重组人IFT52蛋白:研究指南与应用
重组人IFT52蛋白:研究指南与应用
Recombinant Human IFT52 Protein是IFT-B鞭毛内转运复合体的关键组成部分,可帮助研究人员在体外研究纤毛组装、纤毛病发病机制及IFT复合体相互作用。
- 产品名称
- 重组人IFT52蛋白
- 货号
- rp374648
- 基因名称
- IFT52(又称NGD5、BSAP3)
- 所属复合体
- IFT-B复合体(鞭毛内转运B复合体)
- 主要功能
- 介导顺向鞭毛内转运,对纤毛的组装与维持至关重要
- 研究意义
- 与纤毛病(包括Bardet-Biedl综合征及相关疾病)密切相关
- 供应商
- Aladdin Scientific
蛋白背景与生物学功能
IFT52由IFT52基因编码(在部分数据库中亦称NGD5和BSAP3),是鞭毛内转运(IFT)机器中IFT-B亚复合体的进化保守组分。鞭毛内转运是指多蛋白颗粒沿纤毛和鞭毛轴丝的双向运动,该过程对这些细胞器的组装、维持及感觉功能不可或缺。
在IFT-B复合体中,IFT52发挥核心支架作用,与多个IFT-B核心组分(包括IFT88、IFT74和IFT46)相互作用。这种相互作用网络稳定了IFT-B复合体,并确保纤毛货物在由驱动蛋白-2马达驱动的顺向(基体至顶端)转运过程中正确锚定。在莱茵衣藻、秀丽隐杆线虫和小鼠等模式生物中进行的功能缺失研究表明,IFT52缺失会导致严重的纤毛发生缺陷,揭示了其在纤毛生物学中不可替代的作用。
重组人IFT52蛋白(货号:rp374648)为研究人员提供了明确定义的重组蛋白来源,支持生化表征、蛋白质-蛋白质相互作用研究及IFT复合体生物学背景下的功能分析。
研究应用
重组人IFT52蛋白适用于多种体外研究应用:
- 蛋白质-蛋白质相互作用研究:IFT52可作为pull-down实验、共免疫沉淀实验及表面等离子体共振(SPR)分析中的诱饵蛋白或猎物蛋白,用于绘制IFT-B复合体相互作用网络图谱。
- 生化重建:可在体外重建部分或完整的IFT-B亚复合体,以研究复合体组装动力学和化学计量关系。
- 抗体验证:作为阳性对照抗原,用于验证抗IFT52抗体在Western印迹、ELISA和免疫荧光实验中的特异性。
- 结构生物学:可作为冷冻电镜(cryo-EM)或X射线晶体学研究的组成部分,用于解析IFT复合体的三维结构。
- 纤毛病研究:支持对IFT复合体功能障碍相关纤毛病(如Bardet-Biedl综合征、Joubert综合征和肾消耗病)发病机制的研究。
- 药物筛选:可用于结合或活性分析,以鉴定调节IFT复合体组装或功能的小分子化合物。
操作、复溶与储存指南
为维持重组人IFT52蛋白的活性与完整性,请遵循以下最佳操作规范:
- 初始接收:收到产品后,开封前短暂离心以汇集管内内容物。检查小瓶完整性,并核对批号与质量检验报告(CoA)是否一致。
- 复溶:若为冻干形式,请按产品数据表推荐的缓冲液进行复溶。使用无菌、无核酸酶的水或适配的生理缓冲液(如含载体蛋白的PBS,例如0.1% BSA)以减少吸附损失。轻柔平衡溶液,避免剧烈涡旋。
- 工作分装:复溶后立即制备单次使用分装,以避免反复冻融导致蛋白聚集和活性损失。
- 储存温度:按CoA规定将冻干蛋白储存于–20°C或–80°C。复溶蛋白长期保存应置于–80°C,短期使用(通常1周内)可置于4°C。
- 冻融次数:将冻融次数降至最低(理想情况下不超过三次),以保持蛋白完整性。
- 载体蛋白:建议在稀释工作液时添加载体蛋白(如0.1% BSA),以减少蛋白对管壁的非特异性吸附,并在低浓度下维持蛋白稳定性。
注意:请务必参阅货号rp374648附带的具体产品数据表和CoA,以获取准确的复溶体积、推荐缓冲液及确认的储存条件,因配方细节可能因批次而异。
质量、纯度与验证
Aladdin Scientific的重组人IFT52蛋白在受控条件下采用重组表达系统生产。需在CoA和数据表中重点审核的关键质量属性包括:
- 纯度:纯度通常通过SDS-PAGE和/或HPLC进行评估。请查阅货号rp374648具体批次CoA以获取经确认的纯度百分比。
- 身份确认:蛋白质身份应通过质谱或N端测序进行确认,相关信息记录于CoA中。
- 生物活性:在适用情况下,可通过与已知IFT-B相互作用伙伴的结合实验确认功能活性。活性规格请参阅产品数据表。
- 内毒素水平:用于细胞实验时,请核查CoA中的内毒素含量(通常通过LAL法测定),以确保其在可接受范围内。
- 无菌性:若蛋白将用于细胞培养应用,请通过相关CoA文件确认无菌规格。
强烈建议研究人员在首次使用每个新批次时进行内部阳性对照和分子量验证(例如使用经验证的抗IFT52抗体进行Western印迹),以确认预期性能。
法规状态与预期用途
重组人IFT52蛋白(货号:rp374648)由Aladdin Scientific提供,严格限于体外研究用途。本产品不适用于人类或动物的诊断、治疗或临床用途,尚未经美国食品药品监督管理局(FDA)、欧洲药品管理局(EMA)或同等监管机构评估或批准用于任何临床应用。
用户有责任确保本产品的使用符合适用的地方、国家及机构法规,包括与重组蛋白相关的生物安全指南。操作蛋白时应佩戴适当的个人防护装备(PPE),废弃物处置应遵循机构危险生物材料处理规程。
如需进一步的法规或安全信息,请联系Aladdin Scientific索取安全数据表(SDS)。
常见问题
IFT52在纤毛组装中的生物学作用是什么?
IFT52是IFT-B复合体的重要结构组分,介导从纤毛基体至顶端的顺向鞭毛内转运。它与多个IFT-B核心蛋白(包括IFT88、IFT74和IFT46)相互作用,以稳定复合体并促进纤毛组装和维持所需的轴丝货物运输。在多种模式生物中,IFT52功能缺失会导致纤毛发生障碍。
重组人IFT52蛋白应如何储存以维持其活性?
冻干重组人IFT52蛋白应按质量检验报告规定储存于–20°C或–80°C。复溶后,制备单次使用分装,长期保存置于–80°C,短期使用(约一周内)可置于4°C。应严格减少反复冻融次数,以防止蛋白聚集和活性损失。
重组人IFT52蛋白(rp374648)经过验证适用于哪些应用?
本蛋白适用于多种体外应用,包括蛋白质-蛋白质相互作用研究(pull-down、共免疫沉淀、SPR)、IFT-B复合体的生化重建、抗体验证(Western印迹、ELISA、免疫荧光)、结构生物学实验(冷冻电镜、晶体学)以及纤毛病发病机制研究。请参阅产品数据表和CoA以获取特定批次经验证的应用信息。
重组人IFT52蛋白是否适用于临床或诊断用途?
不适用。重组人IFT52蛋白(rp374648)仅供体外研究使用,未经批准且不适用于人类或动物的诊断、治疗或临床应用。研究人员在使用本产品时必须遵守所有适用的机构及法规生物安全要求。
哪些纤毛病与IFT52功能障碍相关?
IFT52功能障碍与IFT-B复合体功能缺陷相关的纤毛病有关,包括Bardet-Biedl综合征、Joubert综合征及肾消耗病谱系疾病。这些疾病因IFT复合体破坏导致纤毛组装或信号传导受损而发生,使IFT52成为该疾病领域的重要研究靶点。
参考文献
- Taschner M, Bhogaraju S, Lorentzen E. Architecture and function of IFT complex proteins in ciliogenesis. Differentiation. 2012;83(2):S12-22. doi:10.1016/j.diff.2011.11.001
- Taschner M, Weber K, Mourao A, et al. Structural basis of outer dynein arm intraflagellar transport by the IFT-B complex. Nat Chem Biol. 2016;12(2):122-128. doi:10.1038/nchembio.1997
- Kozminski KG, Johnson KA, Forscher P, Rosenbaum JL. A motility in the eukaryotic flagellum unrelated to flagellar beating. Proc Natl Acad Sci USA. 1993;90(12):5519-5523. doi:10.1073/pnas.90.12.5519
- Hernandez-Hernandez V, Pravincumar P, Diaz-Font A, et al. Bardet-Biedl syndrome proteins control the cilia length through regulation of actin polymerization. Hum Mol Genet. 2013;22(19):3858-3868. doi:10.1093/hmg/ddt241
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