重组人IGLON5蛋白:科研使用指南
重组人IGLON5蛋白:科研使用指南
Recombinant Human IGLON5 Protein是免疫球蛋白超家族IgLON亚家族的细胞粘附分子,因其在IGLON5相关tau蛋白病及自身免疫性脑病等神经系统疾病中的作用而受到广泛关注。
- 产品名称
- 重组人IGLON5蛋白
- 货号
- rp368300
- 蛋白家族
- IgLON亚家族,免疫球蛋白超家族
- 主要研究领域
- 神经科学、自身免疫性脑病、细胞粘附
- 推荐储存条件
- 储存于-80°C;避免反复冻融
- 典型应用
- ELISA、蛋白质印迹、细胞实验、抗体制备
蛋白背景与生物学意义
IGLON5(IgLON家族成员5)是一种以糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的细胞粘附分子,主要在中枢神经系统中表达。它属于免疫球蛋白超家族中的IgLON亚家族,具有多个免疫球蛋白样C2型结构域,介导同源和异源细胞间相互作用。
随着在表现为非快速眼动和快速眼动睡眠异态症、延髓功能障碍及潜在tau蛋白病的患者中发现抗IGLON5自身抗体,IGLON5获得了广泛的临床与科研关注。该疾病现被称为IGLON5相关tau蛋白病(或抗IGLON5病),揭示了该蛋白在自身免疫与神经退行性变交叉领域的重要性。
除自身免疫背景外,IGLON5在轴突导向、突触形成和神经回路发育中的作用也受到研究关注,使重组人IGLON5蛋白成为体外解析上述通路的重要工具。
复溶、操作及储存方案
复溶:若产品为冻干粉形式,开瓶前先短暂离心,使粘附于瓶盖或瓶壁的蛋白沉降。用无菌去离子水或适当缓冲液(如PBS,pH 7.4)复溶,终浓度为0.1–1.0 mg/mL。在室温下轻柔旋转平衡10–15分钟;切勿涡旋混匀,以免引起蛋白聚集或变性。
操作注意事项:使用低蛋白结合微量离心管和吸头,以减少吸附损失。若低浓度工作液需要载体蛋白,可补加0.1–0.5%分子生物学级BSA。
储存:将复溶蛋白分装为单次用量,避免反复冻融导致活性下降。长期储存(最长12个月)置于-80°C,短期使用(最长1个月)置于-20°C。解冻后置于冰上,在同一实验操作内使用完毕,切勿再次冷冻。
注意:请务必参阅货号rp368300产品随附的批次特异性说明书,以获取复溶体积及浓度推荐信息。
推荐应用与实验注意事项
ELISA:重组人IGLON5蛋白适用于酶联免疫吸附试验,可作为包被抗原或标准品,用于检测和定量血清或脑脊液样本中的抗IGLON5抗体。需根据实验平台经验优化包被浓度(通常为1–4 µg/mL)及封闭条件。
蛋白质印迹(Western Blot):重组蛋白可作为阳性对照,用于确认Western blot实验中抗体的特异性。每泳道上样50–200 ng,与细胞裂解液样本对比分析。
细胞功能实验:IGLON5介导细胞粘附和神经突生长。重组蛋白可吸附于培养基底或以溶液形式呈递,用于研究其对原代神经元或神经母细胞瘤细胞形态、粘附及信号传导的影响。
抗体制备与验证:该蛋白适用于免疫方案以制备科研级抗IGLON5抗体,也可用于抗体亲和纯化及验证。
通用提示:每次实验均应设置适当的阳性和阴性对照。在大规模实验前,通过功能实验验证每批次蛋白的生物活性。
质量控制与纯度注意事项
用于科研应用的重组蛋白应满足规定的质量标准。在评估重组人IGLON5蛋白(rp368300)时,请关注以下质量参数:
- 纯度:SDS-PAGE和/或HPLC分析应确认纯度。确认IGLON5的预期分子量条带,注意糖基化修饰可能使变性凝胶上的表观分子量发生偏移。
- 内毒素水平:在细胞实验中,内毒素污染可能干扰结果。请从质量检验报告(CoA)中获取内毒素指标,并确认其在应用可接受范围内(敏感细胞实验通常要求<1 EU/µg)。
- 生物活性:如已建立功能实验(如细胞粘附实验),每批次收货后应确认活性。
- 蛋白鉴定:CoA中的质谱或N端测序数据可确认蛋白身份。请查阅Aladdin Scientific提供的批次特异性CoA。
使用前务必索取rp368300批次的质量检验报告,并将其与实验记录一同存档,以确保可追溯性和合规性。
常见问题
重组人IGLON5蛋白(rp368300)采用何种表达系统生产?
rp368300所采用的具体表达系统(如HEK293、CHO、大肠杆菌或杆状病毒系统)请参阅Aladdin Scientific提供的产品说明书或质量检验报告。表达系统至关重要,因为它决定翻译后修饰(如糖基化),进而影响IGLON5的折叠和生物活性。
如何操作重组人IGLON5蛋白以维持其活性?
为维持蛋白活性,复溶时应轻柔操作,切勿涡旋;复溶后立即分装为单次用量,长期储存于-80°C。避免反复冻融,使用低蛋白结合耗材,实验操作过程中置于冰上保存。在低工作浓度下,可添加0.1% BSA等载体蛋白以稳定蛋白。
重组人IGLON5蛋白是否适合用作ELISA标准品检测抗IGLON5抗体?
是的,重组人IGLON5蛋白常用作ELISA平台中的包被抗原或定标标准品,用于检测患者样本中的抗IGLON5自身抗体。最佳包被浓度及封闭条件应根据您的具体实验格式和检测抗体对经验优化确定。
IGLON5的临床意义是什么?为何其在神经科学研究中具有重要价值?
抗IGLON5自身抗体已在罕见自身免疫性神经综合征患者中被发现,该综合征以睡眠障碍、延髓症状和tau蛋白病变为特征,现被称为IGLON5相关tau蛋白病。对IGLON5的研究有助于阐明自身免疫性神经退行性变、突触功能及神经系统细胞粘附的机制,使重组IGLON5蛋白成为上述领域的重要科研试剂。
重组人IGLON5蛋白能否用于基于细胞的神经突生长实验?
作为IgLON家族细胞粘附分子成员,IGLON5已被证实与神经突生长和轴突导向相关。重组人IGLON5蛋白因此可能适用于基底包被或溶液相神经突生长实验,所用细胞为原代神经元或神经元细胞系;但研究人员应经验性验证实验条件,并参阅最新文献以获取优化方案。
参考文献
- Gaig C, et al. Anti-IGLON5 disease. Handbook of Clinical Neurology. 2021. A review of the clinical, pathological, and immunological features of IGLON5-related tauopathy.
- Sabater L, et al. A novel non-rapid-eye movement and rapid-eye-movement parasomnia with sleep breathing disorder associated with antibodies to IgLON5: a case series, characterisation of the antigen, and post-mortem study. Lancet Neurology. 2014.
- Hortsch M, Margolis B. (Eds.) The Protein Kinases. Textbook-level reference on immunoglobulin superfamily cell adhesion molecules including IgLON subfamily domain structure and function.
- Aladdin Scientific. Product datasheet: Recombinant Human IGLON5 Protein, SKU rp368300. Aladdin Scientific internal document.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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