计算溶液所需的质量、体积或浓度。
BioReagent,标曲法,比色法,适用于分析 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
-20°C储存。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
产品介绍
糖原(Glycogen)在淀粉糖苷酶的作用下产生葡萄糖,葡萄糖经葡萄糖氧化酶催化生成过氧化氢。在辣根过氧化物酶存在的情况下,Amplex Red能与过氧化氢反应,产生强烈的红色荧光物质试卤灵。试卤灵的荧光强度与样品中糖原的含量成正比,可通过试卤灵的荧光强度计算样品中糖原的含量。
产品组分
G1373331 | 组分名称 | 物理外观 | 100 T | 储存 | 单次测试使用量 |
G1373331A | 检测缓冲液 | 液体 | 20 mL | -20℃. | 按需 |
G1373331B | 淀粉葡萄糖苷酶 | 液体 | 200 μL | -20℃.避光 | 2 μL |
G1373331C | 葡萄糖氧化酶 | 液体 | 200 μL | -20℃.避光 | 2 μL |
G1373331D | 辣根过氧化物酶 | 液体 | 200 μL | -20℃.避光 | 2 μL |
G1373331E | Amplex Red | 液体 | 200 μL | -20℃.避光 | 2 μL |
G1373331F | 糖原标准品(2 mg/mL) | 液体 | 600 μL | -20℃.避光 | 6 μL |
使用方法
1. 样本处理
(1) 组织样本:按照组织样本质量 (g):双蒸水体积 (mL)为1:9的比例 (如0.1 g组织样本,加入0.9 mL双蒸水),4°С,机械匀浆。立即将所得匀浆液沸水浴10 min,流水冷却至室温。4°С,12000×g离心10 min,取上清液放于冰上待测。
(2) 细胞样本:收集1×10⁶个细胞样本,加入200 μL双蒸水,4°C,机械匀浆。立即将所得匀浆液沸水浴10 min,流水冷却至室温。4°C,12000×g离心10 min,取上清液放于冰上待测。
(3) 血清 (浆)样品:直接测定。
2. 标准曲线设置
取8支EP管,第一支EP管中加入6 µL糖原标准品(2 mg/mL)和294 µL的检测缓冲液,将糖原标准品稀释为40 μg/mL。其他每管中加入150 μL检测缓冲液。从第一只EP管中吸取150 μL到第2支EP管,按此步骤往后依次稀释,最后一支EP管为150 μL检测缓冲液。此时,各个EP管中糖原的浓度依次为40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0 μg/mL。
3. 标准品和样品测定
(1) 取50 μL梯度稀释的标准品和50 μL样本加入到黑色96孔板中。
(2) 根据标准孔和样品孔数量配制反应工作液。每孔需要50 μL的反应工作液,包含2 μL淀粉葡萄糖苷酶、2 μL葡萄糖氧化酶和46 μL检测缓冲液。配制完成后,每孔加入50 μL,37℃反应30 min。
(3) 根据标准孔和样品孔数量配制显色工作液。每孔需要50 μL的显色工作液,包含2 μL辣根过氧化物酶、2 μL Amplex Red和46 μL检测缓冲液。配制完成后,每孔加入50 μL,37℃反应30 min。
(4) 设置激发波长为535 nm,发射波长为587 nm进行荧光强度检测。
注: H₂O₂ 的存在会对糖原的检测产生干扰。如果样品含有 H₂O₂ ,须同时设置背景对照孔,加入不含葡萄糖氧化酶的反应工作液,即配制反应工作液时2 µL葡萄糖氧化酶用检测缓冲液替代。
4. 结果计算
空白孔的荧光强度为 F空白 、标准孔的荧光强度为 F标准 、样品孔的荧光强度为 F样品 。则ΔF 标准 =F标准 -F空白 、ΔF 样品 = F样品 - F空白 。如果样品的背景对照信号比较高,样品的信号值应减去样品背景对照的信号值。
以糖原标准品的浓度为横坐标,荧光信号强度Δ F标准 为纵坐标建立标准曲线。带入Δ F样品计算样品中糖原的浓度。
5. 结果展示
注意事项
1. 酶工作液冰上解冻,使用前后避免室温放置。
2. 正式检测前,建议选择2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
3. Amplex Red在空气中不太稳定,开启后应尽快使用,且在使用过程中需注意适当避光。
4. 荧光检测时建议使用96孔黑板。
5. 生化检测试剂普遍具有刺激性、生物毒性等,为了您的安全和健康,请在实验全程做好生物安全防护。
G1373331 | 组分名称 | 物理外观 | 100 T | 储存 | 单次测试使用量 |
G1373331A | 检测缓冲液 | 液体 | 20 mL | -20°C. | 按需 |
G1373331B | 淀粉葡萄糖苷酶 | 液体 | 200 μL | -20℃.避光 | 2 μL |
G1373331C | 葡萄糖氧化酶 | 液体 | 200 μL | -20℃.避光 | 2 μL |
G1373331D | 辣根过氧化物酶 | 液体 | 200 μL | -20℃.避光 | 2 μL |
G1373331E | Amplex Red | 液体 | 200 μL | -20℃.避光 | 2 μL |
G1373331F | 糖原标准品(2 mg/mL) | 液体 | 600 μL | -20℃.避光 | 6 μL |
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | G1373331 |
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