组织由细胞和细胞外基质（ECM）有序而紧密地联结在一起。从组织中获取单细胞悬液，应用于流式检测、单细胞测序、体外培养、药物筛选、细胞移植、类器官培养以及肿瘤研究等方面，更接近体内的天然状态，具有很多优势。

        要想获得高品质的单细胞悬液，需要采取一些有效措施，其中，酶消化法就是一种既能维持细胞的最佳状态、又能有效地获得单个细胞的方法。

        消化组织的酶多种多样，常见的消化酶主要有以下几种。根据消化原理的不同，其应用场景也各不相同：

        由于不同组织的细胞和结构不同，利用单一的酶消化细胞无法达到良好的效果，常常需要几种不同的酶混合搭配，才能获得性能最佳的单细胞悬液。针对具体的组织，仍需试验摸索，以确定最佳消化方案。以下列表方法供大家参考。

表一：人体组织常用的消化方案参考

表二：小鼠组织常用的消化方案参考

表三：大鼠组织常用的消化方案参考

举例

4T1荷瘤小鼠的酶消化过程及染色流程如下所示：

        （1）10×混合消化酶的配制：取80 mL HBSS缓冲液， 加入1 g胶原酶 IV，100 mg透明质酸酶，为降低细胞粘稠度和凝集，额外加入20,000 U DNaseⅠ，充分溶解混匀，补加HBSS缓冲液，定容至100 mL，使用0.22 μm的滤膜过滤，分装成5 mL/支，储存于-20℃条件下，使用前恢复至室温；

       （2）肿瘤分离：用颈椎脱臼法将荷瘤小鼠处死，放置于含有75%酒精的烧杯中，浸泡3~5 min，使用剪刀和镊子剥离肿瘤，PBS洗涤2次；

       （3）肿瘤组织的消化：将肿瘤转移至1.5 mL EP管中，手持弯剪，插入EP管反复剪切至大小约为0.5~1 mm3的颗粒，补加1 mL HBSS缓冲液，转移到15 mL离心管，再使用8 mL HBSS缓冲液重悬肿瘤颗粒，加入1 mL 10×混合消化酶，轻轻吹打混匀，在摇床上以80 rpm、37℃的条件消化1~2 h；

★注：10 mL消化液可充分消化体积约为1 cm3的肿瘤组织。

       （4）单细胞悬液的制备：每30 min使用1 mL移液器吹吸组织块1次，至吹吸无明显阻碍视为消化彻底， 用100 μm筛网过滤除去杂质，并使用大体积约50 mL的HBSS缓冲液洗涤一次，300 g离心5 min，弃上清，补加适当体积的HBSS缓冲液或PBS缓冲液重悬细胞沉淀，即为肿瘤单细胞悬液；

      （5）流式染色：细胞计数，调整细胞到合适的密度（1*107/mL），并进行流式染色和分析。

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