背景与原理

醋酸锂（LiOAc）法是将质粒DNA或线性DNA盒导入酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）最广泛使用的技术。二水醋酸锂在水溶液中解离，提供锂阳离子（Li⁺）和醋酸根阴离子。一价Li⁺离子被认为能与酵母细胞壁和质膜相互作用，暂时增加其通透性，从而使外源DNA进入细胞。

醋酸锂法的转化效率可通过同时添加单链载体DNA（通常为热变性鲑鱼精子DNA或鲱鱼精子DNA）和聚乙二醇（PEG）得到显著提升。载体DNA被认为能与转化DNA竞争细胞表面的非特异性结合位点，而PEG则促进细胞与DNA的接触并保护DNA免受核酸酶降解。短暂的热休克步骤（通常在42 °C）可进一步提高摄取效率。

二水醋酸锂（阿拉丁，货号：L755673）提供便于称量的醋酸锂来源，化学计量明确，使缓冲液配制具有良好的重复性和便利性。

材料与试剂配制

所需材料

• 二水醋酸锂（阿拉丁 L755673）
• 聚乙二醇（PEG 3350或PEG 4000），50%（w/v）溶液
• 单链载体DNA（如鲑鱼精子DNA，2 mg/mL，热变性）
• 目的质粒或线性DNA（每次转化≥1 µg）
• 无菌去离子水（dH₂O）
• YPD培养基或适当的选择性液体培养基
• 选择性琼脂平板
• 1.5 mL微量离心管
• 30 °C和42 °C水浴锅或加热模块
• 微量离心机

溶液配制

1 M醋酸锂储备液：将10.20 g二水醋酸锂（L755673）溶于80 mL无菌去离子水中，定容至100 mL，高压灭菌或过滤除菌（0.22 µm）后，室温保存。

100 mM LiOAc工作液：将1 M LiOAc储备液用无菌去离子水按1:10稀释。

载体DNA：将鲑鱼精子DNA配制成2 mg/mL的TE缓冲液溶液，每次使用前煮沸5分钟，立即置于冰上冷却。分装后于−20 °C保存。

PEG/LiOAc转化混合液：每次转化反应取240 µL 50% PEG（w/v）、36 µL 1 M LiOAc及适量无菌去离子水混合备用。

逐步转化操作方案

第1天——培养准备

1. 从酿酒酵母单菌落接种至5 mL YPD培养基中，于30 °C、200 rpm振荡培养过夜。

第2天——转化

1. 扩大培养：将过夜培养物稀释至新鲜YPD中，使OD₆₀₀约为0.2，于30 °C振荡培养至OD₆₀₀达到0.6–0.8（约3–4小时），确保细胞处于对数生长中期。
2. 收集细胞：将适量培养液转入微量离心管，3,000 × g离心5分钟收集细胞，弃上清。
3. LiOAc洗涤：用1 mL 100 mM LiOAc（由L755673配制）重悬细胞沉淀，3,000 × g离心5分钟，弃上清。
4. 配制转化混合液：按以下顺序依次加入各组分：240 µL 50% PEG、36 µL 1 M LiOAc、25 µL已煮沸的载体DNA（2 mg/mL），以及含1–5 µg目的DNA的水溶液（补水至50 µL）。
5. 涡旋混匀：涡旋振荡1分钟，充分重悬细胞沉淀。
6. 30 °C孵育：在30 °C条件下孵育反应体系30分钟。
7. 热休克：将离心管转移至42 °C水浴锅或加热模块，热休克25–40分钟，温度不得超过42 °C。
8. 恢复培养：3,000 × g离心1分钟，弃上清。
9. 重悬并涂板：将沉淀重悬于100–200 µL无菌去离子水或YPD中，均匀涂布于选择性琼脂平板。
10. 平板培养：于30 °C培养2–4天，直至菌落出现。

故障排查与优化建议

转化子数量少或无转化子：

• 确保在对数生长中期（OD₆₀₀ 0.6–0.8）收集细胞，稳定期细胞转化效率极低。
• 确认载体DNA已新鲜煮沸并立即在冰上冷却。
• 检查PEG溶液是否已变质，老化或不纯的PEG会显著降低转化效率。
• 确认二水醋酸锂（L755673）溶液浓度正确（工作液100 mM，储备液1 M）。
• 增加DNA用量（最多5 µg）或使用纯度更高的DNA制备物。

平板污染：

• 使用新鲜制备的选择性平板，并确保所有试剂均已灭菌。

重复性差：

• 严格控制热休克时间和温度，42 °C热休克时间的差异是导致重复性不佳的常见原因。
• 每次实验尽量用二水醋酸锂（L755673）新鲜配制1 M LiOAc储备液。

试剂储存：二水醋酸锂具有吸湿性，应将固体试剂密封保存于室温，称量时操作迅速，以减少吸潮。

安全、操作与废弃物处置

在标准实验室条件下，二水醋酸锂属于低危害化学品，但操作时仍应采取适当防护措施：

• 个人防护装备（PPE）：操作固体或高浓度溶液时，须佩戴实验室防护服、防化学品飞溅护目镜及丁腈手套。
• 皮肤和眼睛接触：如皮肤或眼睛接触，应立即用大量清水冲洗至少15分钟，若刺激症状持续，应就医处理。
• 误食/吸入：称量时避免产生粉尘，切勿误食。大量摄入锂盐可能导致全身毒性。
• 废弃物处置：稀释后的水溶液通常可按照当地法规通过下水道处置，含锂废弃物的具体处置方式请咨询所在机构的环境健康与安全（EHS）部门。
• 储存：密封保存于室温（15–25 °C），避免受潮，远离强氧化剂、强酸等不相容物质。

使用前请务必查阅阿拉丁产品L755673的安全数据表（SDS）。