重组人IFT74蛋白:功能与研究应用
重组人IFT74蛋白:功能与研究应用
Recombinant Human IFT74 Protein是鞭毛内运输B复合体的关键亚基,对于纤毛轴丝中货物的双向运输以及几乎所有脊椎动物细胞类型中纤毛的正常组装与维持不可或缺。
- 蛋白名称
- 重组人IFT74蛋白(鞭毛内运输蛋白74)
- 复合体归属
- IFT B复合体亚基
- 主要生物学功能
- 促进顺向鞭毛内运输及微管蛋白货物结合,支持纤毛组装
- 关键结合伴侣
- IFT81(在IFT-B复合体内形成微管蛋白结合模块)
- 疾病相关性
- 突变与纤毛病相关,包括Bardet–Biedl综合征及先天性心脏缺陷
- 研究应用
- 生化相互作用分析、结构研究、纤毛病疾病模型构建、抗体开发
- 产品货号
- rp374347
IFT74是什么?生物学背景与功能
鞭毛内运输蛋白74(IFT74)是IFT B复合体(IFT-B)的核心亚基,IFT-B是一种多蛋白组装体,负责协调纤毛轴丝上结构性和信号性组分的双向转运。纤毛和鞭毛是存在于大多数真核细胞表面的进化上高度保守的细胞器,执行机械感觉、化学感觉及运动功能,对发育和内稳态至关重要。
IFT74与IFT81形成紧密的异二聚体,该模块作为聚合和未聚合微管蛋白的主要接头蛋白,而微管蛋白是轴丝延伸所需的主要货物。IFT74的卷曲螺旋N端区域提供带正电荷的表面,与微管蛋白酸性C端尾部相互作用,使IFT机器能够将微管蛋白运输至生长中的纤毛顶端。IFT74功能缺失会导致纤毛严重截短或缺失,凸显了其在纤毛发生中不可或缺的作用。
除结构功能外,IFT74还参与Hedgehog(Hh)信号通路的调控,该通路在脊椎动物胚胎模式形成及组织内稳态过程中的正常信号传导高度依赖纤毛完整性。
疾病相关性:IFT74与纤毛病
纤毛病是一组由纤毛结构或功能缺陷引起的异质性遗传疾病。由于纤毛几乎存在于人体每种细胞类型中,纤毛病表型具有多效性,可包括视网膜营养不良、多囊肾病、内脏转位、骨骼发育不良及中枢神经系统畸形等。
IFT74的致病变体已在Bardet–Biedl综合征(BBS)患者中被报道,该纤毛病以视杆–视锥营养不良、肥胖、多指(趾)、肾脏异常和认知障碍为特征。此外,IFT74突变还与先天性心脏缺陷相关,与纤毛在胚胎发生过程中确立左右体轴不对称中的已知作用一致。
重组人IFT74蛋白使研究人员能够剖析疾病相关突变的分子后果、在体外重建IFT-B亚复合体,并开发和验证诊断抗体,从而加速对纤毛病发病机制及潜在治疗靶点的理解。
重组人IFT74蛋白的研究应用
重组人IFT74蛋白(货号:rp374347)支持多种体外及细胞实验方法:
- 蛋白质–蛋白质相互作用研究:IFT74可用于下拉实验、共免疫沉淀验证实验,以及表面等离子体共振(SPR)或生物层干涉(BLI)分析,以绘制IFT-B复合体内的结合界面,尤其是与IFT81及微管蛋白的相互作用。
- 结构生物学:重组蛋白适合用于冷冻电子显微镜(cryo-EM)或X射线晶体学研究,旨在解析IFT-B亚复合体及微管蛋白运输模块的结构。
- 抗体开发与验证:高纯度重组IFT74是制备单克隆或多克隆抗体的理想免疫原,也可作为ELISA包被抗原用于抗体效价测定。
- 功能与生化分析:用于微管蛋白结合实验,表征纤毛病患者点突变的影响,实现结构–功能剖析。
- 纤毛病疾病模型构建:支持开发纤毛组装缺陷的生化重建模型,用于药物筛选和机制研究。
产品规格与操作指南
重组人IFT74蛋白(货号:rp374347)采用重组表达系统生产,以确保实验间的一致性和可重复性。研究人员在使用前应查阅随附的批次质量检验报告(CoA),了解特定批次的纯度、浓度及内毒素数据。
一般操作建议:
- 按照产品说明书复溶冻干蛋白,通常使用中性pH生理缓冲液(如PBS)。
- 避免反复冻融;首次复溶时分装为单次用量。
- 按建议储存于–20 °C或–80 °C;勿存放于存在温度循环的无霜冰箱中。
- 开瓶前短暂离心,使内容物沉集于瓶底。
- 若工作浓度极低,可考虑加入载体蛋白(如0.1% BSA)以提高长期稳定性。
请务必参阅每批产品随附的特定产品说明书,以获取经验证的储存条件、活性数据及特定检测格式的建议工作浓度。
常见问题
IFT74在纤毛组装中的功能是什么?
IFT74是IFT B复合体的核心亚基,与IFT81形成异二聚体,在IFT机器中发挥主要微管蛋白运输模块的功能。该复合体结合未聚合的微管蛋白并将其运输至生长中的纤毛内,使IFT74对轴丝延伸和纤毛形成不可或缺。IFT74缺失会导致纤毛严重截短或缺失。
哪些疾病与IFT74突变相关?
IFT74的致病变体已与多种纤毛病相关,包括Bardet–Biedl综合征(表现为视网膜营养不良、肥胖、多指(趾)及肾脏异常)。IFT74突变还与先天性心脏缺陷有关,反映了纤毛在发育过程中确立左右体轴不对称中的作用。
重组人IFT74蛋白应如何储存以保持活性?
应按产品说明书规定将蛋白储存于–20 °C或–80 °C。首次复溶时应将蛋白分装为单次用量,以避免反复冻融。请务必查阅批次质量检验报告,了解特定批次的储存和稳定性建议。
重组人IFT74蛋白经验证适用于哪些实验检测?
重组人IFT74蛋白适用于蛋白质–蛋白质相互作用研究(下拉实验、SPR、BLI)、结构生物学应用(cryo-EM、晶体学)、抗体开发与ELISA,以及功能性微管蛋白结合实验。研究人员应查阅产品说明书和CoA,确认其适用于特定检测格式。
参考文献
- Bhogaraju S, Cajanek L, Fort C, Blisnick T, Weber K, Taschner M, Mizuno N, Lamla S, Bastin P, Nigg EA, Lorentzen E. Molecular basis of tubulin transport within the cilium by IFT74 and IFT81. Science. 2013;341(6149):1009–1012. doi:10.1126/science.1240985
- Taschner M, Weber K, Mourao A, Vetter M, Bhargava S, Lorentzen E. Intraflagellar transport proteins 172, 80, 57, 54, 38, and 20 form a stable tubulin-binding IFT-B2 complex. EMBO J. 2016;35(7):773–790. doi:10.15252/embj.201593164
- Lindstrand A, et al. Recurrent mosaic pathogenic variants in PIGA and IFT74 cause a multiple congenital anomalies syndrome. Hum Mutat. 2016;37(9):898–910.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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