重组人CDH4蛋白：操作与应用实验方案
重组人CDH4蛋白：操作与应用实验方案
Recombinant Human CDH4 Protein is a purified, bioactive form of R-cadherin designed to support cell adhesion studies, homophilic binding assays, and cadherin-mediated signaling research in a reproducible laboratory setting.（重组人CDH4蛋白是一种纯化的、具有生物活性的R-钙黏蛋白，专为在可重复的实验室环境中支持细胞黏附研究、同嗜性结合实验及钙黏蛋白介导的信号传导研究而设计。）
- 蛋白名称
- 重组人CDH4蛋白（R-钙黏蛋白）
- 货号
- rp365838
- 蛋白家族
- 经典钙黏蛋白（II型钙黏蛋白超家族）
- 主要应用
- 细胞黏附实验、同嗜性结合研究、体外功能实验
- 推荐储存条件
- -80 °C长期储存；避免反复冻融
- 钙离子依赖性
- CDH4的黏附功能需要胞外钙离子（Ca²⁺）
背景：CDH4生物学及研究意义
CDH4（钙黏蛋白-4），又称R-钙黏蛋白（视网膜钙黏蛋白），是属于钙黏蛋白超家族的经典II型跨膜糖蛋白。它介导钙依赖性、同嗜性细胞-细胞黏附，在神经组织发育、视网膜模式形成和体节发生中发挥关键作用。CDH4在细胞表面参与顺式和反式二聚化，其胞外结构域以Ca²⁺依赖性方式与配体钙黏蛋白相互作用。
在研究领域，CDH4与神经元回路形成、肿瘤侵袭及上皮-间充质转化（EMT）密切相关。重组人CDH4蛋白使研究人员能够在明确的无细胞体系中研究上述过程，或用于包被表面以开展细胞黏附实验，是基础研究和转化研究的多功能试剂。
复溶与储存指南
复溶：开瓶前短暂离心，使冻干粉聚集于管底。用无菌超纯水或适当的生理缓冲液（如PBS，pH 7.4）将蛋白复溶至所需工作浓度。室温静置5–10分钟后，用移液器轻柔混匀；避免涡旋振荡，以防蛋白变性或聚集。
工作缓冲液注意事项：由于CDH4功能具有钙离子依赖性，功能实验所用缓冲液中应补充Ca²⁺（通常为1–2 mM CaCl₂）以维持黏附活性。含EDTA或EGTA的缓冲液会螯合钙离子，从而消除钙黏蛋白介导的黏附功能。
储存：冻干蛋白应储存于–20 °C或–80 °C。复溶后分装成单次用量，避免反复冻融导致蛋白活性降低。分装品可于–80 °C储存长达3个月。短期使用（≤1周）时，将复溶蛋白储存于4 °C，并添加载体蛋白（如0.1% BSA），以减少因表面吸附造成的损失。
注意：具体浓度、配方详情及推荐工作范围应以每批次（rp365838）随附的质量检验报告（CoA）为准。
应用方案：细胞黏附与同嗜性结合实验
所需材料：重组人CDH4蛋白（rp365838）、96孔细胞培养板、包被缓冲液（含1–2 mM CaCl₂的PBS，pH 7.4）、封闭缓冲液（含1% BSA的PBS）、表达CDH4或互补钙黏蛋白的适当细胞，以及细胞计数试剂。
步骤1 – 板包被：将CDH4蛋白用包被缓冲液稀释至所需包被浓度（需实验确定；通常以1–10 µg/mL为起始范围）。向96孔板每孔加入100 µL蛋白溶液，于4 °C过夜孵育或37 °C孵育2小时。
步骤2 – 封闭：吸去未结合蛋白，每孔加入200 µL封闭缓冲液，室温孵育1小时，以防止细胞非特异性黏附。
步骤3 – 细胞铺种：吸去封闭缓冲液，加入细胞悬液（每孔5 × 10⁴至1 × 10⁵个细胞，溶于补充有1–2 mM CaCl₂的无血清培养基中），于37 °C、5% CO₂条件下孵育30–60分钟。
步骤4 – 洗涤与定量：用PBS轻柔洗涤孔2–3次，去除未黏附细胞。固定黏附细胞后，通过结晶紫染色、荧光法或细胞活力实验进行定量。应设置Ca²⁺螯合（EGTA）阴性对照和仅含BSA的未包被板作为基线黏附对照。
步骤5 – 数据分析：以黏附细胞占加入细胞总数的百分比或相对于对照孔的吸光度值表示黏附结果。统计比较至少应包含生物学三重复。
质量控制与故障排除
质量控制：每批次重组人CDH4蛋白（rp365838）均应附有质量检验报告，记录纯度（通常通过SDS-PAGE评估）、生物活性、内毒素水平及（适用时的）无菌性。收货后，取少量样品在还原性SDS-PAGE胶上电泳，将观察到的分子量条带与CDH4预期值（成熟胞外结构域构建体）进行比对，以确认蛋白完整性。内毒素水平应较低（以CoA为准），以防止在细胞实验中产生混杂炎症反应。
故障排除指南：
- 细胞黏附低或缺失：确认所有实验缓冲液中含有Ca²⁺；确认蛋白未接触EDTA/EGTA。检查包被步骤是否正确执行，蛋白是否未变性（重新进行SDS-PAGE）。
- 高背景（非特异性黏附）：延长封闭时间或提高BSA浓度。优化洗涤强度。使用非黏附聚合物包被板作为阴性对照。
- 蛋白聚集：确保复溶时操作轻柔，未使用涡旋振荡。使用前将复溶原液于4 °C、10,000 × g离心5分钟，去除聚集体。
- 活性随时间下降：尽量减少冻融次数；冻存前分装。对于稀释的工作液，添加BSA载体蛋白（0.1%）。
安全、法规与订购信息
安全性：重组人CDH4蛋白为仅供科研用途（RUO）的试剂，不适用于诊断、治疗或任何临床用途。处理所有重组蛋白时，请遵循标准实验室安全规范：佩戴手套、实验服和护目镜。请查阅安全数据表（SDS）获取本产品的详细危害信息。
法规状态：本产品仅供体外科研使用，未经评估用于人类或动物的药物、食品或医疗器械用途。
订购：重组人CDH4蛋白可通过Aladdin Scientific购买，货号为rp365838。如需了解价格、可用数量及当前库存状态，请联系当地Aladdin Scientific销售代表或访问产品页面。如需大批量或定制服务，请联系技术支持团队。
技术支持：如有应用相关问题、复溶指导或故障排除需求，请联系Aladdin Scientific技术支持，并注明产品货号rp365838及CoA上的批次号。
常见问题
应使用何种缓冲液复溶重组人CDH4蛋白？
使用无菌超纯水或PBS（pH 7.4）复溶CDH4蛋白。对于需要黏附活性的功能实验，所有缓冲液中应补充1–2 mM CaCl₂，因为CDH4介导的黏附严格依赖钙离子。避免使用含EDTA或EGTA的缓冲液，这些试剂会螯合钙离子并消除钙黏蛋白活性。
如何储存重组人CDH4蛋白以维持其活性？
将冻干蛋白储存于–20 °C或–80 °C。复溶后立即分装成单次用量，于–80 °C储存，最长可保存3个月。避免反复冻融，这会逐步降低蛋白活性。对于一周内使用的工作液，添加0.1% BSA作为载体蛋白，储存于4 °C。
重组人CDH4蛋白有哪些推荐应用？
重组人CDH4蛋白适用于细胞黏附实验（板包被形式）、同嗜性钙黏蛋白结合研究、表面等离子体共振（SPR）或基于ELISA的结合动力学分析，以及神经或上皮模型系统中钙黏蛋白介导信号传导的功能研究。本产品仅供体外科研使用。
如何排查CDH4黏附实验中细胞黏附率低的问题？
首先，确认所有实验缓冲液中存在Ca²⁺（1–2 mM CaCl₂），且未引入EDTA或EGTA等螯合剂。核实包被浓度和孵育条件，并通过SDS-PAGE确认蛋白完整性。如怀疑存在聚集，复溶蛋白使用前应于4 °C、10,000 × g离心5分钟。
重组人CDH4蛋白（rp365838）适合体内使用吗？
不适合。重组人CDH4蛋白（rp365838）被指定为仅供科研用途（RUO），未经体内、诊断或治疗应用的测试或批准，不得用于人体或动物。
参考文献
- Shimoyama Y, Tsujimoto G, Kitajima M, Natori M. Identification of three human type-II classic cadherins and frequent heterophilic interactions between different subclasses of type-II classic cadherins. Biochemical Journal. 2000;349(1):159–167. doi:10.1042/bj3490159
- Takeichi M. Cadherin cell adhesion receptors as a morphogenetic regulator. Science. 1991;251(5000):1451–1455. doi:10.1126/science.2006419
- Wheelock MJ, Johnson KR. Cadherin-mediated cellular signaling. Current Opinion in Cell Biology. 2003;15(5):509–514. doi:10.1016/S0955-0674(03)00101-7
产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。
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