重组人ILF3蛋白：研究指南与实验方案
重组人ILF3蛋白：研究指南与实验方案
Recombinant Human ILF3 Protein是白细胞介素增强子结合因子3的重组形式，是一种双链RNA结合蛋白，在NF-AT依赖性转录、mRNA稳定及抗病毒固有免疫应答中发挥重要作用。
- 产品编号
- rp371650
- 蛋白名称
- 重组人ILF3（白细胞介素增强子结合因子3）
- 蛋白家族
- 双链RNA结合蛋白（dsRBP）；NF-AT转录因子复合体组分
- 生物学功能
- 参与NF-AT介导的转录激活、mRNA稳定、微小RNA生物合成及固有抗病毒免疫
- 推荐储存条件
- 收到后储存于-80°C，避免反复冻融
- 典型应用
- SDS-PAGE、Western blot、ELISA、功能实验、蛋白相互作用研究
ILF3的背景与生物学意义
白细胞介素增强子结合因子3（ILF3），又称NF-AT 90、DRBP76或TCP110，属于双链RNA结合蛋白（dsRBP）家族。该蛋白含有两个保守的双链RNA结合结构域（dsRBMs），介导其与RNA及蛋白质伴侣的相互作用。ILF3通常与ILF2（NF-AT 45）形成异二聚体，构成活化T细胞核因子（NF-AT）复合体，结合白细胞介素-2（IL-2）启动子的抗原识别应答元件（ARRE2），驱动T细胞基因表达。
除在T细胞活化中的作用外，ILF3已被证实为mRNA稳定性的关键调节因子，能够保护特定含AU富集元件（ARE）的转录本免于降解。ILF3还通过与Drosha加工复合体结合参与微小RNA（miRNA）的生物合成，并通过与病毒复制过程中产生的双链RNA中间体相互作用来调节固有抗病毒免疫应答。这些多方面的功能使ILF3成为免疫学、病毒学和RNA生物学研究领域的重要研究对象。
蛋白规格与质量属性
重组人ILF3蛋白（SKU：rp371650）采用重组表达系统生产，以确保批次间一致性，满足高要求的研究应用。研究人员应查阅产品数据表，以获取该批次的宿主表达系统、标签配置、分子量、纯度等级及内毒素水平等确认信息。
此类研究级重组蛋白通常具备以下质量属性：
- 纯度：在还原条件下经SDS-PAGE测定，通常≥85%；具体规格请以当前批次质量检验报告（CoA）为准。
- 内毒素：应低于适用于细胞功能实验的阈值水平；批次特异值请参阅CoA。
- 制剂：通常以含载体蛋白的缓冲液（如含BSA和甘油的PBS）提供，以维持稳定性；具体配方请查阅产品数据表。
- 活性：可通过RNA电泳迁移率变动实验（EMSA）或共免疫沉淀验证功能活性；已验证的活性数据请参阅数据表。
注意：所有具体数值（纯度百分比、内毒素单位、精确缓冲液组成）均应以每批次产品附带的最新产品数据表和CoA为准。
复溶与操作规程
正确复溶和操作重组人ILF3蛋白对于保持生物活性和确保实验重复性至关重要。请按以下步骤操作，并始终参阅批次特异性数据表以处理任何偏差。
- 平衡：开瓶前将小瓶在室温平衡10–15分钟，以减少冷凝水造成的稀释。
- 复溶：若以冻干粉形式提供，用无菌去离子水或数据表中规定的缓冲液按指定体积复溶。沿小瓶内壁轻柔加入复溶缓冲液，静置10分钟溶解，勿涡旋混合。轻柔旋转或弹动小瓶至完全溶解。
- 离心：使用前短暂离心（如500–1000 × g，30秒），收集附着在瓶壁上的残余物。
- 分装：复溶后立即制备单次使用的工作分装液，防止反复冻融导致活性损失。可在工作稀释液中加入载体蛋白（如0.1% BSA），以提高低浓度下的稳定性。
- 复溶蛋白的储存：将工作分装液储存于-80°C。短期储存（最多1周）可在-20°C进行；避免在4°C长期储存。
注意：若蛋白出现浑浊、可见沉淀或已经历多次冻融循环，请勿使用，因为这可能表明蛋白已变性，活性受损。
实验应用与研究场景
重组人ILF3蛋白适用于多种体外生化和细胞生物学研究应用：
- 蛋白–RNA相互作用研究（EMSA）：ILF3的dsRBMs能够与结构性RNA底物直接结合，适用于电泳迁移率变动实验以绘制RNA结合特异性图谱。
- Western Blot（WB）与SDS-PAGE：重组ILF3可作为阳性对照或标准品，用于抗体验证和针对内源性ILF3的定量Western blot实验。
- 共免疫沉淀（Co-IP）与pull-down实验：作为诱饵蛋白或猎物蛋白，用于鉴定NF-AT复合体或Drosha/DGCR8微处理器复合体中的相互作用伙伴。
- ELISA标准品：可用于生成标准曲线，用于量化生物样品中ILF3的夹心ELISA平台。
- 转录因子活性实验：与ILF2联合使用，重组ILF3可用于无细胞转录系统，研究NF-AT复合体组装及其在IL-2 ARRE2元件上的DNA结合活性。
- 固有免疫与抗病毒研究：ILF3在dsRNA识别和干扰素通路调控中的作用，使该重组蛋白适合用于抗病毒固有免疫信号转导机制研究。
建议研究人员针对每种具体应用，凭经验优化蛋白浓度和缓冲液条件。
常见问题排查
以下列出使用重组人ILF3蛋白时的常见挑战及建议解决措施：
- Western blot无可检测条带：验证抗体与重组构建体中所用标签或表位的兼容性。用总蛋白染色确认转膜效率。确保蛋白在操作过程中未变性。
- 蛋白沉淀或聚集：避免冻融循环；向稀释分装液中加入载体蛋白（BSA）。在冰上操作，尽量减少蛋白暴露于高温。使用前短暂离心去除聚集体。
- EMSA信号弱或不稳定：优化结合缓冲液的盐浓度和pH，因为ILF3-RNA相互作用对离子条件敏感。确保RNA底物新鲜制备且正确折叠。
- 功能实验活性低：确认内毒素水平在所用细胞类型的可接受范围内。检查所用蛋白浓度是否在数据表验证的线性范围内。
- 实验间结果不一致：使用单次使用分装液并记录批号。在各次实验中标准化复溶体积和缓冲液组成。
若按照上述建议操作后问题仍持续存在，请携带批号和实验详情联系Aladdin Scientific技术支持，以获取进一步帮助。
常见问题
ILF3在人类细胞中的功能是什么？
ILF3（白细胞介素增强子结合因子3）是一种双链RNA结合蛋白，与ILF2形成异二聚体构成NF-AT转录因子复合体，调控T细胞中IL-2基因的表达。它还参与mRNA稳定、通过与Drosha复合体相互作用介导microRNA生物合成，以及通过识别双链RNA参与抗病毒固有免疫信号转导。
应如何储存重组人ILF3蛋白以保持其稳定性？
收到后，重组人ILF3蛋白应立即储存于-80°C。复溶后，制备单次使用分装液并储存于-80°C，以防止反复冻融导致活性损失。在-20°C短期储存不超过一周是可以接受的。请务必查阅批次特异性数据表，以获取制造商推荐的储存条件。
重组人ILF3蛋白（rp371650）适用于哪些经验证的应用？
重组人ILF3蛋白适用于以下应用：SDS-PAGE、Western blot阳性对照、ELISA标准曲线制备、用于RNA结合研究的电泳迁移率变动实验（EMSA）、共免疫沉淀和pull-down实验，以及体外转录因子活性研究。批次rp371650的具体已验证应用请以产品数据表为准。
重组人ILF3蛋白能否用于细胞实验？是否存在内毒素问题？
重组人ILF3蛋白可用于细胞实验，前提是内毒素水平在所用特定细胞类型的可接受限值内。高内毒素污染可能干扰免疫细胞实验结果。在进行细胞实验前，请务必核实每批次产品质量检验报告（CoA）中的内毒素水平。
ILF3与ILF2有何区别？它们是否需要联合使用？
ILF2（NF-AT 45）和ILF3（NF-AT 90）是NF-AT转录因子复合体的两个亚基。ILF3是较大的亚基，含有两个dsRNA结合结构域，而ILF2缺乏这些结构域，起稳定伴侣的作用。对于NF-AT复合体组装和IL-2启动子结合的研究，通常需要两个亚基共同参与。但当研究对象仅为ILF3亚基时，单独使用ILF3即可进行RNA结合研究及相关应用。
参考文献
- Reichman TW, Muniz LC, Mathews MB. The RNA binding protein nuclear factor 90 functions as both a positive and negative regulator of gene expression in mammalian cells. Mol Cell Biol. 2002;22(1):343-356.
- Shi L, et al. NF90 regulates microRNA biogenesis in cells under stress. Nucleic Acids Res. 2020;48(8):4538-4554.
- Pfeifer I, et al. NFAR-1 and -2 modulate translation and are required for efficient host defense. Proc Natl Acad Sci USA. 2008;105(11):4173-4178.
产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。
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