基本描述

规格或纯度

BioReagent, 用于化学发光

稳定性与储存

Store at -20°C long term (12 months). Store in the dark.

英文名称

Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit

储存温度

避光,-20°C储存

运输条件

超低温冰袋运输

产品介绍

高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 (辉光型稳定版) 提供一种高信号稳定性的检测系统，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，半衰期最长可达7小时以上，符合高通量检测的需求。同时高斯荧光素酶（Gaussia Luciferase，185 AA，19.9 kDa）是一种分泌型萤光素酶， Gaussia Luciferase 质粒转染细胞后，大部分 Gaussia Luciferase 可以分泌到细胞外，所以本试剂盒既可以用于细胞培养上清样品的检测，也可以用于细胞裂解样品或纯化的酶的检测，特别适用于酶活性的实时研究。
Gaussia Luciferase 产生的生物发光信号原理是腔肠素 (Coelenterazine) 的氧化反应，该反应不需要ATP或其他辅助因子。
反应原理如下：

组分表

G830846	Component	100T	1000T	Storage
G830846A	Gaussia Glow-Stable Assay Buffer	5 mL	50 mL	-20℃.
G830846B	Gaussia Glow-Stable Assay Substrate (100×)	50 μL	500 μL	-20℃. Store in the dark.
G830846C	Cell Lysis Buffer (5×)	5 mL	50 mL	-20℃.

使用说明：
（一）自备材料
PBS；多道排枪；白色或黑色不透光细胞培养板；化学发光仪或带发光检测功能的酶标仪。
（二）检测前准备
1、预先将 Gaussia Glow-Stable Assay Buffer 放置于室温融化。
2、取出 Gaussia Glow-Stable Assay Substrate (100×) ，每次开盖前需进行短暂涡旋、低速离心。
3、Working Solution 的配制：按照检测每个样品需要50μL Working Solution的量，根据实际使用量，以100:1的比例将适量的 Gaussia Glow-Stable Assay Buffer 与 Gaussia Glow-Stable Assay Substrate (100×) 混匀，平衡至室温，避光备用。例如：如果需要5mL Working Solution，则需要在5mL Gaussia Glow-Bright Assay Buffer 中加入50μL Gaussia Glow-Stable Assay Substrate。注：①、建议现配现用，剩余Working Solution在当次实验结束后直接舍弃，不要留存。
②、为得到最佳检测结果，Working Solution配制后在1小时内进行检测。
（三）检测方法
1、细胞上清样品的检测
（1）细胞上清样品的准备：根据具体情况，收集转染含 Gaussia 质粒的细胞上清，平衡至室温。将样品加入到不透光培养板中用于检测，如果不能立即检测，可以将收集好的细胞上清放于-20℃保存，至少可保存一个月。
（2）取恢复至室温的5~20μL细胞上清样品加入96孔白板或黑板。
注：①、对于同一批样品检测，检测样品体积需统一，这样的检测数据具有更好的可比性，因为样品体积对于最终的化学发光值会产生影响。
②、优先推荐使用5μL样品，样品体积小时化学发光更稳定。
③、使用白色或黑色不透光的细胞培养板，减少孔间的信号干扰。
（3）使用多道排枪向每个细胞孔中加入 50μL Working Solution。
（4）室温(约25℃)孵育10min，使发光信号趋于稳定。
（5）混匀后于化学发光仪或带发光检测功能的酶标仪中检测 Gaussia Luciferase活性。
2、细胞裂解样品的检测
（1）细胞裂解样品的准备：
①、1×Cell Lysis Buffer 配制：每次使用前以1:4比例将Cell Lysis Buffer (5×) 与ddH2O 充分混合，置于冰上备用。配制体积根据实验需求，建议现配现用。
②、去除细胞培养液，加入PBS清洗细胞，去除PBS后按照下表推荐加入适量的 1×Cell Lysis Buffer，室温下静置或振动摇晃裂解15min，吹打并吸取全部细胞裂解产物用于后续检测。在光学显微镜下检查细胞是否完全溶解，如果溶解不完全，继续裂解15分钟。如果不能立即检测，可以将裂解液样品放于-20℃保存，至少可保存一个月。

Cell Culture Plate	6-well	12-well	24-well	48-well	96-well
1×Cell Lysis Buffer	500μL	200μL	100μL	50μL	20μL

（2）取恢复至室温的5~20μL细胞裂解样品加入96孔白板或黑板。
注：①、对于同一批样品检测，检测样品体积需统一，这样的检测数据具有更好的可比性，因为样品体积对于最终的化学发光值会产生影响。
②、优先推荐使用5μL样品，样品体积小时化学发光更稳定。
③、使用白色或黑色不透光的细胞培养板，减少孔间的信号干扰。
（3）使用多道排枪向每个细胞孔中加入 50μL Working Solution。
（4）室温(约25℃)孵育10min，使发光信号趋于稳定。
（5）混匀后于化学发光仪或带发光检测功能的酶标仪中检测 Gaussia Luciferase活性。
3、总高斯萤光素酶活性的快速检测
（1）将含有转染Gaussia Luciferase质粒的细胞的不透光孔板平衡至室温。
（2）向孔板内加入与培养基等体积的Working Solution。
（3）室温(约25℃)孵育10min，使发光信号趋于稳定。
（4）混匀后于化学发光仪或带发光检测功能的酶标仪中检测 Gaussia Luciferase活性。
注意事项：
1、检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同；且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰，推荐使用不透明白色或黑色细胞培养板。
2、由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
3、酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将Working Solution以及细胞培养板平衡至室温。 4、如需同时检测多个细胞培养板，请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致，再进行数据读取，以此获得最佳的检测结果。
5、高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(辉光型稳定版)具有超强信号稳定性，半衰期可达7小时以上。但是当酶表达量过高时，信号半衰期会缩短，建议优化实验设计方案（如减少质粒转染量），避免萤光素酶表达量过高。
6、Gaussia Glow-Stable Assay Substrate (100×) 配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于包装规格的情况，此时用无水乙醇把体积补足至包装规格，并混匀后即可使用。

名称和识别符

分子类型	试剂盒

化学和物理性质

敏感性	Light sensitive

安全和危险性（GHS）

SDS英文版

技术规格说明书

技术规格说明书

g830846_高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒产品说明书.pdf

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):

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批号(Lot Number)	证书类型	日期	货号
ZJ25F0622611	分析证书	25-06-17	G830846

溶液计算器

摩尔浓度计算器

计算溶液所需的质量、体积或浓度。

质量

=

浓度

x

体积

x

分子量

g/mol

稀释计算器

计算配制储备溶液所需的稀释度。

浓度1（C1）

x

体积 1 (V1)

=

浓度 2 (C2)

x

体积 2 (V2)

复溶计算器

复溶计算器允许您快速计算试剂的体积，以复溶小瓶。只需输入试剂的质量和目标浓度，计算器将确定其余部分。

体积（添加到小瓶中）

=

质量（小瓶）

÷

所需的复溶浓度

货号 (SKU)	包装规格	是否现货	价格	数量
G830846-100T	100T	现货
G830846-1000T	1000T	期货

高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒

库存信息

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名称和识别符

化学和物理性质

安全和危险性（GHS）

技术规格说明书

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

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摩尔浓度计算器

稀释计算器

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