计算溶液所需的质量、体积或浓度。
BioReagent,无菌过滤,用于细胞培养,通过内毒素测试 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
室温。常规运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
本产品是用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据血细胞的密度差异(红细胞和粒细胞密度为1.090 g/mL左右;淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~1.090 g/mL;血小板为1.030~1.035 g/mL),通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。
使用说明:
1、取2mL新鲜抗凝(EDTA、枸橼酸钠或肝素等抗凝剂均可)全血,用等体积等渗溶液(PBS或生理盐水)稀释全血。
2、在离心管中加入一定体积的分离液,将稀释后的血液小心加入,使其平铺到分离液液面上方,保持量液面界面清晰。分离液、抗凝未稀释全血、等渗溶液(PBS或生理盐水)的体积比为2:1:1。
3、室温条件下,以1000×g离心(水平转子)离心30~40min。
4、离心结束后,离心管中由上至下细胞分四层。第一层为血浆层(含血小板),第二层为环状乳白色白膜层,即单个核细胞层(包含单核细胞和淋巴细胞),第三层为透明分离液层,第四层为红细胞层(含大量中性粒细胞),小心吸取白膜层至新的离心管中。
5、用3倍体积的等渗溶液(PBS、生理盐水或培养基等)轻柔混匀细胞后,以300×g离心10min,弃上清。重复洗涤1~2次。
6、用等渗溶液(PBS、生理盐水、培养基等)将细胞重悬,用以细胞计数。
为满足客户实际使用需求,根据不同血液样本量推荐具体实验操作方法如下:
一、使用15mL离心管时:
情况A:血液样本量小于3mL时,实验方法如下:
1、取一支15mL离心管,加入3mL分离液。
2、用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上,1000×g,离心20-30min(注:根据血液样本量确定离心条件,血液样本量越多,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果)。
3、离心后,此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
4、用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中,向所得离心管中加入10mL等渗溶液,混匀细胞。
5、300×g,离心10min。
6、弃上清。
7、用吸管以5mL等渗溶液重悬所得细胞。
8、300×g,离心10min。
9、重复6、7、8,弃上清后以1mL后续实验所需相应液体重悬细胞。
情况B:血液样本量为3-6mL时,实验方法如下:
1、取一支15mL离心管,先加入与血液样本等量的分离液。
2、用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上,1000×g,离心20-30min(注:根据血液样本量确定离心条件,血液样本量越多,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果,但最大离心力最好不超过1200×g)。
3、离心后,此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
4、用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中,向所得离心管中加入10mL等渗溶液,混匀细胞。
5、300×g,离心10min。
6、弃上清。
7、用吸管以5mL等渗溶液重悬所得细胞。
8、300×g,离心10min。
9、重复6、7、8,弃上清后以1mL后续实验所需相应液体重悬细胞。
二、使用50mL离心管时:
情况A:血液样本量为7-10mL时,实验方法如下:
1、取一支50mL离心管,先加入与未稀释的血液样本等量的分离液。
2、用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上,1000×g,离心20-30min(注:根据血液样本量确定离心条件,血液样本量越多,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果,但最大离心力最好不超过1200×g)。
3、离心后,此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
4、用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中,向所得离心管中加入10mL等渗溶液,混匀细胞。
5、300×g,离心10min。
6、弃上清。
7、用吸管以5mL等渗溶液重悬所得细胞。
8、300×g,离心10min。
9、重复6、7、8,弃上清后以1mL后续实验所需相应液体重悬细胞。
情况B:血液样本量为11-20mL时,实验方法如下:
1、取一支50mL离心管,先加入与未稀释的血液样本等量的分离液。
2、用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上,500-1100×g,离心20-25min(注:根据血液样本量确定离心条件,血液样本量越多,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果,但最大离心力最好不超过1200×g)。
3、离心后,此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
4、用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中,向所得离心管中加入10mL等渗溶液,混匀细胞。
5、300×g,离心10min。
6、弃上清。
7、用吸管以5mL等渗溶液重悬所得细胞。
8、300×g,离心10min。
9、重复6、7、8,弃上清后以1mL后续实验所需相应液体重悬细胞。
注意事项:
1、本产品仅限科研使用。
2、严禁使用过期产品。
3、本产品由专业人员使用,使用前应仔细阅读说明书,并做好个人防护。
4、若本产品不慎与皮肤接触或进入人眼,需用大量清水冲洗,如果仍有不适请及时就医。
5、产品使用后产生的医疗废物应按国家相关规定处理。
6、稀释血液或洗涤细胞时, 不可使用含Ca²⁺、Mg²⁺的缓冲液或培养基,否则会降低细胞得率或纯度。
7、本产品最佳使用环境为正常大气压,温度为20°C±2°C,否则会影响质量。
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | H1197504 | |
| 分析证书 | H1197504 |
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