重组人GRAMD1B蛋白:研究指南
重组人GRAMD1B蛋白:研究指南
Recombinant Human GRAMD1B Protein是一种研究级重组蛋白,可帮助科学家探究含GRAM结构域蛋白1B在细胞内胆固醇感应及膜接触位点脂质转运中的功能。
- 产品名称
- 重组人GRAMD1B蛋白
- 货号
- rp366660
- 蛋白家族
- GRAMD1家族;含GRAM结构域及StART样脂质转运结构域
- 主要研究领域
- 胆固醇稳态、脂质转运、膜接触位点生物学
- 推荐储存条件
- -80°C长期储存;避免反复冻融
- 物种
- 人(智人)
GRAMD1B是什么?为何重要?
GRAMD1B(含GRAM结构域蛋白1B)是GRAMD1蛋白家族的成员,定位于内质网(ER)膜。它含有N端GRAM结构域——一种感应质膜上可访问胆固醇的脂质结合模块——以及负责非囊泡胆固醇转运的C端StART样(类固醇生成急性调节蛋白相关脂质转运)结构域。
GRAMD1B在ER–质膜(ER–PM)接触位点发挥功能,与GRAMD1家族其他成员(GRAMD1A和GRAMD1C)协作,将质膜内叶多余的胆固醇提取并重新分配至内质网。该过程对胆固醇稳态至关重要,GRAMD1蛋白的失调与心血管疾病、神经系统疾病及肿瘤生物学中细胞脂质平衡的改变有关。
在受控实验室条件下生产的重组人GRAMD1B蛋白,为研究人员提供了一种可靠工具,适用于体外生化实验、结构研究、蛋白-脂质相互作用分析及抗体验证。
复溶与储存指南
复溶:使用前,短暂离心小瓶,使冻干材料集中于管底。用无菌超纯水或适当的生理缓冲液(如PBS,pH 7.4)将蛋白复溶至0.1–1.0 mg/mL的储存浓度。轻轻吸打混匀;勿涡旋,因剪切力可导致蛋白变性。使用前在室温下平衡10–15分钟。
储存条件:收到后将冻干蛋白储存于-20°C或-80°C。复溶后,分装为单次使用量,避免反复冻融导致活性降低。复溶蛋白在4°C下可稳定保存至多1周;加入载体蛋白(如0.1% BSA)作为稳定剂后,可在-80°C下长期保存。
注意:货号rp366660的实际储存条件和稳定性数据应以随货提供的质量检测报告(CoA)为准。
实验应用
重组人GRAMD1B蛋白适用于多种体外研究应用:
- 脂质转运实验:用于研究供体与受体膜囊泡之间的非囊泡胆固醇转运,可采用荧光或放射性标记实验格式。
- 蛋白-蛋白相互作用研究:用于共免疫沉淀、pull-down或表面等离子共振(SPR)实验,以图谱化与其他GRAMD1家族成员、OSBP相关蛋白或VAPA/VAPB锚定蛋白的相互作用。
- 结构生物学:可作为抗体生产的抗原,或作为聚焦于GRAM或StART样结构域的X射线晶体学和冷冻电镜研究的底物。
- ELISA及蛋白质印迹标准品:用作检测内源性GRAMD1B免疫实验的阳性对照或定量标准品。
- 脂质探针结合实验:使用荧光标记脂质探针,在板式或脂质体结合格式中表征胆固醇或磷酸肌醇结合亲和力。
研究人员应针对每种应用,通过实验优化蛋白浓度和缓冲液条件。
质量、纯度与验证
Aladdin Scientific的重组人GRAMD1B蛋白(rp366660)在严格的质量控制流程下生产。研究人员应查阅每批次的质量检测报告(CoA),其中记录了纯度(通常通过SDS-PAGE和/或HPLC评估)、身份确认(如质谱或蛋白质印迹)、内毒素水平(LAL法)以及适用时的生物活性。
需从CoA确认的关键质量参数:
- 纯度(%):通常通过还原性SDS-PAGE评估,≥90%
- 内毒素水平:通常<1.0 EU/µg(对细胞实验尤为重要)
- 宿主表达系统(如大肠杆菌、杆状病毒/昆虫细胞或HEK293哺乳动物细胞)
- 标签信息(如His标签、GST标签)及标签位置(N端或C端)
注意:本文件未确认rp366660的具体纯度数值、内毒素水平、表达系统和标签详情,必须通过官方CoA或联系Aladdin Scientific技术支持进行核实。
订购信息与技术支持
重组人GRAMD1B蛋白可通过Aladdin Scientific以货号rp366660订购。如需下单,请联系您当地的Aladdin Scientific代表,使用在线订购平台,或直接引用货号提交采购订单。
如有关于复溶方案、实验优化或与特定实验系统兼容性的技术问题,请联系Aladdin Scientific技术支持团队。如需定制配方或大批量采购,可按需申请。
在发表文章和内部报告中,请务必注明CoA上的批次号,以确保实验数据的完整可追溯性和可重复性。
常见问题
重组人GRAMD1B蛋白推荐使用哪种复溶缓冲液?
我们建议使用无菌超纯水或PBS(pH 7.4)将蛋白复溶至0.1–1.0 mg/mL。轻轻吸打混匀,使用前在室温下平衡10–15分钟。请以批次特定的CoA确认推荐缓冲液,因最佳条件可能因配方而异。
如何储存复溶后的GRAMD1B蛋白以保持其活性?
复溶后立即将蛋白分装为单次使用量,并储存于-80°C。添加载体蛋白(如0.1% BSA)可提高稳定性。避免反复冻融,因多次冻融会显著降低蛋白活性和完整性。
重组人GRAMD1B蛋白适用于细胞实验吗?
该蛋白可能适用于某些细胞实验;但在用于细胞培养实验前,必须从CoA核实内毒素水平和配方详情。低内毒素水平(通常<1.0 EU/µg)对于避免敏感细胞实验中产生干扰性炎症反应至关重要。
rp366660使用何种表达系统生产?
rp366660的具体表达系统(如大肠杆菌、昆虫细胞或哺乳动物HEK293细胞)在公开产品说明中未予确认。请参阅质量检测报告或联系Aladdin Scientific技术支持,以获取已确认的表达系统和标签详情。
GRAMD1B蛋白能否用作ELISA中定量内源性GRAMD1B的标准品?
是的,重组GRAMD1B蛋白可作为ELISA格式中的定量标准品或阳性对照,前提是检测抗体能识别重组形式。研究人员在建立标准曲线前,应验证重组蛋白与抗体之间的交叉反应性。
参考文献
- Naito T, et al. Movement of accessible plasma membrane cholesterol by the GRAMD1 lipid transfer protein complex. eLife. 2019.
- Besprozvannaya M, et al. GRAM domain proteins specialize functionally distinct ER-PM contact sites in human cells. eLife. 2018.
- Laraia L, et al. The cholesterol transfer protein GRAMD1A regulates accessible cholesterol levels in the plasma membrane. Nature Chemical Biology. 2019.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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