材料

• 在适当的生长介质中培养的细胞系

• 质粒DNA

• 脂质体胺

• 基本培养基（无血清）

• 适当的细胞培养板和用品

协议

1.粘附细胞：在转染前一天，将0.5-2×105细胞接种在500微升不含抗生素的生长培养基中，使细胞在转染时达到90-95%的融合。

悬浮细胞：只需将4-8×105细胞置于500微升不含抗生素的生长培养基中。

2.对于每个转染样品，制备复合物如下：

• 在50微升碱性培养基中稀释DNA。轻轻搅拌。

• 使用前轻轻混合Lipofectamine，然后在50微升的基本培养基中稀释适量（DNA:Lipofect=1:2.5）。在室温下培养5分钟。

• 培养5分钟后，将稀释的DNA与稀释的脂质体（总体积=100微升）结合。轻轻混合并在室温下培养20分钟（溶液可能看起来浑浊）。

注意：所有步骤应在25分钟内完成。

3.向每个含有孔的细胞和培养基中加入100微升的复合物。左右摇动盘子，轻轻搅拌。

4.在测试蛋白质表达之前，在37°C的CO2培养箱中培养细胞18-48小时。4-6小时后可更换培养基。

5.稳定细胞系：转染后24小时，将细胞以1:10（或更高稀释度）传代至新鲜生长培养基中。第二天添加选择性培养基（如果需要）。