计算溶液所需的质量、体积或浓度。
为什么选择此级别
，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
2-8°C储存。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
UltraBio™ 293F 表达系统（Plus）可实现 HEK293 细胞株及其他293 细胞的高效率瞬时转染和蛋白表达。
使用方法
1. 推荐细胞培养条件
温度 36-38℃，湿度 80%，5-8%CO2
摇床设置：转速 115-125rpm（振幅 50mm）
2. 细胞复苏
2.1 在 37℃水浴中快速（＜2min）融化冷冻的细胞；
2.2 将冷冻管中的细胞液全部转移到含有 30ml 预温过的 293F Hi-exp 培养基 的 125ml 摇瓶中；
2.3 放入 37℃，5-8% CO2，转速 115-125rpm（振幅 50mm），湿度 80%的摇床中培养。
3. 细胞传代
3.1 将 293F Hi-exp 培养基 放入 37℃条件下预热 20-30min。
3.2 取细胞密度≥3×106 - 4×106cells/ml、细胞活性≥95%、处于对数生长期中期的细胞进行传代；
【注意：不同类型的 HEK293 细胞可能具有不同的对数生长期范围。】
3.3 接种密度推荐：0.3×106 - 0.6×106cells/ml。
3.4 无菌转移所需量的种子液至合适体积的摇瓶中，并添加所需体积的已预热的 293F Hi-exp 培养基。
3.5 将摇瓶放入温度 37℃，湿度 80%，转速 115-125rpm（振幅50mm），5%-8%CO2的细胞培养摇床中进行培养。
【每 2-3 天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。】
4. 细胞驯化
4.1 直接接种法
① 对于可以直接驯化的细胞，可以从无血清培养基中直接接种到 293F Hi-exp 培养基中，接种密度参考传代步骤。
② 继续传代细胞，直到细胞稳定生长。
③ 传代几代之后，细胞密度在接种的 3-4 天内达到 3× 106cells/ml、细胞活性≥90%。此时，可以认为细胞已被驯化成功。
4.2 梯度驯化法
① 如果直接驯化效果不佳，请尝试按照以下梯度驯化表格进行操作。
② 选择低代次的细胞，并确保细胞处于对数期。
③ 使用原始培养基培养细胞，并继续使用原始培养基传代 2-3 代，以实现稳定的细胞生长。
④ 在完全使用 293F Hi-exp 培养基 接种 3-4 天之后，VCD应该稳定达到 3×106cells/ml，细胞活性≥90%。此时，细胞已经驯化到 293F Hi-exp 培养基 中。
| 293F Hi-exp 培养基：原始培养基（%） | 接种细胞密度（×10⁶cells/ml) ） | 细胞生长评估 | 进行下一步前的验收标准 |
| 0：100 | as usual | VCD &Viability | VCD≥3×10⁶/ml, Viability≥95% over 2 passages |
| 30：70 | 0.6 |
VCD &Viability
| VCD≥2×10⁶/ml, Viability≥90% over 2 passages |
| 70：30 | 0.5 |
VCD &Viability
| CD≥2×10⁶/ml, Viability≥90% over 2 passages |
| 100：0 | 0.4 |
VCD &Viability
| VCD≥3×10⁶/ml, Viability≥90% over 2 passages |
5. 细胞冻存
5.1 选择处于对数生长期、活率>90%的细胞进行冻存。
5.2 测定活细胞密度，并计算所需的冻存液体积，确保最终的细
胞冻存密度为（1-5）×106 cells/ml。
5.3 准备细胞冻存液：推荐使用 OPM CryoStasisTM 组织/细胞冻存液，直接置于4℃环境预冷备用。
若自行配制冻存液：按 90%的 293F Hi-exp 培养基+10% DMSO，配好后置于 4℃环境预冷备用。
5.4 离心收集细胞沉淀（800 rpm，5min），弃去上清。
5.5 加入预冷的冻存液重悬细胞，快速分装细胞至冻存管，每管1.0-1.5 ml；
5.6 将冻存管放入程序降温盒中，2-8℃ 孵育 10-15 分钟，随后于-80℃冰箱放置过夜后转移到液氮罐进行保存。
6. 转染和瞬时表达
6.1 转染细胞制备
接种细胞并培养至适当密度，转染密度建议在 1.5-3.0× 106cells/ml。转染细胞活性建议≥95%。
6.2 制备转染复合物
① 质粒稀释液制备：将适量质粒加入 293F Hi-exp 培养基中，轻轻混匀，质粒稀释液体积建议为总体积的 2.5%-5%。
② CarpTrans 转染试剂稀释液制备：将适量转染试剂加入293F Hi-exp 培养基 中，轻轻混匀，转染试剂稀释液的体积建议为总体积的 2.5%-5%。
③ 质粒-转染试剂复合物制备：将转染试剂稀释液加入质粒稀释液中，轻轻混匀后在室温下孵育 10-15 min，充分反应形成质粒-转染试剂的复合物。
【对于 293 悬浮细胞，每 mL 待转染细胞体系推荐可转染质粒总数量为 1.0 μg，常用核酸(μg)-转染试剂(μl)比例为（1:3-1:4），基础数据可参考本产品说明书附表。】
6.3 转染细胞
① 将孵育好的质粒-转染试剂复合物缓慢加入培养好的待转染细胞中，边加边轻轻摇动摇瓶。
② 置于推荐培养环境下继续培养。
温度36-38℃，湿度80%，5-8%CO₂
摇床设置：转速115-125rpm（振幅50mm）
6.4 推荐的培养基补料添加方案
293F Hi-exp 补料，作为一款高性能补料，不含任何动物来源的成分，含有植物来源水解物。与 293F Hi-exp 培养基在瞬时转染 HEK293 细胞过程中联用，可实现更高水平的蛋白瞬转表达量。
① 转染16-22小时后，向摇瓶中添加5％（v/v）293F Hi-exp补料，在添加过程中轻轻晃动摇瓶。将摇瓶放回37℃培养箱继续培养。
② 在瞬时表达过程（一般转染后的2-7天）中，维持葡萄糖浓度在4g/L以上。当细胞活性低于60％时收获细胞。
【若无葡萄糖测定仪时，可以按照下列盲补策略：转染后 D1 同补料一起补充2g/L 葡萄糖，D3 补充 3g/L 葡萄糖。】
6.5 推荐的细胞收获时间
当细胞活性低于 60％时收获细胞。不同转染体系的蛋白收样时间有所差异，建议在首次实验时进行最优用量探索。对于Expi293 细胞，推荐收样时间在 5-7 天。
【注意：本培养基含有 EDTA，如需使用镍柱纯化含有 His 标签蛋白质时，请先在样品中加入终浓度为 1mM 的硫酸镍溶液，再上样过柱。】
注意事项
1. 为保障转染效率，请使用高纯度、无内毒素的质粒。
2. 待转染细胞的状态会对转染效率产生极大影响，建议使用新鲜传代并生长到对数期、无菌、无支原体污染的细胞。
3. 为了保护您的安全与健康，实验中请全程穿戴好实验服和一次性手套，并注意通风橱操作
附表：Expi293 悬浮细胞推荐转染体积
注意：
[1] 质粒用量：需根据待转染细胞亚型和体积确定，建议在首次实验时进行最优用量探索。对于 Expi293 细胞，推荐每 ml培养体积转染 1μg 左右质粒。
[2] 转染试剂用量：需根据实际转染质粒的量和细胞密度来优化，推荐每μg 质粒使用 3-4μl 转染试剂，建议在首次实验时进行比例优化。
[3] 转染效果观测时间：不同转染体系的蛋白收样时间有所差异，一般转染后 24-72h 内可检测到转染效率逐渐提高。
规格
英文名称
UltraBio™ 293F Expression System (Plus)
储存条件
2-8°C储存
运输条件
低温运输
产品线
生物产品
名称和识别符
分子类型
小分子
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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溶液计算器
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