试剂

RIPA缓冲液：50 mM Tris-Cl（pH 7.4）、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1%Triton×100、1%脱氧胆酸钠、0.1%十二烷基硫酸钠、1 mM PMSF、1 ug/mL抑肽酶、1 ug/mL亮肽

裂解缓冲液：0.15 M NaCl，5 mM EDTA（pH 8.0），1%Triton×100，10 mM Tris-Cl（pH 7.4）。在使用前，在异丙醇、5 mMε-氨基己酸中添加5 mM DTT、0.1 mM PMSF

PBS（pH7.4）：10 mM Na 2 HPO 4，1.8 mM KH 2 PO 4，50 mM NaCl，2.7 mM KCl

2×样品缓冲液：130 mM Tris-Cl（pH8.0），20%（体积分数）甘油，4.6%（体积分数）十二烷基硫酸钠，0.02%溴酚蓝，2%DTT

方案（在准备过程中始终将纸巾放在冰上）

1、取下组织，称取每个组织1.5g。

2.将纸巾切成小块，用冰冷的PBS清洗两次。

3.将切碎的组织转移到研磨机中，加入5毫升RIPA缓冲液，均质20次。

4.将均质溶液转移至1.5 ml微量离心管中。在4°C下以14000 rpm转速旋转10分钟。

5.小心去除上清液表面的脂质。将上清液保存为整个组织裂解液，并丢弃颗粒。

6.通过Bradford分析测定蛋白质浓度。

7.用裂解缓冲液将浓度调节至2.5 mg/ml。每小瓶等分100微升，并在-80°C下储存。

8.对于蛋白质印迹，添加100 ul 2×样品缓冲液，煮沸5分钟，并储存在-20°C。