广泛研究应用:
- G蛋白信号传导研究:研究GPSM1 GoLoco基序对Gαi/o亚基的GDI活性,探究GPSM1与Gβγ竞争结合Gα的相互作用,以及解析G蛋白激活循环的动态过程。
- 细胞极性与不对称细胞分裂:将重组GPSM1用作工具蛋白,研究调控有丝分裂纺锤体定位和皮质力产生的皮质NuMA–LGN–Gαi三元复合物的组装。
- 蛋白质-蛋白质相互作用检测:在pull-down、SPR(表面等离子共振)或ITC(等温滴定量热法)实验中使用重组GPSM1,绘制其与Gα亚基、NuMA或mInsc的结合界面图谱。
- 药物发现与筛选:作为生化工具筛选能破坏GPSM1–Gαi或GPSM1–NuMA相互作用的小分子或肽类化合物,具有潜在的肿瘤学治疗相关性。
- 结构生物学:用作抗体制备的抗原,或作为多蛋白复合物结构研究(如冷冻电镜、X射线晶体学)的组成成分。
- Western Blot与ELISA标准品:用作针对GPSM1免疫检测实验的阳性对照或标准品。
操作、储存及质量注意事项
为最大限度地提高重组人GPSM1蛋白的性能并延长保质期,研究人员应遵循以下通用最佳操作规范,并以产品数据表中的批次特异性信息为准:
- 储存:重组蛋白通常储存于–20°C或–80°C,保存于含载体蛋白(如BSA)和冻结保护剂(如甘油)的适当缓冲液中,以防止冻融变性。请务必参阅产品数据表获取批次特异性储存说明。
- 复溶:若以冻干形式供应,应使用推荐体积的无菌超纯水或指定缓冲液复溶。开瓶前使样品瓶恢复至室温,并用移液器轻柔混匀,避免涡旋振荡。
- 分装:为避免反复冻融循环损害蛋白完整性和活性,首次使用时应分装为单次使用量。
- 质量控制:每批重组蛋白均应评估纯度(SDS-PAGE)、鉴定(Western blot或质谱)及生物活性(经验证的功能性实验)。若用于细胞实验,还应评估内毒素水平。
- 工作浓度:针对每种特定实验格式,通过实验确定GPSM1的最佳浓度。建议在大规模研究前进行多浓度梯度预实验。
有关纯度百分比、活性单位、内毒素规格及配方详情等批次特异性数据,用户必须参阅随产品附带的质量检测报告(CoA),或向Aladdin Scientific索取。
常见问题
GPSM1的生物学功能是什么?
GPSM1(又称AGS3或LGN)主要作为Gαi/o亚基的鸟嘌呤核苷酸解离抑制剂(GDI),稳定其非活化的GDP结合状态,从而调节G蛋白信号传导。此外,GPSM1通过其TPR结构域与NuMA等伴侣蛋白相互作用,调控有丝分裂纺锤体定位、细胞极性和不对称细胞分裂。
重组人GPSM1蛋白适用于哪些实验?
重组人GPSM1蛋白适用于多种实验,包括pull-down和共免疫沉淀实验、表面等离子共振(SPR)、等温滴定量热法(ITC)、GTPase活性检测、Western blot阳性对照、ELISA及结构生物学应用。也可用于针对GPSM1蛋白-蛋白相互作用的药物筛选研究。
如何储存重组人GPSM1蛋白以维持其活性?
通常,重组蛋白应储存于–20°C或–80°C,分装以避免反复冻融,并保存于含甘油等冻结保护剂的缓冲液中。但用户必须参阅货号rp375069随附的批次特异性产品数据表和质量检测报告(CoA),以获取精确的储存和复溶说明。
GPSM1、AGS3和LGN有何区别?
GPSM1、AGS3和LGN均指由人类GPSM1基因编码的同一蛋白质。AGS3(G蛋白信号激活蛋白3)是根据其在酵母筛选中的功能发现而命名的原始名称,LGN(富含亮氨酸-甘氨酸-天冬酰胺重复序列蛋白)则根据其结构特征命名。GPSM1是目前官方的HGNC基因符号。
重组人GPSM1蛋白可用于细胞实验吗?
重组人GPSM1蛋白在细胞实验中具有潜在应用价值,例如作为胞外刺激物或经胞内递送后使用,但其主要用途在于无细胞生化实验。若用于细胞体系,内毒素水平和蛋白纯度是需重点核实的关键参数。用户应查阅CoA了解内毒素规格,并通过实验优化实验条件。
参考文献
- Blumer JB, Cismowski MJ, Sato M, Lanier SM. AGS proteins: receptor-independent activators of G-protein signaling. Trends Pharmacol Sci. 2005;26(9):470-476. doi:10.1016/j.tips.2005.07.003
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- Du Q, Bhatt P, Li S, Bhatt P. LGN blocks the ability of NuMA to coordinate proper spindle orientation. Curr Biol. 2001.
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